This study used several diagnostic
methods to examine the occurrence of and molecularly characterize
Cryptosporidium spp. in captive
canaries (
Serinus canaria) in southern and southeastern
Brazil . A total of 498 fecal samples were purified by centrifugal-
flotation using Sheather's
solution .
Cryptosporidium spp.
diagnosis was performed using three diagnostic
methods: malachite green
negative staining ,
nested PCR targeting the
18S rRNA gene , followed by sequencing the amplified fragments, and duplex
real-time PCR targeting the
18S rRNA specific to detect
Cryptosporidium galli and
Cryptosporidium avian
genotype III. The overall positivity for
Cryptosporidium spp. (total samples positive in at least one protocol) from the microscopic
analysis ,
nested PCR and duplex
real-time PCR protocol results was 13.3% (66/498). The positivity rates were 2.0% (10/498) and 4.6% (23/498) for
Cryptosporidium spp. by
microscopy and
nested PCR , respectively. Sequencing of 20 samples amplified by
nested PCR identified C. galli (3.0%; 15/498),
Cryptosporidium avian
genotype I (0.8%; 4/498) and
Cryptosporidium avium (0.2%; 1/498). Duplex
real-time PCR revealed a positivity of 7.8% (39/498) for C. galli and 2.4% (12/498) for avian
genotype III. Malachite green
negative staining differed significantly from
nested PCR in detecting
Cryptosporidium spp. Duplex
real-time PCR was more sensitive than
nested PCR /sequencing for detecting gastric
Cryptosporidium in
canaries .(AU)
Este
trabalho teve como
objetivos determinar a ocorrência e realizar a caracterização molecular de
Cryptosporidium spp. em 498 amostras fecais de
canários (
Serinus canaria) criados em cativeiro, utilizando três
métodos de
diagnóstico análise microscópica pela
coloração negativa com verde malaquita, nested PCR seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados e
PCR duplex em
tempo real específica para
detecção de
Cryptosporidium galli e
Cryptosporidium genótipo III de
aves . A positividade total para
Cryptosporidium spp. (total de amostras positivas em pelo menos um
método de
diagnóstico ) obtida pela
análise microscópica, nested PCR e
PCR duplex em
tempo real foi de 13,3% (66/498). As taxas de positividade para
Cryptosporidium spp. foram 2,0% (10/498) e 4,6% (23/498) por
microscopia e nested PCR, respectivamente. O sequenciamento de 20 amostras amplificadas pela nested PCR identificou C. galli (3,0%; 15/498),
Cryptosporidium genótipo I de
aves (0,8%; 4/498) e
Cryptosporidium avium (0,2%; 1/498). A
PCR duplex em
tempo real revelou positividade de 7,8% (39/498) para C. galli e 2,4% (12/498) para
Cryptosporidium genótipo III de
aves . A
análise microscópica diferiu significativamente da nested PCR para
detecção de
Cryptosporidium spp. A
PCR duplex em
tempo real apresentou maior sensibilidade que a nested PCR/sequenciamento para detectar as espécies/
genótipos gástricos de
Cryptosporidium .(AU)