Protection Efficacy of Recombinant HVT-ND-LT and the Live Attenuated Tissue Culture Origin Vaccines Against Infectious Laryngotracheitis Virus When Administered Individually or in Combination.

Infectious laryngotracheitis (ILT) is a respiratory disease that causes significant economic losses to the poultry industry. Control of the disease is achieved by vaccination and implementation of biosecurity measures. The use of bivalent and trivalent recombinant herpesvirus of turkey (rHVT) vaccines expressing infectious laryngotracheitis virus (ILTV) genes has increased worldwide. In the United States, vaccination programs of long-lived birds (broiler breeders and commercial layers) against ILT include immunizations with either HVT recombinant vector vaccines, in ovo or at hatch, or live attenuated vaccines administered via drinking water (chicken embryo origin [CEO]) or eye drop (tissue culture origin [TCO]). The efficacy of bivalent rHVT-LT at hatch followed by drinking water or eye-drop CEO vaccination has been shown to provide more robust protection than rHVT-LT alone. The objective of this study was to evaluate the protection efficacy of a commercial trivalent rHVT-ND-LT when administered at 1 day of age followed by TCO vaccination via eye drop at 10 wk of age. Groups vaccinated with only rHVT-ND-LT or TCO, the combination of rHVT-ND-LT + TCO, and one nonvaccinated group of chickens were challenged with a virulent ILTV strain at 15 wk of age. After challenge, mortalities were prevented only in the group of chickens vaccinated with the rHVT-ND-LT + TCO. Clinical signs of the disease and challenge virus replication in the trachea were significantly reduced for both the rHVT-ND-LT + TCO- and TCO-vaccinated groups of chickens. To assess challenge virus transmission, contact-naive chickens were introduced to all vaccinated groups immediately after challenge. At 8 days postintroduction, infection of contact-naive chickens was evidenced in those introduced to the rHVT-ND-LT and TCO group but prevented in the rHVT-ND-LT + TCO group. Overall, these results indicated that compared to rHVT-ND-LT or TCO when administered alone, the rHVT-ND-LT + TCO vaccination strategy improved protection against disease and reduced shedding of the challenge virus.

Eficacia protectora de las vacunas recombinantes HVT-ND-LT y las vacunas con virus vivo atenuado con origen en cultivo de tejidos contra el virus de la laringotraqueítis infecciosa cuando son administradas individualmente o en combinación. La laringotraqueítis infecciosa (ILT) es una enfermedad respiratoria que causa importantes pérdidas económicas a la industria avícola. El control de la enfermedad se logra mediante la vacunación y la implementación de medidas de bioseguridad. El uso de vacunas con el herpesvirus de pavo recombinante (rHVT) bivalentes y trivalentes que expresan genes del virus de la laringotraqueítis infecciosa (ILTV) ha aumentado en todo el mundo. En los Estados Unidos, los programas de vacunación de aves de larga vida (reproductoras pesadas y aves de postura comerciales) contra la laringotraqueítis incluyen inmunizaciones con vacunas con vector HVT recombinante, ya sea in ovo o al día de edad en la planta incubadora, o la aplicación de vacunas vivas atenuadas administradas a través del agua de bebida (origen en embrión de pollo [CEO]) o por gota ocular (origen en cultivo de tejidos [TCO]). Se ha demostrado que la eficacia de la vacuna rHVT-LT bivalente aplicada al día de edad en incubadora, seguida de la inmunización con la vacuna CEO en el agua de bebida o por gota ocular, proporciona una protección más sólida que la aplicación únicamente de la vacuna rHVT-LT. El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia protectora de una vacuna recombinante rHVT-ND-LT trivalente comercial cuando se administró al día de vida seguido de la vacunación con la vacuna TCO mediante gota ocular a las 10 semanas de edad. Los grupos vacunados únicamente con la vacuna rHVT-ND-LT, con TCO, la combinación con rHVT-ND-LT + TCO y un grupo de pollos no vacunados fueron desafiados con una cepa virulenta del virus de la laringotraqueítis a las 15 semanas de edad. Después del desafío, se previno la mortalidad únicamente en el grupo de pollos vacunados con la combinación rHVT-ND-LT + TCO. Los signos clínicos de la enfermedad y la replicación del virus de desafío en la tráquea se redujeron significativamente en los grupos de pollos vacunados con la combinación rHVT-ND-LT + TCO y con la vacuna TCO. Para evaluar la transmisión del virus de desafío, pollos sin contacto previo al virus se introdujeron en todos los grupos vacunados inmediatamente después del desafío. A los 8 días posteriores a la introducción, se evidenció la infección de los pollos sin contacto previo que se introdujeron en los grupos que recibieron únicamente la vacuna rHVT-ND-LT o la vacuna TCO, pero se previno en el grupo con la combinación rHVT-ND-LT + TCO. En general, estos resultados indicaron que, en comparación con las vacunas rHVT-ND-LT o TCO cuando se administran solas, la estrategia de vacunación rHVT-ND-LT + TCO mejoró la protección contra la enfermedad y redujo la diseminación del virus de desafío.

