Comparison of 1-year healthcare resource utilization and related costs for patients with heart failure in the Chagas and non-Chagas matched cohorts.

Background: Chagas disease is one of the leading causes of heart failure (HF) in Latin Americans, and there are limited data available that examine related costs of care for patients with HF. This study aimed to compare healthcare resource utilization and related costs for patients with HF, with and without Chagas disease. Methods: A prospective matched-cohort study comparing the healthcare costs for patients with HF with Chagas disease and care costs for patients with HF without Chagas disease was conducted between January 2019 and December 2019. Only direct costs have been estimated, including hospitalization costs, medications and other cardiovascular interventions, and clinical and laboratory follow-up for up to 1 year. Results: A total of 80 patients with chronic HF were included in the study. Of the 80 patients, 40 patients in the Chagas cohort and 40 patients in the non-Chagas cohort were matched for age, insurer and sex. From a social security system perspective, the total costs for the two cohorts during the study period were U$970,136. Specifically, the healthcare costs for the Chagas cohort were greater than the total healthcare costs for the non-Chagas group (U$511,931 versus U$458,205; p = 0.6183) Most costs were associated with hospitalizations (65.5% versus 59.6%), with averages of U$12,798.5 and U$11,455.1 per person in the Chagas and non-Chagas groups, respectively. In both the Chagas (51.6%) and non-Chagas cohorts (54.5%), causes of readmission unrelated to HF outweighed causes of readmission related to HF. High incidences of hospital admissions were observed during the rainy (cold) season for both cohorts. Conclusions: Over a 12-month follow-up period, patients with chronic HF and Chagas consume as many healthcare resources as those with chronic HF and without Chagas. These data highlight the considerable and growing economic burden of HF on the Colombian health system.

Intervención psicosocial, bienestar y capital social en comunidades con desventaja socioeconómica / Psychosocial intervention, welfare and social capital in communities with socio-economic disadvantage

Introducción: En Colombia se realizan programas de intervención psicosocial en comunidades con desventaja socioeconómica para mejorar su calidad de vida, sin embargo, no se realizan evaluaciones de impacto para medir su efectividad. Objetivo: Determinar la relación que existe entre el tiempo de exposición a procesos de intervención psicosocial en comunidades en desventaja socioeconómica, con su percepción de bienestar psicológico, bienestar social y capital social, en el área metropolitana de Barranquilla. Métodos: investigación fue de corte explicativo ex post facto, con una muestra de 135 personas mayores de 17 años. Se hizo un análisis de varianza para encontrar la dependencia entre los procesos de intervención y las variables dependientes. Resultados: Se encontró una relación de significancia entre el grupo etario de los participantes y algunas dimensiones del bienestar psicológico, del bienestar social y del capital social. No se encontraron relaciones significativas entre el tiempo de intervención y las variables dependientes mencionadas. Conclusiones: A pesar de la vulnerabilidad del entorno, las comunidades intervenidas participantes del estudio evidenciaron una percepción de bienestar psicológico y social y de valoración positiva de su capital social sin una relación significativa con el tiempo de exposición al trabajo comunitario. Los procesos de intervención psicosocial tienen el potencial suficiente para favorecer la mejora de las condiciones de las personas, grupos o comunidades, pero requieren de la implementación de procesos de evaluación que permitan hacer seguimiento a su impacto(AU)

Introduction: Colombia psychosocial intervention programs are carried out in communities with socioeconomic disadvantage to improve their quality of life; however, no impact's assessments are carried out to measure their effectiveness. Objective: Determine the relation between the time of exposure to psychosocial intervention's processes in communities at socioeconomic disadvantage, and their perception of psychological well-being, social welfare and social capital, in the metropolitan area of Barranquilla. Methods: The research was ex post facto explanatory one, with a sample of 135 people over the age of 17. A variance analysis was done to find the dependency between intervention processes and dependent variables. Results: A relationship of significance was found between the age group of the participants and some dimensions of psychological well-being, social welfare and social capital. No significant relationships were found between the intervention time and the dependent variables mentioned. Conclusions: Despite the vulnerability of the environment, the communities involved in the study demonstrated a perception of psychological and social well-being and positive assessment of their social capital without a significant relationship with the time of exposure to community work. Psychosocial intervention's processes have sufficient potential to promote the improvement of the conditions of individuals, groups or communities, but they require the implementation of assessment processes that allow to follow up on their impact(AU)

