Utilidad del método de rojo de pirogalol molibdato en la cuantificación de proteína de Bence Jones / Evaluation of pyrogallol-red molybdate complex performance in the measurement of Bence Jones protein

La cuantificación de proteínas en orina (PU) es un buen marcador para evaluar la función renal. En presencia de cadenas livianas libres monoclonales de inmunoglobulinas en orina (CLLM), o proteína de Bence Jones, el valor de PU provee un índice de la masa tumoral, de fundamental importancia en el monitoreo de pacientes con síndromes linfoproliferativos tales como mieloma múltiple micromolecular, enfermedad por depósito de cadenas livianas, y amiloidosis (AL). La determinación de PU por el método de unión al colorante Rojo de Pirogalol-Molibdato (RPM) es cada vez más utilizada porque es simple de realizar y fácilmente automatizable. El objetivo de éste trabajo es evaluar el comportamiento del método de RPM en la determinación de proteínas totales en muestras de orina compuestas por CLLM exclusivamente y estimar su correlación con otras metodologías de uso habitual. Se seleccionaron 79 muestras de orina de 24 h de recolección que presentaron solamente CLLM por electroinmunofijación (EIF) y por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Se utilizó la técnica de Bradford con Azul Brillante de Coomasie (ABC), como otro método de unión a colorantes, y el método de Exton con ácido sulfosalicílico al 3 por ciento (ASS), de uso tradicional en éste medio. Para el método de RPM se utilizó un equipo comercial (RANDOX, Urinary Proteins) en un autoanalizador Selectra 2 Vitalab (Wiener). La cuantificación de cadenas livianas kappa y lambda se efectuó por inmunonefelometría (IN) (ARRAY 360 Beckman). El método de RPM tuvo una correlación estadísticamente significativa con el de ABC (r=0,888; ABC = 2,16 x RPM -0,09) y con IN (r= 0,790; IN = 11,9 x RPM + 0,16). El método de ASS correlacionó significativamente con el de ABC (r=0,324; p0,01) y con el de RPM (r=0,556; p<0,01), pero muy débilmente, por lo que no es posible vincularlos entre sí bajo aceptables intervalos de predicción. Se concluye que para la medición de las CLLM en los casos de orinas con concentraciones superiores al límite de linealidad del método de RPM, la mejor opción para evitar reacciones erráticas, es realizar una dilución 1/10 de la muestra

Utilidad del método de rojo de pirogalol molibdato en la cuantificación de proteína de Bence Jones / Evaluation of pyrogallol-red molybdate complex performance in the measurement of Bence Jones protein

La cuantificación de proteínas en orina (PU) es un buen marcador para evaluar la función renal. En presencia de cadenas livianas libres monoclonales de inmunoglobulinas en orina (CLLM), o proteína de Bence Jones, el valor de PU provee un índice de la masa tumoral, de fundamental importancia en el monitoreo de pacientes con síndromes linfoproliferativos tales como mieloma múltiple micromolecular, enfermedad por depósito de cadenas livianas, y amiloidosis (AL). La determinación de PU por el método de unión al colorante Rojo de Pirogalol-Molibdato (RPM) es cada vez más utilizada porque es simple de realizar y fácilmente automatizable. El objetivo de éste trabajo es evaluar el comportamiento del método de RPM en la determinación de proteínas totales en muestras de orina compuestas por CLLM exclusivamente y estimar su correlación con otras metodologías de uso habitual. Se seleccionaron 79 muestras de orina de 24 h de recolección que presentaron solamente CLLM por electroinmunofijación (EIF) y por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Se utilizó la técnica de Bradford con Azul Brillante de Coomasie (ABC), como otro método de unión a colorantes, y el método de Exton con ácido sulfosalicílico al 3 por ciento (ASS), de uso tradicional en éste medio. Para el método de RPM se utilizó un equipo comercial (RANDOX, Urinary Proteins) en un autoanalizador Selectra 2 Vitalab (Wiener). La cuantificación de cadenas livianas kappa y lambda se efectuó por inmunonefelometría (IN) (ARRAY 360 Beckman). El método de RPM tuvo una correlación estadísticamente significativa con el de ABC (r=0,888; ABC = 2,16 x RPM -0,09) y con IN (r= 0,790; IN = 11,9 x RPM + 0,16). El método de ASS correlacionó significativamente con el de ABC (r=0,324; p0,01) y con el de RPM (r=0,556; p<0,01), pero muy débilmente, por lo que no es posible vincularlos entre sí bajo aceptables intervalos de predicción. Se concluye que para la medición de las CLLM en los casos de orinas con concentraciones superiores al límite de linealidad del método de RPM, la mejor opción para evitar reacciones erráticas, es realizar una dilución 1/10 de la muestra (AU)

