Thawing of cryopreserved sperm from domestic animals: Impact of temperature, time, and addition of molecules to thawing/insemination medium.

In recent decades, there has been a growing interest in optimizing the protocols intended to sperm cryopreservation in domestic animals. These protocols include initial cooling, freezing, and thawing. While different attempts have been devised to improve sperm cryopreservation, the efficiency of this reproductive biotechnology is still far from being optimal. Furthermore, while much attention in improving cooling/freezing, less emphasis has been made in how thawing can be ameliorated. Despite this, the conditions through which, upon thawing, sperm return to physiological temperatures are much relevant, given that these cells must travel throughout the female genital tract until they reach the utero-tubal junction. Moreover, the composition of the media used for artificial insemination (AI) may also affect sperm survival, which is again something that one should bear because of the long journey that sperm must make. Furthermore, sperm quality and functionality decrease dramatically during post-thawing incubation time. Added to that, the deposition of the thawed sperm suspension devoid of seminal plasma in some species during an AI is accompanied by a leukocyte migration to the uterine lumen and with it the activation of immune mechanisms. Because few reviews have focused on the evidence gathered after sperm thawing, the present one aims to compile and discuss the available information concerning ruminants, pigs and horses.

Addition of orange, pineapple and beet juices as extenders for cryopreservation of ram semen / Adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diluidor para criopreservação de sêmen de carneiros

Searching for improvements in semen cryopreservation, natural substances are commonly studied focusing to improve the sperm quality. The aim of this study were evaluated the effect of adding orange, pineapple, and beet juices in different concentrations and combinations to the ram semen cryopreservation extender. Five ejaculates from five adult rams were used. The semen pool was diluted in egg yolk-based extender and mixed with the following 15 treatments (at a final concentration of 400.106 sptz/mL): orange 10% (O10) and 15% (O15); pineapple 10% (P10) and 15% (P15); beet 10% (B10) and 15% (B15); pineapple + orange 10% (PO10) and 15% (PO15); pineapple + beet 10% (PB10) and 15% (PB15); beet + orange 10% (BO10) and 15% (BO15); pineapple + beet + orange 10% (PBO10) and 15% (PBO15); and the control group (CON). Post-thaw in 0.25 mL straws semen quality analysis of cryopreserved semen was performed by CASA and flow cytometry. Analysis of variance (PROC GLM) was carried out and the averages were compared using the SNK test. Pearson's correlation test was also performed. No effect was noted in the addition of juices to the semen extender prior to cryopreservation. Post-thawed, although, statistically similar to the control group, the total motility of the B10 group reached acceptable standards of total motility. In addition, B10 group showed the highest values (p< 0.05) of progressive motility than control group or other treatments. The addition of 10% beet juice to the ram semen extender can improve the cryopreservation of sperm motility.

Em busca de melhorias na criopreservação do sêmen, substâncias naturais são comumente estudadas com o objetivo de melhorar a qualidade do sêmen. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diferentes concentrações e combinações ao diluidor de criopreservação de sêmen ovino. Foram utilizados cinco ejaculados de cinco carneiros adultos. O pool de sêmen foi diluído em diluente à base de gema de ovo e misturado com os seguintes 15 tratamentos (na concentração final de 400x106 sptz/ml): laranja 10% (O10) e 15% (O15); abacaxi 10% (P10) e 15% (P15); beterraba 10% (B10) e 15% (B15); abacaxi + laranja 10% (PO10) e 15% (PO15); abacaxi + beterraba 10% (PB10) e 15% (PB15); beterraba + laranja 10% (BO10) e 15% (BO15); abacaxi + beterraba + laranja 10% (PBO10) e 15% (PBO15); e o grupo controle (CON). Pós-descongelação em palhetas de 0,25 ml a análise da qualidade do sêmen criopreservado foi realizada pelo CASA e citometria de fluxo. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. O teste de correlação de Pearson também foi realizado. Nenhum efeito foi observado na adição de sucos ao diluidor de sêmen antes da criopreservação. Após o descongelamento, embora estatisticamente semelhante ao grupo controle, a motilidade total do grupo B10 atingiu padrões aceitáveis de motilidade total. Além disso, o grupo B10 apresentou os maiores valores (p<0,05) de motilidade progressiva que o grupo controle ou os outros tratamentos. A adição de 10% de suco de beterraba ao diluente de sêmen ovino pode melhorar a criopreservação da motilidade espermática.

