P-glycoprotein inhibitors modulate accumulation and efflux of xenobiotics in extra and intracellular Toxoplasma gondii.

We examined xenobiotic transport and the effects of P-glycoprotein (Pgp) inhibitors on efflux function in Toxoplasma gondii tachyzoites. The fluorescence emission of JC-1 and daunorubicin (Pgp substrates) was determined in both extracellular tachyzoites and T. gondii-infected human KB cells. Dye accumulation and efflux were modulated by verapamil (Vp) and cyclosporin A (CsA), both of which are Pgp inhibitors. Red JC-1 emission was measured from 10(6) extracellular tachyzoites, using spectrofluorometry. The increase in red emission was significant from 1 microM concentration of both drugs and was higher with CsA than with Vp. Compared with untreated tachyzoites, JC-1 efflux was inhibited by 3 microM CsA and 3 microM Vp. With intracellular tachyzoites, the fluorescence distribution of daunorubicin (DNR) between the parasitophorous vacuole and the host cell was modulated by Vp and CsA. In media free of CsA and Vp, DNR emission inside intracellular tachyzoites was very weak, as observed by confocal microscopy. In the presence of CsA or Vp, DNR emission was markedly enhanced in tachyzoites but not in the whole vacuole. The modulation of DNR uptake seems to involve the tachyzoite membrane rather than the parasitophorous vacuole or host cell membranes. It suggests that Vp would inhibit the DNR efflux from intracellular tachyzoites through a transitory effect. In conclusion, these two Pgp inhibitors increase both extracellular and intracellular dye accumulation in living T. gondii, pointing to the existence of a transmembrane transport mediated by a Pgp homologue located on the parasite membrane complex.

Involvement of secretory and cytosolic phospholipases A2 during infection of THP1 human monocytic cells with Toxoplasma gondii. Effect of interferon gamma.

Toxoplasma gondii is an intracellular, obligate protozoan parasite that actively invades host cells. Phospholipases A2 (PLA2) are widely distributed enzymes that exist in many isoforms [secretory (sPLA2), cytosolic (cPLA2)] in monocytic and other human cells (pancreatic, kidney, etc) and also in parasites. We examined the effects of inhibitors of sPLA2 type II and cPLA2 on the invasion of human monocytic cells (THP1) by T. gondii (RH strain). We also measured sPLA2 type II and cPLA2 enzyme activities and their modulation by interferon gamma (IFN gamma) in extracts of host cells and parasite. Inhibition of both parasite and THP1 sPLA2 type II, and of parasite cPLA2 reduced the number of infected cells. Enzyme assays and immunoblot analyses demonstrated T. gondii sPLA2 type II and cPLA2 activities and indicated that T. gondii increased the activity of THP1 sPLA2 type II. Incubation with IFN gamma (1,000 units/ml) for 20 h reduced the activities of sPLA2 and cPLA2 in infected and non-infected cells. Thus, IFN gamma blocks the activities of both THP1 and parasite sPLA2 and cPLA2 in membrane fractions, resulting in protection against active invasion by T. gondii.

Frequency of specific anti-Toxoplasma gondii IgM, IgA and IgE in Colombian patients with acute and chronic ocular toxoplasmosis

We studied the frequency of specific anti-Toxoplasma IgM, IgA and IgE antibodies in serum of 28 immunocompetent Colombian patients, selected by ophthalmologists and with lesions that were compatible with ocular toxoplasmosis. Patients were classified in three groups: (i) group 1 consisted of ten patients with a first episode; (ii) group 2, with seven patients with a recurrence and (iii) group 3, consisted of eleven patients with chronic chorioretinal lesion without uveitis. We found that 10/28 (35 per cent) of Colombian patients with ocular toxoplasmosis possessed at least one serological marker for Toxoplasma infection different from IgG. In group 1 (first episode), we found simultaneous presence of specific IgM plus IgA plus IgE in 1/10 (10 per cent). In group 2 (recurrences) in 1/7 (14 per cent) we found IgM and IgA test positives and in 1/7 (14 per cent) we found IgM and IgE tests positives. In group 3 (toxoplasmic chorioretinal scar) the IgA serological test was positive in 2/11 (18 per cent). These results show that serum IgM or IgA or IgE can be present during recurrences.

