Antagonistic effect of luzindole in mice treated with melatonin during the infection with the venezuelan equine encephalomyelitis virus.

The effect of Luzindole (LZ) in mice treated with melatonin (MEL) during the infection with the Venezuelan equine encephalomyelitis (VEE) virus was examined. Melatonin (500 microg/Kg b.w.) was administered daily 3 days before and 5 days after the infection. Luzindole (5 mg/Kg b.w.) was injected intraperitoneally 3 days before (pre-infection) or 5 days after (post-infection) the infection. Mortality rates in the infected mice treated both with MEL and LZ were higher than in those treated with MEL alone in which the lowest brain and serum viral titers were detected. On the third post-infection day, viral titers of the MEL + VEE + LZ (pre-infection) group were higher than those of the remainder groups. On the fifth day, viral titers in infected mice were similar to those of the MEL + VEE + LZ (pre-infection) group, but higher than those detected in the MEL + VEE + LZ (post-infection). In conclusion, the protective effect of MEL in mice infected with VEE virus was inhibited by LZ suggesting that this protection is mediated by MEL receptors.

Incremento de interleucina-1 beta, interferon gamma y factor de necrosis tumoral alfa en suero y cerebro de ratones infectados con el virus de encefalitis equina venezolana / Increase of interleukin-1 beta, gamma interferon and tumor necrosis factor alpha in serum and brain of mice infected with the venezuelan equine encephalitis virus

Diversos esfuerzos han sido dirigidos a fin de esclarecer los principales mecanismos de protección y recuperación en las infecciones virales agudas y el posible papel de las citocinas involucradas en la respuesta inmunitaria primaria inducida por una cepa epizoótica del virus de Encefalitis Equina Venezolana (EEV). En el presente estudio se determinaron las concentraciones de citocinas TH1 Interleucina-2 (IL-2) e Interferon-gamma (IFN-g), TH2 Interleucina-4 (IL-4), proinflamatorias (IL-1b) y el Factor de Necrosis Tumoral -alfa (TNF-a) en suero y cerebro de ratones infectados con el virus de EEV a diferentes períodos de infección. Se utilizaron ratones NMRI albinos machos infectados con una suspensión (10 DL50) de la cepa Guajira del virus de EEV, y un grupo control (sin infectar). En los días 1, 3 y 5 post-infección, se extrajo sangre completa de ratones para la obtención de suero y el cerebro previa perfusión, para la obtención de homogeneizados cerebrales. En ambas muestras se determinaron IL-2, IFN-g, IL-4, IL-1b, y TNF-a por la técnica de ELISA. Se observó un incremento significativo (p < 0,01) en suero y homogeneizados cerebrales al 1er, 3er y 5to día post-infección en las concentraciones de IL-1b, IFN-g y TNF-a, al compararlos con el grupo control. La cuantificación de IL-2 e IL-4, no arrojaron diferencias estadísticamente significativas al ser comparados con los controles. Estos resultados sugieren que la IL-1b, IFN-g y TNF-a, podrían estar involucradas en la respuesta inmunitaria temprana al virus de EEV durante la infección primaria.

[Increase of interleukin-1 beta, gamma interferon and tumor necrosis factor alpha in serum and brain of mice infected with the Venezuelan Equine Encephalitis virus]. / Incremento de interleucina-1 beta, interferon gamma y factor de necrosis tumoral alfa en suero y cerebro de ratones infectados con el virus de Encefalitis Equina Venezolana.

Considerable efforts have been directed to clarify the main protective and recovery mechanisms in acute viral infections and, the possible role of the cytokines involved in the primary immune response induced by an epizootic strain of the Venezuelan Equine Encephalitis (VEE) virus. This study examined the levels of TH1 cytokines Interleukin-2 (IL-2) and Interferon-gamma (IFN-gamma), TH2 cytokines Interleukin-4 (IL-4) and proinflammatory cytokines (IL-1beta, TNF-alpha) in serum and brain of mice infected with the VEE virus during different post infection periods. NMRI albino male mice infected with a suspension (10 DL50) of the Guajira strain of the VEE virus, and a control group (without infection) were used. At one, 3 and 5 days post-infection, whole blood and brains were extracted to obtain sera and brain homogenates, respectively. IL-2, IFN-gamma, IL-4, IL-beta and TNF-alpha were determined by ELISA. A significant increment in the levels of IL-1beta, IFN-gamma and TNF-alpha was observed (p<0.01) in serum and brain homogenates at 1, 3 and 5 day post-infection, when compared with the control group. The levels of IL-2 and IL-4 did not show any significant statistical difference when compared to the controls. These results suggest that IL-1beta, IFN-gamma and TNF-alpha, could be involved in the early immunitary response to VEE virus during the primary infection.