Importância do plasma seminal na qualidade e preservação do espermatozoide suíno / Importance of seminal plasma in the quality and preservation of boar sperm

Ao preservar o espermatozoide suíno no estado líquido ou criopreservado, os componentes do plasma seminal (PS) contidos nos ejaculados podem alterar a capacidade de fertilização desses gametas. O PS contém substâncias essenciais para a manutenção da viabilidade e fertilidade dos espermatozoides. No entanto, esses componentes podem ser deletérios dependendo da quantidade ou duração do tempo de contato entre a ejaculação e a remoção do PS durante o processamento do sêmen para a conservação na forma refrigerada ou congelada. Foram identificadas substâncias que prejudicam (principal proteína plasmática seminal PSPI) ou melhoram (espermadesina PSP-I) a capacidade de fertilização dos espermatozoides. Dependendo dos cachaços e dos procedimentos de colheita de sêmen, a remoção do PS pode ser benéfica antes da preservação no estado líquido ou criopreservado. Em alguns casos, o PS removido antes da congelação pode ser adicionado de volta ao diluente de descongelamento, com efeitos positivos no sêmen descongelado e na viabilidade do espermatozoide no trato reprodutivo da porca. Neste texto, há um foco nos diferentes efeitos de PS em amostras de sêmen refrigerado e criopreservado de suínos com ênfase em como PS modula a função e morfologia das células espermáticas antes, durante e após a preservação de forma refrigerada ou criopreservada.(AU)

When preserving sperm in the liquid or cryopreserved state, seminal plasma (SP) components within ejaculates can alter fertilizing capacity of these gametes. The SP contains substances essential for maintenance of sperm viability and fertility; however, these components can be deleterious depending on quantity, or duration of time before there is removal of SP from sperm in semen processing. Substances that impair (Major seminal plasma protein PSPI - boar) or improve (e.g., spermadhesin PSP-I - boar) sper- matozoa fertilizing capacity have been identified. Depending on individual males and semen collection procedures, SP removal may be beneficial before preservation in the liquid or cryopreserved state. In some cases, SP that is removed can be added back to thawing extender with there being positive effects in thawed sperm and for sperm viability in the female reproductive tract. In this review article, there is a focus on different effects of SP in samples of cooled and cryopreserved semen from boar with there being emphasis on how SP modulates the function and morphology of sperm cells before, during, and after preservation in the refrigerated or cryopreserved state.(AU)

Altrenogest during early pregnancy modulates uterine glandular epithelium and endometrial growth factor expression at the time implantation in pigs

This study evaluated the effects of supplying altrenogest from day 6-12 of pregnancy on the endometrial glandular epithelium, corpora lutea (CL) morphology, and endometrial and CL gene expression. A total of 12 crossbred females (Landrace × Large White) were used. The females were assigned to 4 treatments according to a random design with a 2 × 2 factorial arrangement, with two categories (sow or gilt) and two treatments (non-treated and treated with altrenogest). On day 6 of pregnancy, animals were allocated to one of the following groups: non-treated (NT, n = 6; 3 sows and 3 gilts), and (T, n = 6; 3 sows and 3 gilts) treated daily with 20 mg of altrenogest, from day 6-12 of pregnancy. All animals were euthanized on day 13 of pregnancy. All CLs were individually weighed, and their volume were determined. The endometrial glandular density (GD), mean glandular area (MGA), and vascular density (VD) were determined by histomorphometric and immunohistochemical analyses. Endometrium samples were collected and analyzed by qRT-PCR to evaluate the abundance of transcripts for VEGF and IGF-I. Females in the T group had higher MGA (P < 0.05) compared to the NT group. There was no effect of treatment on GD or VD for both experimental groups. Sows in the T group had augmented expression of IGF-I (P < 0.05). Progestagen had no detrimental effect on CL morphology. In conclusion, altrenogest improves the uterine environment during the peri-implantation period in pigs without compromising corpora lutea development.(AU)

Consequências do uso de mães de leite no desempenho reprodutivo em fêmeas suínas / Consequences of the use of nurse sows in the reproductive performance in sows

A cadeia produtiva de suínos tem se tornado cada vez mais eficiente devido aos avanços no melhoramento genético, na nutrição, no emprego das biotecnologias da reprodução, dentre outros fatores. Esse melhoramento tornou as fêmeas suínas hiperprolíficas, capazes de produzir elevado número de leitões nascidos vivos, contudo, as mesmas nem sempre estão aptas a aleitar todos os leitões nascidos, principalmente pela incompatibilidade relacionada ao número de tetos. Deste modo, torna-se necessária a utilização de mães de leites, matrizes desmamadas que serão responsáveis por aleitar leitões oriundos de outras fêmeas. A utilização de mães de leite não é muito empregada no Brasil, contudo alguns trabalhos têm mostrado maior número de leitões nascidos totais e vivos no parto subsequente, sendo necessário mais estudos, a fim de se consolidar essas informações.(AU)

Pig production has become increasingly efficient due to advances in genetic breeding, nutrition, the use of reproductive biotechnologies, among other factors. This improvement made the hyperprolific swine females to be able to produce a high number of live-born piglets, however, it is not always able to suckle all the piglets born, mainly due to the incompatibility related to the number of teats. Thus, it is necessary to use nurse sow, weaned sows that will be responsible for suckling piglets from other females. The use of nurse sows is not widely used in Brazil, but some studies have shown a higher number of piglets born total and alive in the subsequent farrow, and further study is needed in order to consolidate this information.(AU)

Protocolos e possibilidades de criopreservação de sêmen suíno / Protocols and possibilities for cryopreservation of boar semen

Semen cryopreservation may be one of the main biotechnologies of animal reproduction since it provides wide genetic diffusion of superior boars, creation of germplasm bank, as well as improving semen biosecurity, promoting a great impact on global production . However, regarding swine, this biotechnology is still little used, accounting for no more than 1% of the artificial inseminations. This is mainly due to injuries caused during cryopreservation process, and related to the great variability in the semen freezeability between the individuals, making it impossible in commercial use. In this way, the present study aims to highlight the various aspects that are being explored, in order to achieve improvements in the quality of frozen boar semen and consequently make it possible to use it commercially.