Evaluation of nine serological rapid tests for the detection of SARS-CoV-2

[ABSTRACT]. Objective. To evaluate the operative capacity of nine serological rapid tests to detect the IgM/IgG antibodies response in serum from patients with SARS-CoV-2 in different clinical stages. Methods. A cross-sectional study of serological rapid tests was designed to compare the performance of the evaluated immunochromatographic tests for the diagnosis of SARS-CoV-2. A total of 293 samples was used, including negatives, asymptomatic, and symptomatic serum samples. Results. The sensitivity of the evaluated tests was low and moderate in the groups of asymptomatic serum samples and the group of serums coming from patients with less than 11 days since the onset of the symptoms. The specificity for the anti-SARS-CoV-2 antibodies tests ranged between 86.5%-99% for IgM and 86.5%-99.5% for IgG. The sensitivity and the likelihood ratio were different according to the study groups. The usefulness of these tests is restricted to symptomatic patients and their sensitivity is greater than 85% after 11 days from the appearance of symptoms. Conclusions. Serological tests are not an adequate strategy for the identification of asymptomatic and pre-symptomatic patients. Serological rapid tests for the detection of specific anti-SARS-CoV-2 antibodies can be used as a diagnostic aid, but diagnosis must be confirmed by RT-PCR. Rapid tests should be reserved for patients with symptoms lasting more than 11 days.

[RESUMEN]. Objetivo. Evaluar la capacidad operativa de nueve pruebas serológicas rápidas para detectar la respuesta de anticuerpos IgM/IgG en el suero de pacientes con SARS-CoV-2 en diferentes etapas clínicas. Métodos. Se diseñó un estudio transversal de las pruebas serológicas rápidas para comparar su rendimiento respecto del diagnóstico del SARS-CoV-2. Se utilizaron en total 293 muestras, inclusive muestras de suero de pacientes negativos, asintomáticos y sintomáticos. Resultados. La sensibilidad de las pruebas evaluadas fue baja y moderada en las muestras de suero del grupo de pacientes asintomáticos y en el grupo de pacientes con menos de 11 días desde el inicio de los síntomas. La especificidad de las pruebas de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 varió entre 86,5%-99% para la IgM y 86,5%-99,5% para la IgG. La sensibilidad y la razón de verosimilitud (likelihood ratio) fueron diferentes según los grupos de estudio. La utilidad de estas pruebas se limita a los pacientes sintomáticos y su sensibilidad es superior al 85% después de 11 días de la aparición de los síntomas. Conclusiones. Las pruebas serológicas no son una estrategia adecuada para la identificación de los pacientes asintomáticos y presintomáticos. Las pruebas serológicas rápidas para la detección de anticuerpos específicos anti-SARS-CoV-2 pueden ser utilizadas como ayuda diagnóstica, pero el diagnóstico debe ser confirmado por RT-PCR. Las pruebas rápidas deben reservarse para los pacientes con síntomas que duren más de 11 días.

[Giardia duodenalis genotypes found in the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar day care centers and dogs in Ibagué, Colombia]. / Genotipos de Giardia duodenalis en muestras de niños de las guarderías del Instituto Colombiano de Bienestar Familiar y de perros en Ibagué, Colombia.

INTRODUCTION: Eight Giardia duodenalis genotypes (A-H) have been described to date. Genotypes A and B have been isolated from humans and a wide range of mammals; however, genotypes C-H have shown greater host specificity. OBJECTIVE: Identifying G. duodenalis genotypes from cysts in faeces obtained from children attending the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF) day care centres and from dogs in Ibagué by PCR-RFLP targeting both the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes. MATERIALS AND METHODS: Cysts from G. duodenalis positive samples were concentrated, DNA was extracted and the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes were analysed by PCR-RFLP. The MHOM/CO/04/G40 strain was used as positive control (this was obtained from the Grupo de Parasitología at the Instituto Nacional de Salud ). RESULTS: Of the total human samples, 11/23 (48%) were genotyped as A and 12/23 (52%) as B; PCR-RFLP revealed that four canine samples were genotypes C and D, these being host-specific. CONCLUSIONS: Only genotypes associated with human infection (AII, BIII and BIV) were found in the children and host-specific genotypes were observed in canines (C and D). No interaction could be established between animal and human transmission cycles due to the small canine sample size and as the former did not come into contact with children attending ICBF day-care centres.

