Desarrollo de una técnica de ELISA para detectar anticuerpos monoclonales de ratón / Development of an ELISA technique to detect mouse monoclonal antibodies

RESUMEN

Se describe una técnica de ELISA que permite el pesquizaje masivo y rápido de sobrenadantes de cultivos de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales. Se preparan microplacas de 96 pocillos (poliestireno) recubiertos con solución que contiene 5 *g/mL de antisuero de conejo antiinmunoglobulinas de ratón, que se emplean como soporte. Se utilizan 150 *L de una dilución 15 de cada muestra en estudio y como segundo anticuerpo se emplea un antisuero de carnero antiinmunoglobulinas de ratón conjugado con peroxidasa. La peroxidasa enlazada se cuantifica mediante el uso de un sistema peroxidasa-H2 O2-dihidrocloruro de 0-fenilendiamina y lectura en el espectrofotómetro vertical a 492 nm. Como controles positivos se incluyen diluciones de suero normal de ratón y anticuerpos monoclonales purificados (OKT11) y como controles negativos, sobrenadantes de cultivos de células no secretoras de inmunoglobulinas. La técnica permite la detección de inmunoglobulinas de ratón en concentraciones entre 5 y 175 *g/mL