Protocolos de inseminação artificial em tempo fixo em leitoas / Fixed-time artificial insemination protocols in gilts

A inseminação artificial (IA) é uma biotécnica reprodutiva amplamente difundida dentro da cadeia suinícola. A mesma surge como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva aliada à rápida difusão de genética superior, o que consequentemente reflete sobre a produtividade dentro do sistema. Com o propósito de aperfeiçoar ainda mais a técnica de IA, o emprego de protocolos hormonais possibilita a sincronização de eventos como o estro e a ovulação, o que passa a fornecer condições para a realização da IA em um momento prédeterminado (IATF; inseminação artificial em tempo fixo). Neste manejo, a detecção do estro deixa de ser necessária, além de permitir a redução do número de doses inseminantes/estro/fêmea, bem como do número de mão de obra necessária. Além disso, a prática pode ser uma excelente alternativa para controlar o ciclo estral de fêmeas de reposição que precisam adentrar grupos de IA em datas pré-definidas dentro da granja. O resultado é o recrutamento e a preparação de um número de leitoas mais próximo ao real necessário, o que reduz os dias não produtivos (DNP) destas fêmeas dentro do sistema de produção e demais gastos associados à sua manutenção.

Artificial insemination (AI) is a reproductive biotechnology widely used within the pig breeding. It appears as an alternative to improve reproductive efficiency accompanied of the rapid diffusion of superior genetics, which consequently reflects on the productivity within the system. In order to further improve AI technique, the use of hormonal protocols allows the synchronization of events such as estrus and ovulation, which provides conditions for AI at a predetermined time (FTAI, fixed-time artificial insemination). In this management, estrus detection is no longer necessary, besides allowing the reduction of the number of seminal doses/estrus/female and of labor required. In addition, the practice may be an excellent alternative to control the estrus cycle of replacement gilts that need to enter AI groups at predefined dates within the farm. The result is the recruitment and preparation of a number of gilts closer to the real needed, which reduces non-productive days (NPD) of these females within the production system and other expenses associated with their maintenance.

Consequências do uso de mães de leite no desempenho reprodutivo em fêmeas suínas / Consequences of the use of nurse sows in the reproductive performance in sows

A cadeia produtiva de suínos tem se tornado cada vez mais eficiente devido aos avanços no melhoramento genético, na nutrição, no emprego das biotecnologias da reprodução, dentre outros fatores. Esse melhoramento tornou as fêmeas suínas hiperprolíficas, capazes de produzir elevado número de leitões nascidos vivos, contudo, as mesmas nem sempre estão aptas a aleitar todos os leitões nascidos, principalmente pela incompatibilidade relacionada ao número de tetos. Deste modo, torna-se necessária a utilização de mães de leites, matrizes desmamadas que serão responsáveis por aleitar leitões oriundos de outras fêmeas. A utilização de mães de leite não é muito empregada no Brasil, contudo alguns trabalhos têm mostrado maior número de leitões nascidos totais e vivos no parto subsequente, sendo necessário mais estudos, a fim de se consolidar essas informações.

Pig production has become increasingly efficient due to advances in genetic breeding, nutrition, the use of reproductive biotechnologies, among other factors. This improvement made the hyperprolific swine females to be able to produce a high number of live-born piglets, however, it is not always able to suckle all the piglets born, mainly due to the incompatibility related to the number of teats. Thus, it is necessary to use nurse sow, weaned sows that will be responsible for suckling piglets from other females. The use of nurse sows is not widely used in Brazil, but some studies have shown a higher number of piglets born total and alive in the subsequent farrow, and further study is needed in order to consolidate this information.