Genotipos de Giardia duodenalis en muestras de niños de las guarderías del Instituto Colombiano de Bienestar Familiar y de perros en Ibagué, Colombia / Giardia duodenalis genotypes found in the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar day care centers and dogs in Ibagué, Colombia

Introducción. Se han descrito ocho genotipos de Giardia duodenalis, del A al H. Los genotipos A y B se han aislado de humanos y de una gran variedad de mamíferos; sin embargo, los genotipos del C al H han mostrado mayor especificidad de huésped. Objetivo. Identificar los genotipos de G. duodenalis a partir de quistes obtenidos en heces de niños de las guarderías del Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF) y de perros en Ibagué, mediante PCR-RFLP de los genes de la beta giardina y la glutamato deshidrogenasa. Materiales y métodos. Los quistes de las muestras positivas para G. duodenalis fueron sometidos a concentración; se extrajo su ADN y se efectuó el análisis de PCR-RFLP de los genes de la beta giardina y de la glutamato deshidrogenasa. Como control positivo se utilizó la cepa MHOM/CO/04/G40 procedente del Grupo de Parasitología del Instituto Nacional de Salud. Resultados. De las muestras tomadas de niños, 11/23 (48 %) correspondieron al genotipo A y, 12/23 (52 %), al genotipo B. Cuatro muestras de perros presentaron los genotipos C y D, específicos de este huésped. Conclusiones. En los niños solamente se encontraron los genotipos asociados a infecciones humanas (AII, BIII y BIV) y en los perros, los genotipos específicos para este huésped (C y D). Debido al reducido tamaño de las muestras analizadas provenientes de perros, y dado que estos no estuvieron en contacto con los niños de las guarderías del ICBF, no fue posible determinar una interacción entre el ciclo de transmisión de los humanos y el de los animales.

Introduction: Eight Giardia duodenalis genotypes (A-H) have been described to date. Genotypes A and B have been isolated from humans and a wide range of mammals; however, genotypes C-H have shown greater host specificity. Objective: Identifying G. duodenalis genotypes from cysts in faeces obtained from children attending the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF) day care centres and from dogs in Ibagué by PCR-RFLP targeting both the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes. Materials and methods: Cysts from G. duodenalis positive samples were concentrated, DNA was extracted and the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes were analysed by PCR-RFLP. The MHOM/CO/04/G40 strain was used as positive control (this was obtained from the Grupo de Parasitología at the Instituto Nacional de Salud ). Results: Of the total human samples, 11/23 (48%) were genotyped as A and 12/23 (52%) as B; PCR-RFLP revealed that four canine samples were genotypes C and D, these being host-specific. Conclusions: Only genotypes associated with human infection (AII, BIII and BIV) were found in the children and host-specific genotypes were observed in canines (C and D). No interaction could be established between animal and human transmission cycles due to the small canine sample size and as the former did not come into contact with children attending ICBF day-care centres.

Aislamiento de Toxoplasma gondii a partir de líquido cefalorraquídeo de dos pacientes VIH positivos / Isolation of Toxoplasma gondii from cerebrospinal fluid of two human immunodeficiency virus-seropositive patients

Introducción: El aislamiento de T. gondii a partir de líquido cefalorraquídeo permite el diagnóstico confirmatorio de toxoplasmosis cerebral, considerada la segunda infección oportunista más importante en pacientes VIH positivos. Objetivo: Aislar Toxoplasma gondii a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral. Materiales y métodos: Se realizó la inoculación intraperitoneal del sedimento de LCR de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral en ratones ICR, se llevaron a cabo 5 pases sucesivos ciegos hasta la observación de taquizoítos de T. gondii en el exudado peritoneal mediante examen directo y coloración de extendidos con Romanowsky modificado. Resultados: A los 43 días los 4 ratones de trabajo presentaron piloerección, hepato-esplenomegalia, letargia y en el exudado peritoneal se observaron taquizoítos de T. gondii , hallazgo que fue confirmado al examinar los extendidos coloreados con Romanowsky modificado. Estos aislamientos fueron crioconservados y fue confirmada la viabilidad poscongelamiento de los mismos. Conclusiones: A pesar de que las técnicas de detección directa de T. gondii en LCR tienen una baja sensibilidad (38%) el presente trabajo permitió obtener dos aislamientos de T. gondii de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral.