In vitro, melatonin treatment decreases nitric oxide levels in murine splenocytes cultured with the venezuelan equine encephalomyelitis virus.

The purpose of this work was to determine the effect of melatonin on the nitric oxide levels in murine splenocytes cultured with the Venezuelan equine encephalomyelitis virus. After incubation, nitric oxide levels were measured by the diazotization assay. Those cultures with the Venezuelan equine encephalomyelitis virus increased nitric oxide levels. Splenocytes infected and treated with 100 and 150 microg/ml of melatonin, decreased significantly the nitric oxide levels when compared to infected and non-treated splenocytes. These findings show that splenocytes infected with the Venezuelan equine encephalomyelitis virus generate important amounts of nitric oxide and suggest that melatonin protects the mice infected with the Venezuelan equine encephalomyelitis virus by a mechanism involving the decreasing of nitric oxide concentrations in tissue.

Contribución del virus sincicial respiratorio y bacterias a la presencia de asma en una población adulta / Contribution of respiratory syncytial virus and bacteria to the prevalence of asthma in an adult population

El Virus Sincicial Respiratorio (VSR) es una de las causas más importantes de enfermedad de las vías respiratorias en infantes y preescolares. El VSR ha sido señalado como factor de riesgo en la aparición del asma bronquial en pacientes pediátricos, pero existen controversias sobre su papel en el asma del adulto. El presente estudio determinó la presencia del antígeno de VSR y bacterias en adultos asmáticos del estado Zulia, Venezuela. Se recolectaron 196 hisopados faríngeos (143 de pacientes asmáticos en crisis y 53 de no asmáticos). El antígeno del VSR fue determinado por la técnica de ELISA y la presencia de bacterias por técnicas bacteriológicas convencionales. En los pacientes asmáticos se encontró una incidencia de VSR de 42,65 por ciento, mientras que en el grupo control no se detectaron antígenos virales. En cuanto a las bacterias, los individuos asmáticos presentaron un mayor porcentaje (84,15 por ciento) de flora transitoria (p<0,001) como Streptococcus pyogenes y Escherichia coli que el grupo no asmático, en el que se aislaron estas bacterias en el 47,2 por ciento de los hisopados. La incidencia de VSR en pacientes asmáticos evidencia que este agente pudiera jugar un papel importante como factor de riesgo en la patogénesis del asma bronquial en el adulto. La presencia incrementada de bacterias patógenas en la microflora de la orofaringe de los pacientes asmáticos podría ser debido a la alteración del tracto bronquial por la infección viral, y consecuentemente constituir otro factor predisponente de esta enfermedad

[Immunity to flavivirus in Amerindian population of the Sierra de Perijá, Zulia state, Venezuela]. / Inmunidad a flavivirus en la población indígena de la Sierra de Perijá, estado Zulia, Venezuela.

Little information is available about Flavivirus infection in amerindian populations in western Venezuela. On this account the activity and seroprevalence of these viruses were determined and the hypothesis concerning the existence of a sylvatic cycle, conditioning the infection transmission of these viruses in indigenous populations, was studied. For this, blood samples from Yukpas (n=144) and Barí (n=110) communities were collected, 35 (Yukpas=25 and Barí=10) of which were processed for viral isolation followed by RT-PCR. The anti-Flavivirus IgG antibodies were determined by ELISA. The results did not show active Dengue cases and the seroprevalence of anti-Flavivirus IgG in the Yukpa population was significantly higher (p < 0.0001) than in the Barí population (43.1% vs. 6.4%). The present study has determined the presence of Flavivirus immunity in Yukpa and Barí populations. These results show a higher prevalence at the former than in the Barí population, which suggests circulation of Flavivirus, mainly in the Yukpa communities, being scarce and sporadic in Barí villages. However, in the indigenous populations studied, the causes or factors that determine the off set of Flavivirus infections in these zones could vary. The detected prevalence between both communities may be due to differences in the structure settlements and social habits. No evidences were found to support the presence of a sylvatic cycle in the Flavivirus transmission, specially of Dengue, in this population.

