Characterization and location of secretory phospholipase A2 groups IIE, V, and X in the rat brain.

Secretory phospholipases A(2) (sPLA(2)) form a diverse family of enzymes involved in a variety of physiologic and pathologic processes. Common among all sPLA(2) is the ability to cleave the second position of phospholipids, thereby releasing fatty acid and a lysophospholipid. Several sPLA(2) have been cloned and characterized in various tissues and receptors have been identified. In the nervous system, sPLA(2) groups IB, IIA, IIE, IIF, V, and XII have been identified, and binding sites for sPLA(2) have been found. Here, we report sPLA(2)-IIE and sPLA(2)-X in rat brain as well as in neurons in primary culture. We furthermore confirm the presence of sPLA(2)-V in rat brain and demonstrate the presence of sPLA(2)-V in primary neuronal cultures. The distribution of sPLA(2)-IIE, V, and -X seems to be mainly neuronal, with the highest abundance occurring in the cerebral cortex and hippocampus. We also find that sPLA(2)-IIE, -V, and -X are differentially induced by kainic acid. This study supports the concept that sPLA(2) heterogeneity in brain is functionally relevant and responsive to seizures.

El estrés oxidativo y la señal inflamatoria modulan la expresión del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en células humanas del epitelio pigmentario de la retina / Oxidative stress in inflamatory signal modulates the expression of vascular endotelial grouth factor (UEGF) un human epitelial pigmentary cells of the retine

Objetivo: el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF) está expresado en la glía y en las células del epitelio pigmentario de la retina. Citoquinas y factores de crecimiento están asociados con la activacióncelular de función autócrina. La señal proinflamatoria inducida por interleuquina 1 (IL-l) y el estrés oxidativo activan la expresión gen ética de este factor de crecimiento.El objetivo de este trabajo es investigar el efecto de la IL-l y el estrés oxidativo generado por el factor de necrosis tumoral (TNF-a) y el peróxido de hidrógeno (H202) en la expresión del VEGF en células humanas del epitelio pigmen:tario de la retina (ARPE-19).Métodos: las células ARPE-19 son transfectadas por el método DOTAP con el promotor (1,6 kb) VEGF unido a un gen de luciferasa. Despúes de 3 horas de transfección las células fueron lavadas e incubadas porotras 8 a 10 horas antes de agregarles los inductores. Las células fueron incubadas por 6 horas en un medio desprovisto de nutrientes antes de agregarles IL-l ¡3, TNF-a y H2O2, y se incubaron durante 8 horas.La actividad de luciferasa fue medida usando como sustrato a la luciferina. Las células apoptóticas fueron detectadas mediante el uso de un microscópio de fluorescencia confocal usando la tinción Hoechst.Resultados: los resultados obtenidos indican que la IL-l¡3 y el TNF-a aumentan moderadamente la expresión del VEGF en células del ARPE-19. Por otro lado la suma del TNF-a y el H2O2 aumentan considerablemente la expresión del VEGF. La tinción Hoeschst de células transfectadas con el VEGF muestra la apoptósis celular producida por el estrés oxidativo.Conclusiones: diferentes citoquinas y el estrés oxidativo inducen la sobreexpresión del VEGF mediada por diferentes quinasas y factores nucleares en las ARPE-19. Esta expresión puede participar en la apoptosis celular de diferentes patologías retineanas como la retinopatia diabética. El estudio e identificación de esta vía celular puede ser potencialmente útil como blanco...

El estrés oxidativo y la señal inflamatoria modulan la expresión del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en células humanas del epitelio pigmentario de la retina / Oxidative stress in inflamatory signal modulates the expression of vascular endotelial grouth factor (UEGF) un human epitelial pigmentary cells of the retine

Objetivo: el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF) está expresado en la glía y en las células del epitelio pigmentario de la retina. Citoquinas y factores de crecimiento están asociados con la activacióncelular de función autócrina. La señal proinflamatoria inducida por interleuquina 1 (IL-l) y el estrés oxidativo activan la expresión gen ética de este factor de crecimiento.El objetivo de este trabajo es investigar el efecto de la IL-l y el estrés oxidativo generado por el factor de necrosis tumoral (TNF-a) y el peróxido de hidrógeno (H202) en la expresión del VEGF en células humanas del epitelio pigmen:tario de la retina (ARPE-19).Métodos: las células ARPE-19 son transfectadas por el método DOTAP con el promotor (1,6 kb) VEGF unido a un gen de luciferasa. Despúes de 3 horas de transfección las células fueron lavadas e incubadas porotras 8 a 10 horas antes de agregarles los inductores. Las células fueron incubadas por 6 horas en un medio desprovisto de nutrientes antes de agregarles IL-l í3, TNF-a y H2O2, y se incubaron durante 8 horas.La actividad de luciferasa fue medida usando como sustrato a la luciferina. Las células apoptóticas fueron detectadas mediante el uso de un microscópio de fluorescencia confocal usando la tinción Hoechst.Resultados: los resultados obtenidos indican que la IL-lí3 y el TNF-a aumentan moderadamente la expresión del VEGF en células del ARPE-19. Por otro lado la suma del TNF-a y el H2O2 aumentan considerablemente la expresión del VEGF. La tinción Hoeschst de células transfectadas con el VEGF muestra la apoptósis celular producida por el estrés oxidativo.Conclusiones: diferentes citoquinas y el estrés oxidativo inducen la sobreexpresión del VEGF mediada por diferentes quinasas y factores nucleares en las ARPE-19. Esta expresión puede participar en la apoptosis celular de diferentes patologías retineanas como la retinopatia diabética. El estudio e identificación de esta vía celular puede ser potencialmente útil como blanco...(AU)