Protocolos e possibilidades de criopreservação de sêmen suíno / Protocols and possibilities for cryopreservation of boar semen

Semen cryopreservation may be one of the main biotechnologies of animal reproduction since it provides wide genetic diffusion of superior boars, creation of germplasm bank, as well as improving semen biosecurity, promoting a great impact on global production . However, regarding swine, this biotechnology is still little used, accounting for no more than 1% of the artificial inseminations. This is mainly due to injuries caused during cryopreservation process, and related to the great variability in the semen freezeability between the individuals, making it impossible in commercial use. In this way, the present study aims to highlight the various aspects that are being explored, in order to achieve improvements in the quality of frozen boar semen and consequently make it possible to use it commercially.(AU)

Protocolos de inseminação artificial em tempo fixo em leitoas / Fixed-time artificial insemination protocols in gilts

A inseminação artificial (IA) é uma biotécnica reprodutiva amplamente difundida dentro da cadeia suinícola. A mesma surge como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva aliada à rápida difusão de genética superior, o que consequentemente reflete sobre a produtividade dentro do sistema. Com o propósito de aperfeiçoar ainda mais a técnica de IA, o emprego de protocolos hormonais possibilita a sincronização de eventos como o estro e a ovulação, o que passa a fornecer condições para a realização da IA em um momento prédeterminado (IATF; inseminação artificial em tempo fixo). Neste manejo, a detecção do estro deixa de ser necessária, além de permitir a redução do número de doses inseminantes/estro/fêmea, bem como do número de mão de obra necessária. Além disso, a prática pode ser uma excelente alternativa para controlar o ciclo estral de fêmeas de reposição que precisam adentrar grupos de IA em datas pré-definidas dentro da granja. O resultado é o recrutamento e a preparação de um número de leitoas mais próximo ao real necessário, o que reduz os dias não produtivos (DNP) destas fêmeas dentro do sistema de produção e demais gastos associados à sua manutenção.(AU)

Artificial insemination (AI) is a reproductive biotechnology widely used within the pig breeding. It appears as an alternative to improve reproductive efficiency accompanied of the rapid diffusion of superior genetics, which consequently reflects on the productivity within the system. In order to further improve AI technique, the use of hormonal protocols allows the synchronization of events such as estrus and ovulation, which provides conditions for AI at a predetermined time (FTAI, fixed-time artificial insemination). In this management, estrus detection is no longer necessary, besides allowing the reduction of the number of seminal doses/estrus/female and of labor required. In addition, the practice may be an excellent alternative to control the estrus cycle of replacement gilts that need to enter AI groups at predefined dates within the farm. The result is the recruitment and preparation of a number of gilts closer to the real needed, which reduces non-productive days (NPD) of these females within the production system and other expenses associated with their maintenance.(AU)

Organic selenium supplementation is cost-effective for increasing the number of seminal doses produced by sexually mature boars

The present experiment was carried out to evaluate the economic viability of supplementing boar diets with organic selenium aiming to increase the number of seminal doses of sexually mature boars. Twelve boars were divided into three groups: control group received 0.3 mg kg−1 Se from sodium selenite (n = 4), inorganic group received 0.5 mg kg−1 Se from sodium selenite (n = 4), and organic group received 0.5 mg kg−1 Se from Sel-PlexTM (Alltech, Inc., n = 4). The experiment was conducted within 10 weeks and analysis was performed fortnightly. No interaction was observed between treatments and weeks for any of the variables analyzed. Boars fed diet supplemented with 0.5 mg kg−1 of organic selenium exhibited a 23% increase in the seminal doses, which resulted in a 37% reduction in the cost of diet per dose produced by boars in this group compared with boars in the inorganic group. It should be pointed out that the total revenue produced by the organic group was 26% higher than the inorganic group. The feeding of organic Se increases the number of seminal doses and reduces the average cost of the diet, demonstrating to be cost-effective.(AU)

Células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS) em animais domésticos e a possibilidade de geração in vitro de gametas / Induced pluripotent stem cells (iPS cells) in domestic animals and the possibility to generate gametes in vitro

Células-tronco são conhecidas pela característica de alto potencial de auto-renovação e podem ser classificadas segundo seu estágio de indiferenciação e perfil epigenético. Células-tronco embrionárias (CTEs) e células-tronco adultas são bastante estudadas e caracterizadas, principalmente nos modelos humano e em camundongos por apresentarem novas possibilidades tanto para a medicina regenerativa quanto para o entendimento do desenvolvimento inicial dos mamíferos. Contudo, a derivação e a manutenção de CTEs em espécies domésticas é desafiadora e apresenta resultados inconsistentes em relação à manutenção da pluripotência in vitro. Nesse contexto, a geração das células pluripotentes induzidas in vitro (células iPS ou iPSCs) é imprescindível para a geração de novas possibilidades na medicina veterinária regenerativa e reprodutiva devido à capacidade de diferenciação destas em uma variedade de outros tipos celulares, inclusive em animais. Assim, esta revisão apresenta a geração das células iPS em animais domésticos, e em especial, recentes estudos sobre as etapas necessárias para a possibilidade de geração de gametas funcionais in vitro, uma importante contribuição na correção de infertilidades, conservação de espécies ameaçadas de extinção e geração de indivíduos geneticamente superiores ou modificados para aplicações agropecuárias ou biomédicas.