Comparative genomic analysis of Campylobacter hepaticus genomes associated with spotty liver disease, Georgia, United States.

Campylobacter hepaticus has re-emerged as an important cause of disease in egg laying birds worldwide, resulting in morbidity, mortality, and significant losses in eggs for the breeding and table egg laying industries. Although birds may appear asymptomatic, the disease is characterized by spots on the liver of birds and histopathological analysis reveals multifocal fibrogranulocytic necrotizing hepatitis microscopically. The re-emergence of C. hepaticus may be linked with housing practices as the disease appears more prevalent in pasture raised birds with outside exposure. Here we describe, the whole genome sequences and comparative analysis of four C. hepaticus genomes associated with an outbreak on pasture raised breeders from a farm in Georgia, United States. All four genomes were relatively similar in size and virulence genes harbored. Using these genomes, comparison with current C. hepaticus genomes available in NCBI and other databases and other members of the Campylobacter species was carried out. Using current tools available, virulence gene factor content was compared, and it was found that different tools lead to different numbers of factors identified. The four genomes from this study were relatively similar to C. hepaticus HV10 the type strain from Australia but differed from the other sequenced US strains from Iowa and Florida. C. hepaticus was found to have an overall lower gene content for genes associated with virulence and iron acquisition compared to other Campylobacter genomes and appears to cluster differently than UK genomes on phylogenetic analysis, suggesting the emergence of two lineages of C. hepaticus. This analysis provides valuable insight into the emerging pathogen C. hepaticus, its virulence factors and traits associated with disease in poultry production in the US, potentially providing insight into targets for its control and treatment for laying birds. Our analysis also confirms genes associated with iron acquisition are limited and the presence of the multidrug efflux pump CmeABC in C. hepaticus which may promote survival and persistence in the host niche - the chicken liver/bile. One unique aspect of this study was the finding of a close genetic relationship between C. hepaticus and Campylobacter fetus species and evidence of genome reduction in relation to host niche specificity.

Campylobacter hepaticus in the Production Environment and Stagnant Water as a Potential Source of C. hepaticus Causing Spotty Liver Disease in Free-Range Laying Hens in Georgia, United States.

Spotty liver disease (SLD) has emerged as an important cause of disease in egg-producing flocks in countries such as the United Kingdom and Australia and has emerged in the United States. The organisms implicated in SLD include Campylobacter hepaticus and, more recently, Campylobacter bilis. These organisms have been found to cause focal lesions on the livers of infected birds. Campylobacter hepaticus infection results in reduced egg production, decreased feed consumption resulting in reduced egg size, and increased mortality of highly valuable hens. In the fall of 2021, birds from two flocks (A and B) of organic pasture-raised laying hens were submitted to the Poultry Diagnostic Research Center at the University of Georgia with a history suspicious of SLD. Postmortem examination of Flock A found 5/6 hens had small multifocal lesions on the liver and were PCR positive for C. hepaticus from pooled swab analysis of samples of the liver and gall bladder. Necropsy of Flock B found 6/7 submitted birds had spotty liver lesions. In pooled bile swabs, 2/7 hens from Flock B were also PCR positive for C. hepaticus. A follow-up visit to Flock A was scheduled 5 days later, as well as a visit to a flock where SLD has not been reported (Flock C), which was used as a comparative control. Samples of the liver, spleen, cecal tonsil, ceca, blood, and gall bladder were collected from six hens per house. Additionally, feed, water nipples, and environmental water (stagnant water outside the house) were collected from the affected farm and the control farm. To detect the organism, all samples collected were subjected to direct plating on blood agar and enrichment in Preston broth with incubation under microaerophilic conditions. After multiple phases of bacterial culture purification from all samples, single bacterial cultures displaying characteristics of C. hepaticus were tested by PCR to confirm identity. From Flock A, liver, ceca, cecal tonsils, gall bladder, and environmental water were PCR positive for C. hepaticus. No positive samples were detected in Flock C. After another follow-up visit, 10 wk later, Flock A was PCR positive for C. hepaticus from gall bladder bile and feces and one environmental water sample displayed a weak positive reaction for C. hepaticus. Flock C was PCR negative for C. hepaticus. To gain more knowledge about C. hepaticus prevalence, a survey of 6 layer hens from 12 different layer hen flocks between the ages of 7 to 80 wk, raised in different housing systems, were tested for C. hepaticus. The 12 layer hen flocks were culture and PCR negative for C. hepaticus. Currently, there are no approved treatments for C. hepaticus and no vaccine is available. The results of this study suggest that C. hepaticus may be endemic in some areas of the United States, and free-range laying hens may be exposed from the environment/stagnant water in areas where they range.

