Implementación de una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para la detección de Mycoplasma genitalium / Implementation of a quantitative-polymerase chain reaction for the detection of Mycoplasma genitalium
El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasma genitalium mediante métodos bacteriológicostradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en laamplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de infecciones causadas por este microorganismo.En Cuba no existen informes de la implementación y utilización de los métodos de reacción en cadena dela polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección y cuantificación de este patógeno. En este trabajo seimplementó una qPCR para la detección y cuantificación de M genitalium mediante la amplificación de unfragmento del gen mgpB que codifica para la proteína adhesina celular, mediante la tecnología LightCycler® (Roche), utilizando los métodos de qPCR SYBR Green I y TaqMan. Se evaluó la especificidad y sensibilidad de dicha PCR utilizando ADN de M genitalium y de otros micoplasmas de origen humanos. Se logró la implementación de ambos métodos de qPCR con un límite de detección de 3,6 geq/μL, siendo la plataforma TaqMan la que mostró mejor eficiencia. Ambos métodos mostraron una alta especificidad para la detección de M genitalium y no se detectaron reacciones cruzadas con otros micoplasmas de origen humano. Se implementó por primera vez en Cuba una qPCR para la detección de M genitalium. El método TaqMan mostró mejor desempeño para la futura aplicación de esta metodología en muestras clínicas. El presente trabajo permitirá realizar estudios de caracterización genética y antigénica de las cepas circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógeno vacunal(AU)
The diagnosis of M genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular methods using DNA amplification are widely used in theinfection diagnosisprocedure. There are no reports in Cuba of the implementation and use of quantitativePolymerase Chain Reactionmethods for the detection and quantification of this pathogen. The aim of thisstudy was to implement a qPCR method for the detection of M genitalium by the amplification of the mgpBadhesin gene using two LightCycler® (Roche) protocols, SYBR Green I and TaqMan. The specifity andsensitivity were evaluated by using DNA of M. genitalium as well as other mycoplasms of human origin. Inboth qPCR-protocols, a limit of detection of 3.6 genome equivalents per μL template (geq/μL) was reached.The TaqMan protocol showed better efficiency than the SYBR Green assay. Both protocols showed a highspecificity for the detection of M. genitalium, without cross-reactions with other mycoplasmas of humanorigin. For the first time in Cuba, a qPCR for detection of M. genitalium was implemented. The TaqManmethod showed a better performance than the SYBR method and should be used for future applications inclinical samples. The present workwill allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating strains in Cuba, useful as vaccine immunogen(AU)