Stem cells are widely known for their high potential for self-renewal, being classified according to their stage of undifferentiation and epigenetic profile. Embryonic stem cells (ES) and adult stem cells are already well studied and characterized, mainly in human and mouse models, once they present new possibilities both for regenerative medicine and for understanding the initial development of mammals. However, the derivation and maintenance of ES in domestic species is challenging and presents inconsistent results regarding maintenance of in vitro pluripotency. In this context, the derivation of in vitro induced pluripotent cells (iPS cells or iPSCs) enables new possibilities in regenerative and reproductive veterinary medicine due to their ability to differentiate into a variety of other cell types. Therefore, this review presents the generation of iPS cells in domestic animals, and focuses on recent studies on the steps necessary for the generation of functional gametes in vitro, an important contribution of stem cells aiming the correction of infertility, the conservation of species in risk of extinction and for the generation of genetically superior or modified organisms for agricultural and biomedical applications.

Células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS) em animais domésticos e a possibilidade de geração in vitro de gametas / Induced pluripotent stem cells (iPS cells) in domestic animals and the possibility to generate gametes in vitro

Células-tronco são conhecidas pela característica de alto potencial de auto-renovação e podem ser classificadas segundo seu estágio de indiferenciação e perfil epigenético. Células-tronco embrionárias (CTEs) e células-tronco adultas são bastante estudadas e caracterizadas, principalmente nos modelos humano e em camundongos por apresentarem novas possibilidades tanto para a medicina regenerativa quanto para o entendimento do desenvolvimento inicial dos mamíferos. Contudo, a derivação e a manutenção de CTEs em espécies domésticas é desafiadora e apresenta resultados inconsistentes em relação à manutenção da pluripotência in vitro. Nesse contexto, a geração das células pluripotentes induzidas in vitro (células iPS ou iPSCs) é imprescindível para a geração de novas possibilidades na medicina veterinária regenerativa e reprodutiva devido à capacidade de diferenciação destas em uma variedade de outros tipos celulares, inclusive em animais. Assim, esta revisão apresenta a geração das células iPS em animais domésticos, e em especial, recentes estudos sobre as etapas necessárias para a possibilidade de geração de gametas funcionais in vitro, uma importante contribuição na correção de infertilidades, conservação de espécies ameaçadas de extinção e geração de indivíduos geneticamente superiores ou modificados para aplicações agropecuárias ou biomédicas.(AU)

Stem cells are widely known for their high potential for self-renewal, being classified according to their stage of undifferentiation and epigenetic profile. Embryonic stem cells (ES) and adult stem cells are already well studied and characterized, mainly in human and mouse models, once they present new possibilities both for regenerative medicine and for understanding the initial development of mammals. However, the derivation and maintenance of ES in domestic species is challenging and presents inconsistent results regarding maintenance of in vitro pluripotency. In this context, the derivation of in vitro induced pluripotent cells (iPS cells or iPSCs) enables new possibilities in regenerative and reproductive veterinary medicine due to their ability to differentiate into a variety of other cell types. Therefore, this review presents the generation of iPS cells in domestic animals, and focuses on recent studies on the steps necessary for the generation of functional gametes in vitro, an important contribution of stem cells aiming the correction of infertility, the conservation of species in risk of extinction and for the generation of genetically superior or modified organisms for agricultural and biomedical applications.(AU)

O uso do Resveratrol na conservação do sêmen suíno sob refrigeração / The use of Resveratrol in the preservation of boar semen under refrigeration

A formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) é uma situação inevitável em organismos aeróbicos e são fundamentais em algumas funções do espermatozoide suíno quando em níveis fisiológicos,controlados pelo sistema antioxidante celular. Porém, um desequilíbrio entre a formação de EROs e antioxidantes endógenos, pode potencializar a ação daqueles agentes e acarretar danos em estruturas celulares levando à peroxidação da membrana plasmática, fragmentação de DNA, queda da função mitocondrial e reação acrossomal precoce. O uso de antioxidantes exógenos no sêmen tem apresentado resultados favoráveis, como a redução da concentração de malondialdeido (MDA) nas amostras seminais em decorrência da redução da peroxidação lipídica e, em virtude disto, menores danos espermáticos e melhor conservação destes gametas. À exemplo de antioxidantes não enzimáticos exógenos adicionados aos diluentes, encontram-se os compostos fenólicos, sendo o resveratrol, um antioxidante deste grupo com destaque em pesquisas na área de reprodução devido à sua ação benéfica para o espermatozoide contra as EROs. Por este motivo, a presença do antioxidante resveratrol no meio diluente do sêmen suíno pode se tornar uma realidade para auxiliar na redução dos efeitos do estresse oxidativo decorrente da ação das EROs produzidas e liberadas no ambiente espermático, sobre as ultraestruturas do espermatozoide durante o período de refrigeração, podendo proporcionar uma maior população de células viáveis funcional e estruturalmente por mais tempo.