Inmunidad a flavivirus en la población indígena de la Sierra de Perijá, estado Zulia, Venezuela / Immunity to flavivirus in amerindian population of the Sierra de Perijá, Zulia state, Venezuela

Existe poca información acerca de la infección por Flavivirus en poblados amerindios del occidente de Venezuela, razón por la cual se determinó la actividad y seroprevalencia de los mismos y se analizó la hipótesis que sustenta la existencia de un ciclo selvático de transmisión de estas infecciones en poblaciones indígenas. Para ello, se recolectaron muestras de sangre en comunidades Yukpas (n = 144) y Barí (n = 110). De ellas, 35 muestras (Yukpas = 25 y Barí = 10) fueron procesadas por aislamiento en cultivo celular e identificación viral por RT-PCR. La determinación de anticuerpos IgG anti-Flavivirus se realizó a través de la técnica de ELISA. Los resultados obtenidos no evidenciaron casos activos de dengue y la seroprevalencia para IgG anti-Flavivirus en la población Yukpa fue significativamente mayor (p < 0,0001) que en la población Barí (43,1 vs 6,4 por ciento), evidenciándose inmunidad anti-Flavivirus en ambas poblaciones indígenas. Estos resultados muestran la existencia de una mayor seroprevalencia de Flavivirus en los Yukpas que en los Barí, lo cual sugiere una actividad contínua de estos virus, principalmente en la población Yukpa. Sin embargo, en estas poblaciones las causas o factores que condicionan la presencia o llegada de casos son variadas y, posiblemente, están relacionadas con la estructura de los poblados y los hábitos de intercambio social. No se evidenció característica alguna que apoyara la presencia de un ciclo selvático en la transmisión de estos virus, especialmente del dengue, en esta población

Melatonin induces changes to serum cytokines in mice infected with the Venezuelan equine encephalomyelitis virus.

We determined the influence of melatonin (MLT) on the induction of interleukin (IL)-2, IL-1 beta, IL-4, tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and gamma interferon (IFN-gamma) on mice infected with the Venezuelan equine encephalomyelitis (VEE) virus. Levels of IFN-gamma in the MLT-treated group were significantly increased (P < 0.001) when compared with the control non-infected group from day 1 to 6 post-infection (p.i.), while in infected mice treated with 500 micrograms MLT/kg of bodyweight enhanced levels of IFN-gamma were evident from 4 to 6 days p.i. No differences were detected in the levels of IL-2 between the controls, the infected mice treated with MLT and the infected untreated group, from day 2 p.i. No changes in serum levels of IL-4 were detected. In infected mice treated with MLT, blood levels of IL-1 beta were elevated almost 10-fold from day 1 to day 6 p.i. when compared to the control, the infected and the non-infected MLT-treated mice (P < 0.001). A highly significant rise (P < 0.001) of TNF-alpha was found in infected mice treated with MLT, from day 1 to 6 p.i. when compared to the other groups. A significant rise (P < 0.001) was also evident in the infected non-MLT-treated group and a less pronounced rise in the non-infected mice treated with MLT when compared to controls. The blockade of IFN-gamma and TNF-alpha did not inhibit the protective effect of MLT but when IL-1 beta was neutralized, 100% of the infected mice died suggesting that IL-1 beta induced by MLT treatment is a target cytokine to generate an immune response against the viral infection.