Background: Isolation of T. gondii from cerebrospinal fluid enables confirmatory diagnosis of cerebral toxoplasmosis, considered the second most important opportunistic infection in HIV-positive patients. Objective: To isolate Toxoplasma gondii from samples of cerebrospinal fluid from 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis. Materials and methods: Imprinting control region (ICR) mice were intraperitoneally inoculated with CSF sediment from 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis. Five of the inoculations were performed blind to successive passes. T. gondii tachyzoites were observed in these 5 inoculations in the peritoneal exudate through direct examination of the modified-Romanowsky-stained smears. Results: After 43 days, 4 mice showed piloerection, hepatosplenomegaly and lethargy. The peritoneal exudate exhibited T. gondii tachyzoites, a finding that was confirmed by examining the modified-Romanowsky-stained smears. These isolates were cryopreserved and their viability was confirmed after freezing. Conclusions: Although direct detection techniques of T. gondii in CSF have low sensitivity (38%), this study was able to yield 2 T. gondii isolates in 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis.

Genetic diversity of Giardia intestinalis populations in Colombia.

INTRODUCTION: Giardia intestinalis is a protozoan parasite that causes a gastrointestinal infection known as giardiosis, which is transmitted primarily through fecal-oral contamination. Genetic studies of axenically cultivated Giardia isolates have identified two major genetic groups distributed throughout the world. In the present study 24 native strains of the parasite were analyzed by the RAPD technique (Random Amplified Polymorphic DNA). OBJECTIVE: To determine the level of polymorphism and the complexity of Giardia intestinalis circulating strains in specific areas of Colombia. MATERIALS AND METHODS: The RAPD method was used, as it allows for a quick, simple and reliable analysis that requires no prior knowledge of the genetics of the parasite. A RAPD analysis was conducted on native isolates collected in Colombia between 1997 and 2001, established in continuous cultures. Several primers were tested separately, in order to enhance the capacity for discrimination of the method. RESULTS: Of the 24 strains that were included in the study, 22 were arranged in independent clusters. The strains that were from the same geographic area and collected at about the same time, generally displayed highly similar but distinguishable RAPD patterns. Clones isolated from a strain were analyzed as well, and it was possible to differentiate them molecularly. CONCLUSION: The studied strains showed to belong to genotype A . The results suggest that the Colombian strains studied consist of a heterogeneous mixture of closely related populations.

Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis / Obtention, purification and characterization of IgY polyclonal antibodies, developed in hens,

Introducción. El desarrollo de anticuerpos policlonales requiere de animales de laboratorio, generalmente, el conejo, que deben sangrarse para su obtención. Como alternativa, se han utilizado las gallinas. Objetivo. Desarrollar anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia duodenalis y evaluar diferentes métodos para su purificación a partir de yema de huevo. Materiales y métodos. Se inmunizaron tres gallinas intramuscularmente con trofozoítos del parásito: las inmunizaciones se realizaron a los 0, 15, 30, 45, 60, 90 y 120 días. Se recolectaron huevos en cada etapa de la inmunización y se purificó la IgY por deslipidación (D) y precipitación(P) mediante cinco protocolos diferentes: M1: (P: sulfato de amonio/D: dextrán sulfato-cloruro de calcio), M2: (D: dextrán sulfato-cloruro de calcio/P: sulfato de amonio), M3: (D: cloroformo/ P: sulfato de amonio 50 por ciento), M4: (D: solución A/P:solución B) y M5: (D: cloroformo/P: sulfato de amonio 30 por ciento). Se realizó evaluación inmunoquímica de la IgY anti- Giardia duodenalis mediante inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis e inmunoelectrotransferencia ( Western blot); la pureza de IgY por SDS-PAGE en presencia y ausencia de reductor y la concentración de la inmunoglobulina (mg/mL) por espectrofotometría y densitometría. Resultados. La IgY anti- G. duodenalis mediante evaluación inmunoquímica presentó títulos hasta de 1:32. La inmunoglobulina en ausencia de reductor mostró una banda de 180 kd y en su presencia bandas de 30 y 68 kd, características de sus cadenas liviana y pesada, respectivamente. Las mayores concentraciones de inmunoglobulina se recuperaron con el método dos (M2), 4,6 mg de IgY por mL de yema de partida. Conclusiones. Por su facilidad y economía de producción en gallinas, los anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia así obtenidos podrán utilizarse para desarrollar inmunoensayos que detecten el parásito en eluídos de heces

