Evaluación de cuatro métodos de extracción del ADN de Histoplasma capsulatum y su uso en reacciones de PCR / Evaluation of four Histoplasma capsulatum DNA extraction methods and their use in PCR reactions
Monroy-Vaca, Ernesto Xavier; Fernández-Andreu, Carlos Manuel; Díaz-Rodríguez, Raúl; Martínez-Machín, Gerardo; Illnait-Zaragozí, María Teresa; Perurena-Lancha, Mayda.
Vaccimonitor
; 23(2)mayo-ago. 2014.
Artículo
en Español
| CUMED | ID: cum-58585
Histoplasma capsulatum es un hongo endémico de Cuba y el agente causal de la histoplasmosis. Estamicosis se presenta en forma de brotes epidémicos, afecta a las personas, independiente de su estadoinmunológico. Su diagnóstico se realiza mediante técnicas microbiológicas, serológicas e histológicas quetienen una sensibilidad moderada y son demoradas. Por lo que se hace necesario la estandarización demétodos moleculares rápidos y eficientes para el diagnóstico de esta micosis. Se evaluaron cuatro métodosde extracción del ADN (enzimático, mecánico y dos químicos tiocianato de guanidinio y Tritón X-100) a partirde una cepa de H. capsulatum en fase filamentosa. Se determinó la concentración, la pureza, el rendimientoy la integridad del ADN mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa. Se evaluaron dostécnicas de PCR con el ADN obtenido, con cebadores específicos de especie y otro con un cebador arbitrario. Los mejores resultados de concentración, pureza, rendimiento e integridad se obtuvieron con el método de extracción enzimático. Se logró la estandarización de las PCR con cebadores específicos,confirmándose así las 16 cepas estudiadas como H capsulatum. Con el cebador arbitrario se amplificaronsecuencias diferentes en las cepas ensayadas. Se demostró que el método de extracción enzimática brindóun ADN de buena calidad para su utilización en PCR. Este trabajo facilita el diagnóstico rápido y confiablede H. capsulatum en Cuba y brinda la posibilidad de identificar cepas con estructuras relacionadas genéticamente con los marcadores de patogenicidad y la virulencia, útiles para conformar un inmunógenovacunal(AU)
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CU1.1
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