The formation of reactive oxygen species (ROS) is an unavoidable situation in aerobic organisms and itis essential in some boar sperm functions when at physiological levels, controlled by the cellular antioxidant system. However, an imbalance between the production of ROS and endogenous antioxidants, may potentiate theaction of those agents and result in damage to cell structures leading to peroxidation of the cell membrane, DNA fragmentation, loss of mitochondrial function and early acrosome reaction. The use of exogenous antioxidants in semen has presented favorable results, such as reducing the concentration of malondialdehyde (MDA) in semen samples due to the reduction of lipid peroxidation and, because of this, less sperm damage and better preservation of the gametes. As an example of non-enzymatic exogenous antioxidant added to diluents, the phenolic compound resveratrol has been played an interesting role on reproduction area due to its beneficial action for the spermatozoa against ROS. Therefore, the presence of antioxidant resveratrol in boar extender medium might become a reality to help decreasing the oxidative stress effects induced by the action of ROS produced and released in sperm enviroment during the liquid storage. It might provide a greater amount of viable cells for a longer time of cooling.

O uso do Resveratrol na conservação do sêmen suíno sob refrigeração / The use of Resveratrol in the preservation of boar semen under refrigeration

A formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) é uma situação inevitável em organismos aeróbicos e são fundamentais em algumas funções do espermatozoide suíno quando em níveis fisiológicos,controlados pelo sistema antioxidante celular. Porém, um desequilíbrio entre a formação de EROs e antioxidantes endógenos, pode potencializar a ação daqueles agentes e acarretar danos em estruturas celulares levando à peroxidação da membrana plasmática, fragmentação de DNA, queda da função mitocondrial e reação acrossomal precoce. O uso de antioxidantes exógenos no sêmen tem apresentado resultados favoráveis, como a redução da concentração de malondialdeido (MDA) nas amostras seminais em decorrência da redução da peroxidação lipídica e, em virtude disto, menores danos espermáticos e melhor conservação destes gametas. À exemplo de antioxidantes não enzimáticos exógenos adicionados aos diluentes, encontram-se os compostos fenólicos, sendo o resveratrol, um antioxidante deste grupo com destaque em pesquisas na área de reprodução devido à sua ação benéfica para o espermatozoide contra as EROs. Por este motivo, a presença do antioxidante resveratrol no meio diluente do sêmen suíno pode se tornar uma realidade para auxiliar na redução dos efeitos do estresse oxidativo decorrente da ação das EROs produzidas e liberadas no ambiente espermático, sobre as ultraestruturas do espermatozoide durante o período de refrigeração, podendo proporcionar uma maior população de células viáveis funcional e estruturalmente por mais tempo.(AU)

The formation of reactive oxygen species (ROS) is an unavoidable situation in aerobic organisms and itis essential in some boar sperm functions when at physiological levels, controlled by the cellular antioxidant system. However, an imbalance between the production of ROS and endogenous antioxidants, may potentiate theaction of those agents and result in damage to cell structures leading to peroxidation of the cell membrane, DNA fragmentation, loss of mitochondrial function and early acrosome reaction. The use of exogenous antioxidants in semen has presented favorable results, such as reducing the concentration of malondialdehyde (MDA) in semen samples due to the reduction of lipid peroxidation and, because of this, less sperm damage and better preservation of the gametes. As an example of non-enzymatic exogenous antioxidant added to diluents, the phenolic compound resveratrol has been played an interesting role on reproduction area due to its beneficial action for the spermatozoa against ROS. Therefore, the presence of antioxidant resveratrol in boar extender medium might become a reality to help decreasing the oxidative stress effects induced by the action of ROS produced and released in sperm enviroment during the liquid storage. It might provide a greater amount of viable cells for a longer time of cooling.(AU)

Avaliação da qualidade do sêmen de cachaços: o que é possível ser feito? / Evaluation of the boar semen quality: what can be done?

A utilização de técnicas avançadas para a analise de sêmen de cachaços apesar de ainda ser restrita adeterminados setores do sistema de produção de suínos, tem se tornado aplicável e de extrema importânciadentro, tanto de centrais comerciais de sêmen como nos centros de pesquisas ao redor do mundo. Dentre taistecnologias, pode-se citar as análises computadorizadas da motilidade associada a avaliação da morfometriaespermática, além das avaliações por sondas fluorescentes averiguando-se as integridades dos mais diferentescompartimentos celulares, podendo tais técnicas serem realizadas não apenas por microscopia deepifluorescência, mas também por citometria de fluxo. Entretanto, deve-se destacar a não individualização dastécnicas abordadas, devido a inter-relação das estruturas espermáticas perante o processo de fertilização. Assim,as diversas avaliações devem ocorrer simultaneamente, tendo em vista a necessidade da perfeita integridadedeste conjunto de estruturas para a perfeita fisiologia da célula espermática.

The use of advanced boar semen analysis although it is restricting to certain sectors of the swineproduction system, it is becoming relevant and extremely important in both commercial AI and research centersaround the world. Of all technologies available, one may mention the computerized motility analysis (CASA)combined with sperm morphology (ASMA), and the use of fluorescent probes to verify the integrity of thedifferent cellular compartments by means of epifluorescence microscopy or flow cytometry. However, it shouldbe emphasized the non-individualization of the techniques discussed, due to the necessity of the perfect integrityof this set of structures for the perfect sperm cell physiology.