[Experimental infection of the gerbil (Meriones unguiculatus) by Colombian isolates of Giardia duodenalis]. / Comportamiento de la infección experimental por aislamientos colombianos de Giardia duodenalis en el modelo animal del gerbo (Meriones unguiculatus).

INTRODUCTION: Natural and experimental Giardia infections have been reported from bovines, equines, goats, canines, felines and rodents such as mice, rats and gerbils. The latter have provided successful animal models for Giardia duodenalis and Giardia muris experimental infections. OBJECTIVE: The gerbil model was used to establish the pattern of infection of Colombian Giardia human isolates. MATERIALS AND METHODS: Giardia cysts were obtained from stool specimens of symptomatic giardiasis patients by means of sucrose-percoll gradients. Animal inoculation was performed by gastric intubation and injection with 5 x 10(3) Giardia cysts. The course of infection was established by counting cysts every day and trophozoites weekly throughout a period of 30 days. RESULTS: The pattern of cyst excretion was found to be intermittent. Cysts were released during the second and third weeks of infection but not during the first or fourth weeks. The mean minimal number of cysts released per 2-hr collection period was 79 and the mean maximum number was 17,943. Colonization of the small intestine by trophozoites was observed with a mean number ranging from 15,000 to 6,577,778 trophozoites/ml. DISCUSSION AND CONCLUSIONS: Gerbils inoculated with G. duodenalis isolates obtained from geographical areas outside Colombia resolved the infection between 86 and 114 days after infection, whereas gerbils infected with Colombian G. duodenalis isolates resolved the infection at 30 days. The gerbil proved to be a good animal model for experimental infection with Colombian isolates of G. duodenalis. Experimental Giardia infection of gerbils permit a sufficient yield of cysts and trophozoites to be used as antigens for the immunization of other animals and to obtain Giardia antibodies that could be used for Giardia antigen detection assays in stool specimens.

Comportamiento de la infección experimental por aislamientos colombianos de Giardia duodenalis en el modelo animal del gerbo (Meriones unguiculatus) / Experimental infection of the gerbil (Meriones unguiculatus) by Colombian isolates of Giardia duodenalis

Introducción. Se han informado infecciones naturales y experimentales con Giardia sp. en bovinos, equinos, caprinos, caninos, felinos y roedores como ratones, ratas y gerbos; estos últimos son el modelo más adecuado para estudios de la infección por Giardia duodenalis y Giardia muris.Objetivo. Establecer el comportamiento de la infección con aislamientos colombianos de Giardia duodenalis en el modelo animal del gerbo.ateriales y métodos. Se purificaron mediante gradientes de sacarosa y percoll quistes del parásito obtenidos a partir de heces de pacientes sintomáticos infectados. La inoculación a los animales se realizó mediante sonda gástrica con 5x103 quistes. El curso de la infección se estableció mediante recuento diario de quistes y semanal de trofozoítos durante treinta días. Resultados. La eliminación de quistes presentó un patrón intermitente de excreción, con ausencia en la primera y cuarta semanas de infección, y presencia constante durante la segunda y tercera semanas, en número variable con promedio mínimo de 79 y máximo de 17.943 quistes liberados en heces recolectadas en un período de dos horas. Se observó colonización de los trofozoítos en el intestino delgado, en número que osciló entre 15.000 y 6'577.778 trofozoítos por ml.Conclusiones. En gerbos infectados con aislamientos de Giardia duodenalis circulantes en otras regiones geográficas, la resolución natural de la infección oscila entre 86 y 114 días mientras que los gerbos infectados con aislamientos colombianos del parásito la resuelven al día 30. El gerbo constituye un modelo animal adecuado para la infección con aislamientos colombianos de G. duodenalis. La infección experimental por Giardia en gerbo permite obtener quistes y trofozoítos del parásito en cantidades suficientes con la finalidad de ser utilizados como antígenos para la inmunización de animales y para la obtención de anticuerpos que puedan utilizarse para la detección de antígeno de Giardia en materia fecal