In mice the efficiency of immunization with Venezuelan equine encephalomyelitis virus TC-83 is transiently increased by dehydroepiandrosterone

To determine whether treatment with dehydroepiandrosterone (DHEA) improves the efficiency of immunization against the Venezuelan Equine Encephalomyelitis (VEE) virus, mice were vaccinated with the TC-83 VEE virus. DHEA (10 mg/kg) was administered in a single dose, 4 hours before vaccination. IgM antibody titers were determined at days 7, 14 and 21 post-immunization. Treatment with DHEA increased antibody titers at day 14 after immunization. Mice were challenged with live VEE virus at day 21, and viral titers were plaque assayed in chicken embryo fibroblasts from days 2 to 5 post-infection. After the challenge, viremia decreased on day 2 and brain virus levels were reduced at day 4 in mice treated with DHEA. These results suggest that DHEA treatment could enhance the efficiency of immunization against VEE virus in mice

Evaluación de la inmunidad contra los virus de encefalitis equina venezolana y dengue en la población humana de San Carlos, Municipio Insular Almirante Padilla, Estado Zulia, Venezuela año 1996 / Evaluation of the immunity against the venezuelan equine encephalitis and dengue virus in the human population of San Carlos, Insular Municipality of Almirante Padilla, State of Zulia, 1996

El Municipio Insular Almirante Padilla, históricamente ha sido afectado por las epidemias de encefalitis equina venezolana (EEV), que se han presentado en forma cíclica, principalmente en los Municipios Páez, Mara y Almirante Padilla de la región zuliana. En la última epizoodemia (1995), los informes epidemiológicos reportaron un gran número de casos de EEV en humanos, basados en el diagnóstico clínico-epidemiológico, ocupando así este Municipio, el primer lugar en tasa de ataque por virus de EEV. De forma similar, el dengue se ha definido como una enfermedad endémica afectando diferentes regiones, cuyo agente etiológico tiene antecedente de circulación en la zona en estudio. Con el propósito de evaluar la inmunidad adquirida contra estos virus, se realizó un estudio serológico en la Isla de San Carlos. Se recolectaron 210 muestras de sangre obtenidas al azar, de individuos en un rango de edad comprendido entre < 1 hasta 69 años, con y sin antecedentes de haber presentado sintomatología viral al momento del brote epidémico ocurrido en 1995. Las muestras se clasifican según el sexo y la edad, y fueron analizadas mediante la prueba de ELISA para determinar anticuerpos IgG específicos contra los virus de EEV y dengue. Del total de las muestras procesadas, 116 (55,2 por ciento) fueron positivas para el virus de EEV, afectando uniformemente a los grupos etarios, con ligero predominio del sexo masculino. Así mismo, se determinaron 88 casos (41,9 por ciento) positivos para el virus dengue, cuya frecuencia se ubicó mayormente en el grupo comprendido entre 10 a 19 años de edad. Estos resultados nos permiten sugerir que la epidemia ocurrida en el año 1995, en el Municipio Insular Almirante Padilla, tuvo un carácter dual, al estar implicados en la etiología de los casos febriles ambos virus

Efectos de la cepa atenuada (TC-83) del virus de la encefalitis equina venezolana sobre la transcripción nuclear en la células cerebrales de ratas / Effect of the attenuated strain (TC-83) of the venezuelan equine encephalitis virus of the nuclear transcription in brain cells of rats

En el presente estudio fué evaluado el efecto que produce la cepa atenuada TC-83 del virus de la encefalitis equina venezolana sobre la transcripción nuclear en células cerebrales de ratas. La actividad transcriptiva de las enzimas ARN polimerasas dependientes de ADN (tipos I y II) fue determinada en los núcleos aislados de cerebros de ratas infectadas y controles por medición de la incorporación del (3H) UTP. Simultáneamente se estudió la curva de replicación viral y el suero de las mismas por el método de plaqueo en cultivo primario de fibroblastos de embrión de pollo. La actividad de polimerasa I sólo disminuyó significativamente después de 25 horas de la infección (p<0.05) con respecto a los valores de los controles, mientras que la actividad polimerasa II, se redujo progresiva y significativamente desde los estadíos iniciales de la infección a las 10, 15, 20 y 25 horas post-infección, en comparación con los controles. El virus no se detectó en el cerebro sino después de 25 horas de la infección, con títulos muy bajos (<0.7 Logio U.F.P./ml), mientras que sangre se mostró la presencia viral desde las 10 horas. Nuestros resultados demuestran un marcado efecto temprano (primeras 25 horas) de la cepa atenuada sobre la transcripción nuclear, aún antes que el virus fuera detectado en el cerebro de las ratas infectadas . Este hallazgo sugiere un mecanismo de acción que amerita la realización de estudios complementarios que puedan aclarar la respuesta metabólica cerebral y la patogénesis de las infecciones por el virus de la Encefalitis Equina Venezolana