Avaliação da qualidade do sêmen de cachaços: o que é possível ser feito? / Evaluation of the boar semen quality: what can be done?

A utilização de técnicas avançadas para a analise de sêmen de cachaços apesar de ainda ser restrita adeterminados setores do sistema de produção de suínos, tem se tornado aplicável e de extrema importânciadentro, tanto de centrais comerciais de sêmen como nos centros de pesquisas ao redor do mundo. Dentre taistecnologias, pode-se citar as análises computadorizadas da motilidade associada a avaliação da morfometriaespermática, além das avaliações por sondas fluorescentes averiguando-se as integridades dos mais diferentescompartimentos celulares, podendo tais técnicas serem realizadas não apenas por microscopia deepifluorescência, mas também por citometria de fluxo. Entretanto, deve-se destacar a não individualização dastécnicas abordadas, devido a inter-relação das estruturas espermáticas perante o processo de fertilização. Assim,as diversas avaliações devem ocorrer simultaneamente, tendo em vista a necessidade da perfeita integridadedeste conjunto de estruturas para a perfeita fisiologia da célula espermática.(AU)

The use of advanced boar semen analysis although it is restricting to certain sectors of the swineproduction system, it is becoming relevant and extremely important in both commercial AI and research centersaround the world. Of all technologies available, one may mention the computerized motility analysis (CASA)combined with sperm morphology (ASMA), and the use of fluorescent probes to verify the integrity of thedifferent cellular compartments by means of epifluorescence microscopy or flow cytometry. However, it shouldbe emphasized the non-individualization of the techniques discussed, due to the necessity of the perfect integrityof this set of structures for the perfect sperm cell physiology.(AU)

Recovery of normal testicular temperature after scrotal heat stress in rams assessed by infrared thermography and its effects on seminal characteristics and testosterone blood serum concentration.

Reestablishment of testicular normal temperature after testicular heat stress is unknown and its effect varies widely. The aim of this study was to investigate the impact of scrotal insulation (IN) on testicular temperature and its relation to semen quality and testosterone blood serum concentration. For this, 33 rams were used; 17 submitted to IN for 72 hours (using bags involving the testes) and 16 not submitted to IN (control group). The experiment was performed between August and December 2013 in Pirassununga, Brazil (21°56″13″ South/47°28'24″ West). Seminal characteristics, testosterone blood serum concentration, rectal temperature (RT), respiratory frequency, scrotal superficies mean temperature (SSMT), and eye area mean temperature (EAMT) were analyzed 7 days before IN and 21, 35, 49, 63, and 90 days afterward. Scrotal superficies mean temperature and EAMT were measured by thermography camera FLIR T620. Testosterone was evaluated by radioimmunoassay. Analysis of variance was used to determine the main effects of treatment, time, and treatment-by-time interaction using PROC MIXED of SAS software adding command REPEAT. Pearson correlation test was used to verify correlation between SSMT, EAMT, RT, and respiratory frequency. Significant difference was considered when P ≤ 0.05. At the end of IN, SSMT was higher (P < 0.05) in insulated group (32.26 ± 0.19(o)C) than in control group (30.58 ± 0.18(o)C), and the difference between rectal and testicular (deduced from SSMT) temperatures was 1.12 °C; in the other times of the evaluation this difference was between 2.91 and 4.25 °C in IN group. Scrotal superficies mean temperature was reestablished 24 hours after IN. Rectal temperature and EAMT presented correlation (r = 0.59; P < 0.0001). There was time-by-treatment interaction for total sperm (P = 0.0038) and progressive motility (P = 0.01), abnormal spermatozoa (P < 0.0001), membranes integrity (P < 0.0001), induced thiobarbituric acid reactive substances (TBARSs; P = 0.05), and DNA integrity (P = 0.0004). These semen characteristics were negatively affected 21 days after IN, and excluding induced TBARSs and abnormalities, recovered 35 days afterward; induced TBARSs just were affected after 49 days of IN; sperm abnormalities just recovered after 63 days. Testosterone blood serum concentration was lesser in insulated rams (P = 0.03). Thus, the difference of 1.12 °C between RT and testicular temperature impacts semen quality and testosterone blood serum concentration. Moreover, this study shows that rams can recover testes temperature efficiently toward IN and that infrared thermography is an efficient tool to identify differences on SSMT.