[Obtention, purification and characterization of IgY polyclonal antibodies, developed in hens, directed against Colombian isolates of Giardia duodenalis]. / Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis.

INTRODUCTION: The development of polyclonal antibodies requires laboratory animals, as the usually rabbits, which are bled for obtaining the immunoglobulins. Hens are an alternative to developing IgY polyclonal antibodies. OBJECTIVE: In the current study, hens were used to develop IgY anti-Giardia duodenalis antibodies and to evaluate five protocols for its purification. MATERIALS AND METHODS: Three hens were immunized intramuscularly immunized with Colombian Giardia duodenalis isolates trophozoites on day 0, 15, 30, 45, 60, 90 and 120. The hen eggs were collected before each immunization, and IgY purified from yolk by delipidation (D) and precipitation (P) using five different protocols: M1: (P: ammonium sulfate/D:dextran sulfate-calcium chloride), M2: (D: dextran sulfate-calcium chloride/P: ammonium sulfate), M3: (D: chloroform/P: ammonium sulfate 50%), M4: (D: solution A/P: solution B) and M5: (D: chloroform/P: ammonium sulfate 30%). The immunochemistry evaluation of IgY anti-Giardia duodenalis was assayed by immunodiffusion, counterimmunoelectrophoresis (CIE) and Western blot. The purity of IgY was assayed by SDS-PAGE under reducing and nonreducing conditions. Immunoglobulin concentration (mg/mL) was estimated by spectrophotometry and densitometry. RESULTS: IgY anti-Giardia duodenalis by CIE had titres up to 1:32. SDS-PAGE, without 2-mercaptoethanol showed a 180 kd band characteristic of the whole to IgY and, with 2-mercaptoethanol, two bands of 68 and 30 kd, characteristic of its light and heavy chains, respectively. The greatest concentrations of immunoglobulin were recovered by method two (M2), producing 4.6 mg of IgY per mL of initial egg yolk. CONCLUSIONS: The easy and inexpensive production of IgY anti-Giardia duodenalis in hens is an advantage for using it to develop immunoassays that detect the parasite in fecal eluates.

[Identification of antigens of Colombian Giardia duodenalis isolates recognized by total IgG and subclasses]. / Identificación de antígenos de aislamientos colombianos de Giardia duodenalis reconocidos por IgG total y subclases.

Antigen profiles were described for Giardia duodenalis cysts and trophozoites that are recognized by IgG and its anti-G. dudodenalis subclasses (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). Antigens were identified by Western blot from G. duodenalis cyst and trophozoite isolates. Cysts and trophozoites were each subjected to protein separation by SDS-PAGE. The proteins were then transferred to nitrocellulose membranes by electroimmunoblot, and their antigenicity was determined by exposing them to sera from patients with confirmed diagnosis of G. duodenalis infection. The antigen-antibody reaction was revealed by specific alkaline phosphatase antibody conjugates against IgG, IgG2, IgG3, IgG4: bands were visualized by addition of the substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate and the stain nitro blue tetrazolium. The bands were read and analyzed by linear regression using Quantity One software. Thirty two antigens were simultaneously recognized by total IgG anti-G. duodenalis in the cyst and trophozoite stages. The antigens varied in molecular weight from 22 to 185 kDa. Nineteen antigens were identified by both IgG, and IgG3 anti-G duodenalis, with molecular weights ranging from 42 to 180 kDa. IgG2 and IgG4 did not identify any antigen in either stage. The antigens of molecular weights 27, 30, 31, 33, 45, 49, 57, 78, 89 and 170 kDa are shared with G. duodenalis isolates from other geographical regions of Colombia. The recognition of cyst and trophozoite antigens of Colombian G. duodenalis isolates by IgG, IgG1 and IgG3 anti-G. duodenalis suggested that they are involved in the induction of the host immune response.

