Apport de la microscopie 2-photon (M2P) dans l’exploration des mécanismes immunitaires après infection par le virus de la grippe d’un modèle murin

ABSTRACT

Introduction Même si depuis 18 mois, le SARS-Cov2 a fait disparaître toute trace des virus respiratoires hivernaux historiques, les virus de la grippe, responsables de plusieurs pandémies durant le 20e siècle et d’une mortalité non négligeable, restent un sujet d’étude d’actualité. De nombreux travaux ont étudié la réaction immune innée post infection grippale mais sous un angle quantitatif en terme cellulaire et cytokinique. Le développement de technologie de microscopie moderne permettant d’étudier un organe entier en profondeur en conservant une excellente résolution mérite d’être évaluée. Peu de données sont disponibles sur l’intérêt de la M2P dans l’exploration du poumon et aucune sur son intérêt dans l’exploration des mécanismes immunitaires post infection grippale. Le but de ce travail est donc d’étudier l’intérêt de la M2P dans l’exploration des dommages structurales pulmonaires et du recrutement cellulaire après infection par le virus de la grippe d’un modèle murin. Méthodes Nous avons infecté des souris C57bl/6J génétiquement modifiées, dont les cellules CD11C+ expriment une protéine fluorescente jaune, par voie inhalée avec Influenzavirus (adapté à la souris) auquel la protéine NS1 a été couplée à une protéine fluorescente rouge. En plus de cette fluorescente endogène, nous avons utilisé un Ac anti F4/80 couplé à une protéine fluorescente bleue pour visualiser les macrophages. Nous avons ensuite étudié les poumons à jour 1, 2, 3, 4, 5 post infection en cytométrie en flux pour quantification cellulaire, dosage cytokinique et exploration en M2P. Nous avons développé un protocole d’imagerie M2P Intravital ex vivo pour évaluer le trafficking cellulaire. Résultats M2P a permis de mettre en évidence des dommages structuraux pulmonaires, de localiser les sites infectés, d’étudier les interactions cellulaires et d’étudier l’évolution dans le temps post infection. Ces résultats enrichissent et complètent les données quantitatives déjà publiées (cytométrie) et permettent d’étudier dans le temps la cinétique et la localisation des lésions et du recrutement cellulaire. De plus, le protocole d’imagerie Intravitale ex vivo a été mis au point. Conclusion En complément des analyses usuelles (cytométrie en flux, dosage cytokines…), M2P est donc une technologie pertinente et prometteuse dans les études précliniques en infectiologie respiratoire nous a permis de décrire une base physiopathologique de référence pour de futures études notamment d’impact des traitements anti-viraux ou anti-inflammatoires.