Combined effects feeding restriction and flushing on fertility of gilts inseminated at different estrous cycles / Efeitos combinados da restrição alimentar e flushing sobre a fertilidade de marrãs inseminadas artificialmente em diferentes ciclos estrais

The study evaluated the effect of dietary restriction in prepubertal gilts associated with the use of flushing in the preceding cycle of artificial insemination, 2nd or 3rd estrus on productive performance, number of corpora lutea and fetus, besides the fetus survival rate. A total of 96 gilts were distributed to a completely randomized design with 2x2x2 factorial arrangement of treatments, consisting of: nutritional strategy, ad libitum or restricted feeding, use or not of flushing in the preceding cycle AI, and time of AI, held on the 2nd or 3rd estrus. The age at which gilts expressed the 1st estrus was not influenced by nutritional strategy, but the body weight and weight gain were higher (P 0.05) in gilts submitted to ad libitum feeding. No interactions were observed as treatment effect on number of corpora lutea and fetus survival rate. The number of fetuses in females on ad libitum feeding was not influenced by time of AI, but the females feed restriction showed an increase (P 0.05) in the number of fetuses when inseminated on 3rd estrus. Thus, it is concluded that the use of ad libitum nutritional strategy allows for insemination forward 2nd estrus without reducing the number of fetuses, reducing the non-productive days gilt. However, this strategy reduces the rate of fetal survival until day 35 of gestation(AU)

Foi avaliado o efeito da restrição alimentar na fase pré-púbere associada ao emprego do flushing no ciclo precedente ao da inseminação artificial, sendo realizada no 2 ou 3 estro, sobre o desempenho produtivo, numero de corpos lúteos e de fetos, além da taxa de sobrevivência fetal. Um total de 96 fêmeas foi distribuído em delineamento inteiramente casualizado com arranjo fatorial 2x2x2, sendo considerados os fatores: estratégia nutricional, alimentação ad libitum ou restrita; utilização ou não de flushing no ciclo precedente a IA, e momento da IA, realizada no 2 ou 3 estro, constituindo oito tratamentos. A idade em que as marras manifestaram o 1 estro não foi influenciada pela estratégia nutricional, mas o peso e o ganho de peso foram maiores (P 0,05) na alimentação ad libitum. Não foram observados interação e tão pouco efeito de tratamento no numero de corpos lúteos e a taxa de sobrevivência dos fetos. O numero de fetos em fêmeas mantidas em alimentação ad libitum não foi influenciado pelo momento da IA, contudo as fêmeas em restrição alimentar apresentaram aumento (P 0,05) no numero de fetos quando inseminadas no 3 estro. Desse modo, conclui-se que o emprego da estratégia nutricional ad libitum possibilita adiantar a inseminação para o 2 estro sem redução no numero de fetos, diminuindo os dias não produtivos da marra. Porém, essa estratégia reduz a taxa de sobrevivência fetal até 35º dia de gestação(AU)

Effect of shadow availability at pasture on reproductive traits of Nelore bulls (Bos indicus) raised in southeastern Brazil / Efeitos da disponibilidade de sombra a campo sobre características reprodutivas de touros da raça Nelore (Bos indicus) criados na região Sudeste do Brasil

Solar radiation is responsible for bull body temperature elevation. An alternative to minimize heat stress is to use artificial shade. Thus, this study aimed to evaluate the effect of thermal stress reduction, through shade availability, on reproductive characteristics of Nellore bulls (Bos indicus). For this, ten bulls were divided in: Available artificial shade (AS, n = 5) and Unavailable shade (US, n = 5). Each group was kept in two hectare paddocks, in which shade availability for group AS was artificially created. Animals were submitted to a clinical-reproductive evaluation and seminal analyses. No interaction was observed between treatments (AS and US) and time (8 collections) for all analyzed variables (P>0.05). No significant effect (P > 0.05) of treatment was observed for all parameters analyzed. So, it can be concluded that the absence of shaded areas during summer does not negatively affect reproductive characteristics such as: scrotal circumference, testicular consistency, progressive motility, percentage of rapidly moving cells (Computer Assisted Semen Analysis - CASA), morphology or sperm viability in Nellore bulls raised in southeastern Brazil, considering that results could be different in other regions of the country where average temperature is higher(AU)

A radiação solar é responsável pelo aumento da temperatura corpórea em touros. Uma alternativa para minimizar o estresse térmico é usar sombreamento artificial. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da redução do estresse térmico através da disponibilização de sombra artificial, sobre características reprodutivas de touros da raça Nelore (Bos indicus). Para isso, dez touros foram divididos em: Disponibilidade de sombra artificial (AS, n = 5) e Não-disponibilidade de sombra artificial (US, n=5). Cada grupo foi mantido em piquete de dois hectares cada, no qual a sombra para o grupo AS foi criada artificialmente. Os animais foram submetidos a avaliações clínicas-reprodutivas e análise seminal. Nenhuma interação foi observada entre os tratamentos (AS e US) e o tempo (8 coletas), para todas as variáveis analisadas (P > 0.05). Nenhum efeito significativo (P>0.05) de tratamento foi observado para os parâmetros analisados. Dessa forma, concluiu-se que a ausência de áreas sombreadas, durante o verão, não afetou negativamente as características reprodutivas como: circunferência escrotal, consistência testicular, motilidade progressiva, percentagem de células com movimentos rápidos (Computer Assisted Semen Analisys - CASA), morfologia e viabilidade espermática em touros da raça Nelore criados na região sudeste do Brasil, considerando que esse resultado pode ser diferente em outras regiões do país, onde as temperaturas ambientais são mais elevadas(AU)