Uso de sondas no radiactivas para la determinación del número de copias de genes y para el diagnóstico de enfermedades moleculares / Use of non radioactive probes to assess gene copy numbers and for the diagnosis of molecular diseases
Arch. biol. med. exp
;
23(2): 119-23, oct. 1990. ilus
Artigo
em Espanhol
| LILACS
| ID: lil-96783
RESUMEN
Se sintetizó un análogo fotoactivable de biotina, el que se utilizó para marcar sondas de ácidos nucleicos. La marca se reveló con dos sistemas de detección avidina-peroxidasa y estreptavidina-fosfatasa alcalina, siendo ésta última la que demostró una mayor sensibilidad. Los plasmidos pSS1.8 y pSP64/U1 fueron fotobiotinilados y utilizados en ensayos de hibridación en gota con DNA extraido de leucocitos humanos. Despues de la incubacion con estreptavidina y fosfatasa alcalina biotinilada, la actividad de la enzima se reveló con un sustrato soluble. Los resultados obtenidos demuestran diferencias cuantitativas consistentes con el número de copias para globina y U1snRNA humano. El plasmido pSS1.8 fotobiotinilado se utilizó para identificar fragmentos de restricción de DNA genómico alterados en un paciente afectado de anemia de células falciformes. El gen de la globina mutado se detectó por digestión del DNA del paciente con la endonucleasa de restricción Dde I, seguido de una hibridación "Southern" con la sonda marcada
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Índice:
LILACS (Américas)
Assunto principal:
Biotina
/
Técnicas In Vitro
/
Sondas de DNA
/
Família Multigênica
Tipo de estudo:
Estudo diagnóstico
Idioma:
Espanhol
Revista:
Arch. biol. med. exp
Assunto da revista:
Biologia
Ano de publicação:
1990
Tipo de documento:
Artigo
/
Documento de projeto
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