El estrés oxidativo y la señal inflamatoria modulan la expresión del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en células humanas del epitelio pigmentario de la retina / Oxidative stress in inflamatory signal modulates the expression of vascular endotelial grouth factor (UEGF) un human epitelial pigmentary cells of the retine

Objetivo: el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF) está expresado en la glía y en las células del epitelio pigmentario de la retina. Citoquinas y factores de crecimiento están asociados con la activacióncelular de función autócrina. La señal proinflamatoria inducida por interleuquina 1 (IL-l) y el estrés oxidativo activan la expresión gen ética de este factor de crecimiento.El objetivo de este trabajo es investigar el efecto de la IL-l y el estrés oxidativo generado por el factor de necrosis tumoral (TNF-a) y el peróxido de hidrógeno (H202) en la expresión del VEGF en células humanas del epitelio pigmen:tario de la retina (ARPE-19).Métodos: las células ARPE-19 son transfectadas por el método DOTAP con el promotor (1,6 kb) VEGF unido a un gen de luciferasa. Despúes de 3 horas de transfección las células fueron lavadas e incubadas porotras 8 a 10 horas antes de agregarles los inductores. Las células fueron incubadas por 6 horas en un medio desprovisto de nutrientes antes de agregarles IL-l í3, TNF-a y H2O2, y se incubaron durante 8 horas.La actividad de luciferasa fue medida usando como sustrato a la luciferina. Las células apoptóticas fueron detectadas mediante el uso de un microscópio de fluorescencia confocal usando la tinción Hoechst.Resultados: los resultados obtenidos indican que la IL-lí3 y el TNF-a aumentan moderadamente la expresión del VEGF en células del ARPE-19. Por otro lado la suma del TNF-a y el H2O2 aumentan considerablemente la expresión del VEGF. La tinción Hoeschst de células transfectadas con el VEGF muestra la apoptósis celular producida por el estrés oxidativo.Conclusiones: diferentes citoquinas y el estrés oxidativo inducen la sobreexpresión del VEGF mediada por diferentes quinasas y factores nucleares en las ARPE-19. Esta expresión puede participar en la apoptosis celular de diferentes patologías retineanas como la retinopatia diabética. El estudio e identificación de esta vía celular puede ser potencialmente útil como blanco para el uso de diferentes drogas.(AU)

Expression and location of mRNAs encoding multiple forms of secretory phospholipase A2 in the rat retina.

Low-molecular-weight secretory phospholipases A(2) (sPLA(2)s) are a subgroup of PLA(2)s, which are secreted, bind to receptors, and may act as intercellular signaling modulators. At least 10 different groups have been characterized in mammals, and there is expanding evidence of the significance of sPLA(2)s in neuronal signaling and survival [Kolko et al. (1996) J. Biol. Chem. 271: 32722-32728]. To date, no retinal sPLA(2)s have been cloned or characterized. We evaluated the existence and abundance of sPLA(2) subtypes in rat retina and explored their possible involvement in light-induced retinal damage. We designed primers to identify the sPLA(2)s in rat retina, based on known sequences of sPLA(2)-specific mRNAs in other tissues. RNA was isolated from rat retina, and cDNA was produced and used for PCR cloning to identify the novel subtypes of sPLA(2). Our study revealed the presence of mRNAs encoding sPLA(2)-IB, -X, -V, -IIE, -IIA, and -IIF in the retina, and quantification by real-time PCR revealed different abundances of the sPLA(2)s. We showed a time-dependent gene induction of sPLA(2)-X, -IB, and -V in light-induced retinal damage. We further explored the location of sPLA(2)-IB by in situ hybridization and immunohistochemistry. This study is the first to reveal the presence, abundance, and induction of mRNAs encoding sPLA(2)s in rat retina. We suggest that these enzymes are themselves intercellular signaling modulators of retinal cell function and perhaps also of retinal degeneration.