[Identification of cyst and trophozoite antigens from Colombian Giardia duodenalis isolates recognized by IgA]. / Identificación de antígenos de quistes y trofozoítos de aislamientos colombianos de Giardia duodenalis reconocidos por IgA.

Little is known about the role of IgA in the immune response against Giardia duodenalis infection. The current study identified the antigens of Colombian G. duodenalis isolates which stimulate the production of IgA anti-G. dudoenalis. Cyst and trophozoite stage proteins were separated by SDS-PAGE and their antigenicity was determined by Western blot. Without 2-mercapto ethanol (2-ME), the protein profile of the cyst stage showed 24 proteins within a molecular weight range of 23-270 kDa; with 2-ME, 35 polypeptides ranging from 22 to 241 kDa were distinguished. The trophozoite stage protein profile without 2-ME was formed by 16 proteins within the range of 24-270 kDa; with 2-ME, 45 proteins were present between 18 and 241 kDa. The identification of 20 and 29 antigens from the cyst and trophozoite stage, respectively, suggested that G. duodenalis stimulates a specific humoral immune response in the human host. The antigens of 31, 57, 110, 133, and 170 kDa recognized by anti-G duodenalis IgA in both cysts and trophozoites corresponded with G. duodenalis isolates from other geographic regions, whereas those of 35, 38, 43, 45, 49, 52, 60, 62, 65, 72, 82, 99, 145, 155, and 185 kDa seemed specific to Colombian isolates. This indicated that antigens of 57, 65, 145, and 170 kDa, recognized by anti-G. duodenalis IgA antibodies in cysts (with frequencies between 82% and 96%) and trophozoites (with frequencies between 86% and 97%) can be considered identification markers for G. duodenalis infections.

Identificación de antígenos de aislamientos colombianos de Giardia dudenalis reconocidos por IgG total y subclases / Antigen identification of Giardia duodenalis Colombian isolates recognized by total IgG and it subclasses

Se conocen investigaciones realizadas sobre la respuesta inmune humoral en giardiosis. Sin embargo, estudios sobre perfiles de antígenos de quistes y de trofozoítos de Giardia duodenalis reconocidos por IgG y subclases (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) anti-G. duodenalis no se han realizado en la misma magnitud. Con el fin de determinar los antígenos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis reconocidos por IgG y sus subclases anti-G. duodenalis, se utilizó la metodología de Western blot. Quistes y trofozoítos del parásito, independientemente, se sometieron a separación de proteínas mediante SDS-PAGE. Las proteínas separadas fueron transferidas a membrana de nitrocelulosa mediante inmunoelectrotransferencia y su antigenicidad determinada confrontando éstas con IgG y sus subclases anti-G. Duodenalis presentes en el suero de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamente. La unión antígeno-anticuerpo se detectó con conjugados anti-inmunoglobulina específicos unidos a fosfatasa alcalina, la cual permitió evidenciar los polipéptidos antigénicos cuando se adicionó el sustrato 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato/azul de nitrotetrazolio. Se leyeron y analizaron las bandas mediante análisis de regresión lineal, utilizando el programa Quantity One(c). Se reconocieron 32 antígenos, simultáneamente en quistes y trofozoítos de aislamientos colombianos del parásito por IgG total anti-G. duodenalis, que oscilaron entre 22-185 kDa y 19 en un rango de 42 a 180 kDa, reconocidos tanto por IgG1 como por IgG3 anti-G. duodenalis. Las IgG2 e IgG4 anti-parásito no reconocieron antígenos en ninguno de los dos estadios. Los antígenos de 27, 30, 31, 33, 45, 49, 57, 78, 89 y 170 kDa son compartidos con aislamientos de G. duodenalis circulantes en otras regiones geográficas. El reconocimiento de antígenos de quistes y trofozoítos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis por IgG, IgG1 e IgG3 anti-G. duodenalis de pacientes infectados sugiere que los antígenos del par sito originan respuesta inmune humoral en el hospedero.

