Biblioteca Virtual en Salud

A malária até hoje permanece como uma doença de alta prevalência nas áreas tropicais e subtropicais.Em regiões de transmissão perene, muitos indivíduos após várias infecções podem permanecer assintomáticos com parasitemias submicroscópicas necessitando de técnicas mais sensíveis do que o exame microscópico para a detecção dos parasitas.Essa condição dificulta o diagnóstico individual...Dentro dessa ótica nos propusemos a desenvolver PCRs gênero específicas convencional e em tempo real para a detecção dos parasitas da malária em indivíduos pauciparasitados.Para a padronização e validação das PCRs foram utilizadas 84 amostras de sangue no caso da PCR convencional e 33 dessas amostras no caso da PCR em tempo real,as quais foram coletadas nas cidades de Paragominas(PA)e Porto Velho(RO)...Ambas PCRs apresentaram a mesma especificidade frente a amostras clínicas de HBV e HIV,tendo sido assegurada frente a controles negativos de áreas endêmicas,no caso da PCR convencional.O limite de detecção para ambas PCRs foi de 0,5 parasita/µL.Contrariamente...Considerando as amostras extraídas pela técnica de fenol-clorofórmio,as PCRs de gênero mostraram 100 por cento de concordância de resultados quando comparadas com as PCRs espécie-específicas e com o exame microscópico realizado em nosso laboratório.Entretanto,quando consideramos o exame microscópico realizado em Paragominas,os resultados desse exame concordaram 98,8 por cento(n=84)com a PCR convencional e 96,9 por cento(n=33)com a PCR em tempo real.Assim,embora o tempo de realização do fenol-clorofórmio seja um fator limitante para sua utilização em larga escala,além da sua toxicidade,ele se mostrou como o método mais eficiente para a extração de DNA, seguido pelas técnicas das colunas e de Kawasaki.A escolha entre a técnica de PCR em seu formato convencional e a em tempo real... certamente deverá ser norteada pela disponibilidade de recursos financeiros. Devido ao seu menor custo,a PCR convencional poderá ser utilizada em detrimento da metodologia em tempo real, porém,o uso da PCR em tempo real é capaz de aumentar a confiabilidade dos resultados por minimizar a possibilidade de contaminação pós-amplificação,além de diminuir o tempo na obtenção de resultados e pelo fato da interpretação desses resultados ser independente do observador.(AU)