Biblioteca Virtual en Salud

A emergência de resistência a drogas pode influenciar no controle/eliminação dahanseníase, no entanto, os dados sobre resistência são escassos, nos países endêmicos. Relatosde resistência do M. leprae a drogas da poliquimioterapia se tornaram mais freqüentes após apadronização dos métodos de sequenciamento gênico. A biópsia de lesão é amplamenteutilizada para esse fim, porém pode causar desconforto ao paciente. Como alternativa, o DNAdo bacilo obtido a partir de esfregaços de raspado intradérmico (baciloscopia) corados porZiehl-Neelsen (ZN), tem sido utilizado com sucesso em alguns protocolos de análisemolecular. O objetivo deste estudo foi verificar a viabilidade da utilização de lâminas deraspado intradérmico para detecção de resistência a drogas por métodos moleculares, a partirda extração do DNA do bacilo utilizando-se diferentes protocolos. Para padronização foramutilizadas inicialmente lâminas coradas por ZN a frio, contendo suspensões de bacilos emdiluições seriadas, obtidas de camundongos nude previamente inoculados. Foramselecionadas lâminas coradas contendo esfregaços intradérmicos de pacientes multibacilares,diagnosticados entre 2009/2012, com índice baciloscópicos (IB) de 0 a 5+. Do total de 36pacientes, 29 possuíam duas lâminas, 6 uma lâmina e um três lâminas (n=67). A extração doDNA foi feita com Chelex100(CH) 5% (n=17), 10% (n=17) e com o kit DNaesyQiagen®(DN) (n=33). O excesso de óleo de imersão foi removido com papel absorvente,adicionados 90μl de água ultrapura, os esfregaços removidos com lâmina de bisturi epipetados em microtubo. Em 17 amostras foram adicionados 100μl de CH 5%, incubadas a97°C/10min e então centrifugadas a 13000rpm/2min. Em outras 17 foram adicionados 100μlde CH 10%, incubadas a 97°C/30 min e então centrifugadas a 13000rpm/10min. Apósincubação overnigth/4°C, as amostra foram centrifugadas e o sobrenadante (DNA) transferidopara outro microtubo. A extração pelo DN (n=33) foi realizada de acordo...