Encefalitis equina venezolana: determinación de anticuerpos en la población humana del Municipio Miranda, Estado Zulia, Venezuela / Venezuelan equine encephalitis: antibodies determination in the human population of Miranda country, Zulia State, Venezuela

Con el objeto de determinar la prevalencia de anticuerpos contra el virus de la encefalitis equina venezolana en las poblaciones de los Puertos de Altagracia y Sabaneta de Palmas, del Municipio Miranda, del Estado Zulia, en Venezuela, se estudiaron 199 individuos, 57 provenientes de los Puertos de Altagracia y 142 de Sabaneta de Palmas. Estos se clasificaron en mayores y menores de 15 años resultando 85 mayores de 15 años (42,78 por ciento) y 114 menores de 15 años (57,2 por ciento). Las muestras de sangre fueron procesadas para la prueba de Inhibición de la Hemaglutinación, usando antígeno preparado a partir de la cepa Guajira de EEV y a un pH de 6.5. Se encontró que las 57 muestras provenientes de Los Puertos de Altagracia resultaron negativa, mientras que de las 142 muestras de Sabaneta de Palmas, 17 fueron positivas (11,97 por ciento). De estas, solo 1 provenía de un menor de 15 años (5,85 por ciento) y 16 de mayores de 15 años (94,15 por ciento). Los títulos de los positivos fueron superiores a 1:160 en el 80 por ciento de los casos. Habiendo sido Sabaneta de Palmas una de las poblaciones más afectadas por la epidemia ocurrida en 1962 en el Municipio Miranda, y permaneciendo alta la positividad de los afectados con títulos bastante elevados, podría concluirse que esta población puede representar una zona enzoótica similar al Municipio Páez, donde se ha descrito una situación similar de alta positividad y elevados títulos, muchos años después de la ultima epidemia ocurrida en la zona

Encefálitis equina venezolana: determinación de anticuerpos en la población humana del Municipio Miranda, Estado Zulia, Venezuela / Venezuelan equine encephalytis: antibodies determination in the human population of Miranda country, Zulia state, Venezuela.

Con el objeto de determinar la prevalencia de anticuerpos para el virus de la Encefálitis Equina Venezolana en las poblaciones de Los Puertos de Altagracia y Sabaneta de Palmas, del Municipio Miranda, del Estado Zulia, en Venezuela, se estudiaron 199 individuos, 57 provenientes de Los Puertos de Altagracia y 142 de Sabaneta de Palmas. Estos se clasificaron en mayores y menores de 15 años (57,2 por ciento ). Las muestras de sangre fueron procesadas para la prueba de Inhibición de la Hemaglutinación, usando antígeno preparado a partir de la cepa Guajira de EEV y a un pH de 6,5. Se encontró que las muestras provenientes de Los puertos de Altagracia resultaron negativas, mientras que de las 142 muestras de Sabaneta de Palmas, 17 fueron positivas (11,97 por ciento ). De éstas, sólo 1 provenía de un menor de 15 años (5,85 por ciento ) y 16 de mayores de 15 años (94,15 por ciento ). Los títulos de los positivos fueron superiores a 1:160 en el 80 por ciento de los casos. Habiendo sido Sabaneta de Palmas una de las poblaciones más afectadas por la epidemia ocurrida en 1962 en el Municipio Miranda, y permaneciendo alta la positividad de los afectados con títulos bastante elevados, podría concluirse que esta pobación puede representar una zona enzoótica similar al Municipio Páez, donde se ha descrito una situación similar de alta positividad y elevados títulos, muchos años despues de la última epidemia