Identificación de antígenos de quistes y trofozoitos de aislamientos colombianos de Giardia duodenalis reconocidos por IgA / Cyst and trophozoite antigen identification in Colombian Giardia duodenalis isolates recognized by IgA

Se conoce poco acerca del papel de la IgA en la respuesta inmune de la giardiosis. El propósito de este trabajo fue identificar los antígenos estimuladores de la producción de IgA anti-Giardia duodenalis de aislamientos colombianos del par sito. Se realizó separación de proteínas de quistes y trofozoítos mediante SDS-PAGE y su antigenicidad se determinó por electroinmunotransferencia. El perfil de proteínas de quistes mostró 24 proteínas en un rango de 23-270 kDa sin 2-mercaptoetanol (2-ME) y 35 polipéptidos en un rango de 22-241 kDa con 2-ME. Los trofozoítos revelaron 16 proteínas en un rango de 24-270 kDa sin 2-ME y 45 proteínas en un rango de 18-241 kDa con 2-ME. La identificación de 20 y 29 antígenos en quistes y trofozoítos de G. duodenalis, respectivamente, permite sugerir que los aislamientos colombianos de G. duodenalis pueden inducir una respuesta inmune humoral específica en el hospedero. Los antígenos de 31, 57, 110, 133 y 170 kDa reconocidos por IgA anti-Giardia simultáneamente en quistes y trofozoítos son compartidos con aislamientos de Giardia circulantes en otras regiones geográficas mientras que los de 35, 38, 43, 45, 49, 52, 60, 62, 65, 72, 82, 99, 145, 155 y 185 kDa son específicos de los aislamientos colombianos. Esto sugiere que los antígenos de 57, 65, 145 y 170 kDa, reconocidos por IgA anti-G. duodenalis en quistes (frecuencias entre 82 por ciento y 98 por ciento) y trofozoítos (frecuencias entre 86 por ciento y 97 por ciento), podrían ser los más indicativos de infección.

Serodiagnóstico de giardiosis: identificación de inmunoglobulina G anti-Giardia duodenalis en suero mediante ELISA / Serodiagnosis of giardiasis: identification of immnunoglobulin G anti-Giardia duodenal in sera by ELISA

El diagnóstico de la infección por Giardia duodenalis se basa en la identificación de quistes o trofozoítos en materia fecal, alcanzado una sensibilidad máxima de 85 por ciento en muestras seriadas, debido a la excreción intermitente de quistes. Aunque la determinación de anticuerpos no permite diferenciar entre una infección pasada y una reciente, sí podría ayudar en el diagnóstico diferencial. El presente estudio tuvo como objetivo estandarizar y evaluar una prueba inmunoenzimática (ELISA) para la detección de anticuerpos tipo IgG anti-Giardia duodenalis en sueros de pacientes con la infección. La preparación del antígeno se hizo a partir de trofozoitos cultivados que, inicialmente, fueron obtenidos del intestino de gerbils (Meriones unguiculatus) infectados experimentalmente con quistes purificados a partir de muestras positivas de materia fecal humana. Para la estandarización y evaluación de la prueba, se emplearon 60 sueros de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamnte ( muestra positivas) y 47 sueros de cordon umbilical recién cortado (muestras negativas). Como conjugado, se utilizó anti-IgG humana ligada a osfatasa alcalina. La concentración óptima de antígeno de trofozoito de G. duodenalis fue de 15µg/ml y las diluciones óptimas de suero y conjugado fueron de 1:25 y 1:400, respectivamente. El valor del punto de corte (absorbancia) fue 0,300. Los parámetros de la prueba fueron: sensibilidad, 98,3 por ciento (intevalo de confianza de 95 por ciento (IC 95 por ciento): 89,9 por ciento - 99,9 por ciento); especificidad, 95,7 por ciento (IC 95 por ciento: 84,3 por ciento - 99,3 por ciento); valor predictivo positivo, 96,7 por ciento (IC 95 por ciento: 87,6 por ciento - 99,4 por ciento), y el valor predictivo negativo, 97, 8 por ciento (IC 95 por ciento: 87,0 por ciento - 99,9 por ciento). La prueba de ELISA descrita contribuirá a mejorar el diagnóstico de giardiosis y podrá ser empleada para estudios epidemiológicos de seroprevalencia