Mecanismos efectores del interferón gamma contra la infección por Toxoplasma gondii / Effector mechanisms of gamma interferon against Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii es un protozoario parásito de desarrollo intracelular. La enfermedad humana producida por T. gondii es una causa importante de morbilidad y mortalidad neonatal y en pacientes inmunodeprimidos. En esta reseña, se revisan los conocimientos actuales sobre los mecanismos efectores del interferón gamma (IFN gamma), la principal citocina protectora contra T. gondii, incluyendo los resultados que hemos obtenido en un modelo de infección in vitro de células humanas monocitarias (THP1). El IFN gamma protege las células humanas contra T. gondii por mecanismos diferentes a aquéllos con los que protege las células de ratón. En el modelo de infección de células THP1, el IFN gamma protege por dos mecanismos independientes. Un primer efecto es la reducción del porcentaje de células parasitadas, el cual está ligado a una disminución de la actividad PLA subíndice 2 parasitaria y celular. Se trata de un nuevo mecanismo efector del IFN gamma contra la infección toxoplásmica, diferente a los mecanismos parasiticidas y parasitostáticos previamente descritos. Un segundo efecto ocurre por interrupción del crecimiento parasitario intracelular a través de la activación de la enzima idoleamina-oxigenasa que degrada el triptófano, lo que constituye un efecto parasitostático. Contrariamente a lo que ocurre en el modelo de infección de células monocitarias de ratón, la producción de óxido nítrico (NO) no juega un papel determinante en los monocitos humanos

Utilidad de dos técnicas serológicas para IgA humana antitoxoplasma como pruebas de referencia para toxoplasmosis materna reciente

Objetivo: evaluar dos técnicas que miden la IgA antitoxoplasma para utilización como pruebas de referencia, en un programa de control de la toxoplasmosis materna. Tipo de estudio: evaluación de prueba diagnóstica. Sitio donde se realizó el estudio: Laboratorio de referencia para Toxoplasmosis, Universidad del Quindio y Laboratorio de Parasitología del Hospital Maison Blanche, Reims, Francia. Sueros analizados y procedencia: veintinueve sueros de pacientes con criterios serológicos de toxoplasmosis reciente, 46 sueros de pacientes con infección toxoplásmatica crónica y 43 sueros de pacientes con ausencia de criterios serológicos de infección toxoplasmática. Todos los sueros procedian de madres que participan en el programa de control prenatal del Instituto Seccional de Salud del Quindio. Resultados: la técnica ELISA-IgA con un punto de corte a un índice de fijación de 1,1 tuvo sensibilidad de 72 por ciento para detectar casos agudos y especificidad de 76 por ciento en sueros con infección crónica y de 92 por ciento en sueros no reactivos. La técnica ISAgA-IgA en el mismo grupo de pacientes demostró sensibilidad de 97 por ciento para detectar casos agudos y especificidad de 97 por ciento en sueros de pacientes crónicos y de 100 por ciento en sueros no reactivos. A partir de estos datos se realizó una simulación de los valores predictivos positivos y negativos que se pueden esperar en las condiciones epidemiológicas del Departamento del Quindio. Conclusión: el conjunto de datos obtenidos demuestra que en sueros de madres colombianas la mejor técnica para utilización comp prueba de referencia en un programa de control de la toxoplasmosis materna es la prueba ISAgA-IgA

Avances diagnósticos en toxoplasmosis. PCR, nuevos marcadores de infección evolutiva y otras técnicas

El diagnóstico de la toxoplasmosis requiere la realización de pruebas de laboratorio; en esta revisión se presenta un sumario de las técnicas que han aparecido en los últimos años y que han aportado nuevos criterios para afirmar la presencia de una infección clínicamente importante. Se discute la cinética de anticuerpos y los límites y ventajas de las técnicas de detección de anticuerpos y del parásito, incluyendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se presenta una guía para la interpretación de resultados en las diversas manifestaciones clínicas de esta infección. Grandes avances y mejorías notables en las técnicas de diagnóstico se han realizado se hace aún necesario mejorarlas y simplificarlas para lograr un mayor acceso a su aplicación.