Protease production and molecular characterization of a protease dipeptidyl-aminopeptidase gene from different strains of Sordaria fimicola / Produção de protease e caracterização molecular de um gene de protease - DPAP (dipeptidil-aminopeptidase) de diferentes cepas de Sordaria fimicola

The current research was designed to reach extracellular protease production potential in different strains of Sordaria fimicola which were previously obtained from Dr. Lamb (Imperial College, London) from North Facing Slope and South Facing Slope of Evolution Canyon. After initial and secondary screening, two hyper-producers strains S2 and N6 were selected for submerged fermentation and cultural conditions including temperature, pH, incubation period, inoculum size, substrate concentration, and different carbon and nitrogen sources were optimized for enzyme production. S2 strain showed maximum protease production of 3.291 U/mL after 14 days of incubation at 30 °C with 7 pH, 1% substrate concentration and 1 mL inoculum, While N6 strain showed maximum protease production of 1.929 U/mL under fermentation optimized conditions. Another aim of the present research was to underpin the biodiversity of genetics and post-translational modifications (PTMs) of protease DPAP (peptidyl-aminopeptidase) in Sordaria fimicola. Five polymorphic sites were observed in amino acid sequence of S. fimicola strains with reference to Neurospora crassa. PTMs prediction from bioinformatics tools predicted 38 phosphorylation sites on serine residues for protease peptidyl-aminopeptidase in S1 strain of S. fimicola while 45 phosphorylation sites on serine in N7 strain and 47 serine phosphorylation modifications were predicted in N. crassa. Current research gave an insight that change in genetic makeup effected PTMs which ultimately affected the production of protease enzyme in different strains of same organism (S. fimicola). The production and molecular data of the research revealed that environmental stress has strong effects on the specific genes through mutations which may cause genetic diversity. S. fimicola is non- pathogenic fungus and has a short life cycle. This fungus can be chosen to produce protease enzyme on a commercial scale.

A pesquisa atual foi projetada para alcançar o potencial de produção de protease extracelular em diferentes cepas de Sordaria fimicola que foram previamente obtidas do Dr. Lamb (Imperial College, Londres) de North Facing Slope e South Facing Slope de Evolution Canyon. Após a triagem inicial e secundária, duas cepas hiperprodutoras S2 e N6 foram selecionadas para fermentação submersa e condições culturais, incluindo temperatura, pH, período de incubação, tamanho do inóculo, concentração de substrato, e diferentes fontes de carbono e nitrogênio foram otimizadas para produção de enzima. A cepa S2 apresentou produção máxima de protease de 3,291 U/mL após 14 dias de incubação a 30 °C com pH 7, concentração de substrato de 1% e inóculo de 1 mL, enquanto a cepa N6 apresentou produção máxima de protease de 1,929 U/mL em condições otimizadas de fermentação. Outro objetivo da presente pesquisa foi sustentar a biodiversidade da genética e modificações pós-tradicionais (PTMs) da protease DPAP (peptidil-aminopeptidase) em Sordaria fimicola. Cinco sítios polimórficos foram observados na sequência de aminoácidos de cepas de S. fimicola com referência a Neurospora crassa. A previsão de PTMs a partir de ferramentas de bioinformática previu 38 locais de fosforilação em resíduos de serina para protease peptidil-aminopeptidase na cepa S1 de S. fimicola, enquanto 45 locais de fosforilação em serina na cepa N7 e 47 modificações de fosforilação de serina foram previstas em N. crassa. A pesquisa atual deu uma ideia de que a mudança na composição genética afetou os PTMs que, em última análise, afetaram a produção da enzima protease em diferentes cepas do mesmo organismo (S. fimicola). A produção e os dados moleculares da pesquisa revelaram que o estresse ambiental tem fortes efeitos sobre genes específicos por meio de mutações que podem causar diversidade genética. S. fimicola é um fungo não patogênico e tem um ciclo de vida curto. Esse fungo pode ser escolhido para produzir enzima protease em escala comercial.

Protease production and molecular characterization of a protease dipeptidyl-aminopeptidase gene from different strains of Sordaria fimicola.

