Estudios sobre la producción de un Interferón recombinante alfa humano expresado bajo el control del promotor lac UV5 de Escherichia coli / Research on production of recombinant alpha human interferon expressed by control of lac UV5 promotor of Escherichia coli

RESUMEN

La inserción de un oligonucleótido de 18 pares de bases en el sitio Pvull, ubicado en la región que codifica para el prepéptido del gen de IFN * 2 humano, resultó en un notable incremento en la actividad antiviral producida en E. coli bajo el control de los promotores lac UV5 situado en un plásmido recombinante. El máximo de actividad antiviral específica, cuando se utilizó E. coli HB 101 como célula hospedadora, se produjo en la mitad de la fase exponencial, después de lo cual se observó una marcada caída. Cuando se utilizó E. coli JM 101, que solo permite la síntesis del antiviral en presencia del inductor (IPTG), el máximo se observó una hora y media después de agregado este inductor, cualquiera fuere el punto de la curva de crecimiento. El contenido plasmídico por célula durante el ciclo de crecimiento se mantuvo constante. Cuando se amplificó el número de copias del plásmido por pretratamiento de las bacterias con cloranfenicol, se amplificó la capacidad de síntesis en los puntos iniciales de la curva de crecimiento. La vida media del antiviral en extractos bacterianos crudos fue de 75 minutos a 37-C y 165 minutos a 30-C. La disminución de la temperatura de cultivo de 37-C a 34-C durante la producción, aumentó la velocidad inicial de acumulación del producto, pero el máximo alcanzado en la actividad específica del antiviral no varió