Algunas características cinéticas de la beta galactosidasa recombinante libre y conjugada de E. coli empleada en ultramicroELISA / Some kinetic characteristics of recombinant beta galactosidase from E. coli used in ultramicroelisa
Biotecnol. apl
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8(1): 43-52, ene.-abr. 1991. tab
Artigo
em Espanhol
| LILACS
| ID: lil-97049
RESUMEN
En este trabajo presentamos algunas de las características cinéticas de la ß galactosidasa de E. coli recombinante utilizada en la preparación de conjugados para los ensayos inmunoenzimáticos con la tecnología del Sistema Ultramicroanalítico (SUMA). Se estandarizó la técnica de determinación de la actividad enzimática empleando 4 metil-umberiferil- ß-D-galactopiranósido como sustrato y se calculó la correlación con la actividad específica determinada con el sustrato ortonitrofenil-ß-D-galactopiranósido. Se estudió la afinidad enzima-sustrato de la ß galactosidasa libre y conjugada a diferentes proteìnas y aptenos, utilizada en UltramicroELISA (UME) de tipo competitivo y sandwich. Las Km reales y aparentes fueron calculadas según el método de Lineweaver-Burk. La conjugación por el método del glutaraldehido no provocó grandes cambios en la afinidad enzima-sustrato, sin embargo las Km aparentes de los conjugados adsorbidos fueron diferentes en los distintos UME. Los resultados obtenidos pueden ser utilizados en la estandarización de la conjugación y en el montaje de los UME en la SUMA, así como en la interpretación de los fenómenos moleculares que ocurren en los ensayos inmunoenzimáticos
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Índice:
LILACS (Américas)
Assunto principal:
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
/
Beta-Galactosidase
/
Escherichia coli
Idioma:
Espanhol
Revista:
Biotecnol. apl
Assunto da revista:
Biotecnologia
Ano de publicação:
1991
Tipo de documento:
Artigo
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