The current research was designed to reach extracellular protease production potential in different strains of Sordaria fimicola which were previously obtained from Dr. Lamb (Imperial College, London) from North Facing Slope and South Facing Slope of Evolution Canyon. After initial and secondary screening, two hyper-producers strains S2 and N6 were selected for submerged fermentation and cultural conditions including temperature, pH, incubation period, inoculum size, substrate concentration, and different carbon and nitrogen sources were optimized for enzyme production. S2 strain showed maximum protease production of 3.291 U/mL after 14 days of incubation at 30 °C with 7 pH, 1% substrate concentration and 1 mL inoculum, While N6 strain showed maximum protease production of 1.929 U/mL under fermentation optimized conditions. Another aim of the present research was to underpin the biodiversity of genetics and post-translational modifications (PTMs) of protease DPAP (peptidyl-aminopeptidase) in Sordaria fimicola. Five polymorphic sites were observed in amino acid sequence of S. fimicola strains with reference to Neurospora crassa. PTMs prediction from bioinformatics tools predicted 38 phosphorylation sites on serine residues for protease peptidyl-aminopeptidase in S1 strain of S. fimicola while 45 phosphorylation sites on serine in N7 strain and 47 serine phosphorylation modifications were predicted in N. crassa. Current research gave an insight that change in genetic makeup effected PTMs which ultimately affected the production of protease enzyme in different strains of same organism (S. fimicola). The production and molecular data of the research revealed that environmental stress has strong effects on the specific genes through mutations which may cause genetic diversity. S. fimicola is non- pathogenic fungus and has a short life cycle. This fungus can be chosen to produce protease enzyme on a commercial scale.

An assessment of Pakistani pharmacy and medical students’ knowledge of black box warnings / Una evaluación del conocimiento de estudiantes de medicina y de farmacia en Pakistán sobre alertas de medicamentos / Uma avaliação sobre o acesso de estudantes paquistaneses de medicina e farmácia ao conhecimento das advertências das caixas de tarja preta

Food and Drug Administration delivers the black box warnings (BBW) which should appear on the leaflets of medicines for patient awareness and the prescription of drugs indicating its highly fatal adverse effects to human body. The aim of this study was to assess the knowledge of Pakistani pharmacy and medical students about BBW. A questionnaire containing contents about BBW was given to the 1st, 2nd and 3rd professional year pharmacy and medical students from different pharmacy and medical institutes. A 76 percent survey response rate was observed. It was observed that student’s knowledge about BBW improves in association with the promotion in professional years of pharmacy and medical education. The results indicate that student’s knowledge about black box increases with the study level. Training in black box warnings should be implemented in pharmacy and medical institutions influencing the meaningful ways to educate and train pharmacy and medical students, and help these students to get recent knowledge about black box warnings so that, in future, they may perform an ethical practice in their respective fields.

La Agencia Reguladora de Alimentos y Medicamentos comunica alertas sobre medicamentos (AM), que debieran aparecer en los prospectos de medicinas, para el conocimiento de los pacientes y la prescripción de medicamentos, indicando sus efectos adversos fatales para el cuerpo humano. El objetivo de este estudio es averiguar el conocimiento de estudiantes de medicina y de farmacia sobre AM. Se entregó un cuestionario con contenidos sobre AM a estudiantes de farmacia y de medicina de primero a tercer año de diferentes institutos médicos y farmacéuticos. Se obtuvo un 76 por ciento de respuesta. Se observó que el conocimiento de los estudiantes sobre AM mejora asociado a la promoción en años profesionales de medicina y farmacia. Los resultados indican que el conocimiento de los estudiantes sobre alerta de medicamentos aumenta con el nivel de estudio. Debería implementarse la formación sobre alerta de medicamentos en farmacia y medicina y ayudar a los estudiantes a tener conocimiento actual sobre alerta de medicamentos de forma que, en el futuro, puedan realizar prácticas éticas en sus campos respectivos.

A Food and Drug Administration disponibiliza as advertências das caixas de tarja preta (BBW) que devem aparecer em bulas de medicamentos para conscientização de pacientes e a prescrição de drogas, indicando seus efeitos adversos altamente fatais para o corpo humano. O propósito deste estudo foi o de de inteirar a cerca do conhecimento de estudantes de medicina e farmácia sobre BBW. Um questionário com conteúdos sobre BBW foi dado a estudantes de farmácia e medicina, do 1º, 2º e 3º ano de diferentes instituições de ensino em farmácia e medicina. Foi observada uma taxa de 76 por cento de resposta dos pesquisados. Observou-se que o conhecimento de estudantes sobre BBW melhora quando se associa à promoção para anos seguintes da educação nas faculdades de farmácia e medicina. Os resultados indicam que o conhecimento dos estudantes sobre as caixas de tarja preta aumenta com o nível de estudo. Treinamento com caixas de tarja preta pode ser implementado em instituições de ensino de farmácia e medicina, influenciando de modo significativo as formas de educação e treinamento de estudantes de farmácia e medicina, e,assim, ajudar estes estudantes a obter conhecimentos recentes sobre medicamentos de tarja preta de modo que, no futuro, elas possam exercer uma prática ética em seus respectivos campos de atuação profissional.