Campylobacter hepaticus en el ambiente de producción avícola y en el agua estancada como fuente potencial de C. hepaticus que causante de la necrosis hepática focal en gallinas ponedoras de corral en Georgia, Estados Unidos. La necrosis hepática focal (SLD, por sus siglas en inglés) se ha convertido en una causa importante de enfermedad en las parvadas productoras de huevo en países como el Reino Unido y Australia y también ha surgido en los Estados Unidos. Los organismos implicados en necrosis hepática focal incluyen Campylobacter hepaticus y, más recientemente, Campylobacter bilis. Se ha encontrado que estos organismos causan lesiones focales en el hígado de las aves infectadas. La infección por C. hepaticus da como resultado una reducción en la producción de huevos, una disminución en el consumo de alimento, lo que resulta en una reducción del tamaño de los huevos y una mayor mortalidad de gallinas de alto valor económico. En el otoño del 2021, aves de dos lotes (A y B) de gallinas de postura criadas en pastos orgánicos se enviaron al Centro de Diagnóstico e Investigación Avícolas de la Universidad de Georgia con antecedentes sospechosos de necrosis hepática focal. En el examen post mortem de la parvada A se encontró que cinco de un total de seis gallinas tenían pequeñas lesiones multifocales en el hígado y fueron positivas mediante PCR para C. hepaticus a partir de un análisis de hisopos combinados de muestras del hígado y de la vesícula biliar. La necropsia de la parvada B encontró que seis de un total de siete aves enviadas tenían lesiones hepáticas irregulares. En muestras agrupadas de bilis, dos de un total de siete gallinas de la parvada B también fueron positivas a C. hepaticus por PCR. Se programó una visita de seguimiento a la Parvada A cinco días después, así como una visita a una parvada en la que no se había reportado la presencia de necrosis hepática focal (Parvada C), que se utilizó como control para propósitos de comparación. Se recolectaron muestras de hígado, bazo, tonsilas cecales, sacos ciegos, sangre y vesícula biliar de seis gallinas por gallinero. Además, se recolectó alimento, muestras de agua de bebederos de niple y agua ambiental (agua estancada fuera de la casa) de la granja afectada y la granja de control. Para detectar el organismo, todas las muestras recolectadas se sometieron a siembra directa en agar sangre y enriquecimiento en caldo Preston con incubación en condiciones microaerófilas. Después de varias fases de purificación del cultivo bacteriano de todas las muestras, se analizaron mediante PCR los cultivos bacterianos individuales que mostraban características de C. hepaticus para confirmar la identidad. De la parvada A, el hígado, el ciego, las tonsilas cecales, la vesícula biliar y el agua ambiental dieron positivo por PCR para C. hepaticus. No se detectaron muestras positivas en la parvada C. Después una segunda visita de seguimiento, 10 semanas después, la parvada A mostró resultado positivo por PCR para C. hepaticus en la bilis de la vesícula biliar y en las heces, y una muestra de agua ambiental mostró una reacción positiva débil para C. hepaticus . La parvada C resultó negativa mediante PCR para C. hepaticus. Para obtener más conocimiento sobre la prevalencia de C. hepaticus, se realizó un muestreo incluyendo seis gallinas de postura de 12 lotes diferentes de gallinas ponedoras entre las edades de 7 a 80 semanas, criadas en diferentes sistemas de alojamiento, para detectar C. hepaticus. Las doce parvadas de gallinas de postura fueron negativas por cultivo y mediante PCR para C. hepaticus. Actualmente, no hay tratamientos aprobados para C. hepaticus y no hay vacuna disponible. Los resultados de este estudio sugieren que C. hepaticus puede ser endémico en algunas áreas de los Estados Unidos, y las gallinas de postura bajo pastoreo pueden estar expuestas al medio ambiente o al agua estancada en las áreas donde están alojadas.

Complete Genome Sequence of Campylobacter hepaticus RBCL71delta, Associated with Spotty Liver Disease in Organic Pasture-Raised Laying Hens in Georgia, USA.

Spotty liver disease (SLD) is as an important cause of disease in egg-producing flocks. The organisms implicated include Campylobacter hepaticus and Campylobacter bilis. Here, we report the complete genome sequence of C. hepaticus strain RBCL71delta and three additional strains, isolated from a layer flock in Georgia, USA.