Determinación de microproteínas urinarias en orinas sin concentrar / Urinary low molecular weight proteins on unconcentrated urine

Se realizó la determinación cuali y cuantitativa de las microproteínas urinarias (MU): Alfa-1 microglobulina (A1m), proteína transportadora del retinol (RBP) y Beta-2 microglobulina (B2m), en 138 orinas de 24 h de recolección con pH superiores o iguales a 5.5, en pacientes adultos con distintos cuadros uroproteicos: 38 fisiólogicos, 59 glomerulares, 19 tubulares y 22 mixtos. Se describe la metodología analítica para optimizar la detección de las MU mediante la técnica de electroinmunofijación (EIF) con coloración argéntica, en orinas sin concentrar. El rango de sensibilidad para las distintas MU fue de 3-100mg/l. La cantidad de antisuero monoespecífico empleado por cm2 de gel fue: anti-A1m (4µl/cm2), anti-RBP (4µl/cm2) y antiB2m (2µl/cm2). La determinación cuantitativa se relizó por inmunodifusión radial (IDR) para RBP y B2m, y por electroinmunodifusión (EID) para A1m. La detección de MU en orinas sin concentrar mediante esta metodología de alta sensibilidad y la cuantificación de las mismas permitieron efectuar un correcto diagnóstico de proteinuria tubular y mixta superando las eventuales pérdidas o desnaturalización protéica que acarrean los clásicos métodos de concentración. La detección elevada de A1m (15-65 mg/l) en 12 de 59 orinas con proteinuria glomerular, plantea un interrogante sobre la cuantificación aislada de la MU para definir un patrón tubular

Determinación de microproteínas urinarias en orinas sin concentrar / Urinary low molecular weight proteins on unconcentrated urine

Se realizó la determinación cuali y cuantitativa de las microproteínas urinarias (MU): Alfa-1 microglobulina (A1m), proteína transportadora del retinol (RBP) y Beta-2 microglobulina (B2m), en 138 orinas de 24 h de recolección con pH superiores o iguales a 5.5, en pacientes adultos con distintos cuadros uroproteicos: 38 fisiólogicos, 59 glomerulares, 19 tubulares y 22 mixtos. Se describe la metodología analítica para optimizar la detección de las MU mediante la técnica de electroinmunofijación (EIF) con coloración argéntica, en orinas sin concentrar. El rango de sensibilidad para las distintas MU fue de 3-100mg/l. La cantidad de antisuero monoespecífico empleado por cm2 de gel fue: anti-A1m (4Al/cm2), anti-RBP (4Al/cm2) y antiB2m (2Al/cm2). La determinación cuantitativa se relizó por inmunodifusión radial (IDR) para RBP y B2m, y por electroinmunodifusión (EID) para A1m. La detección de MU en orinas sin concentrar mediante esta metodología de alta sensibilidad y la cuantificación de las mismas permitieron efectuar un correcto diagnóstico de proteinuria tubular y mixta superando las eventuales pérdidas o desnaturalización protéica que acarrean los clásicos métodos de concentración. La detección elevada de A1m (15-65 mg/l) en 12 de 59 orinas con proteinuria glomerular, plantea un interrogante sobre la cuantificación aislada de la MU para definir un patrón tubular (AU)

Electroinmunofijación de orinas sin concentrar por coloración con metales pesados / Immunofixation electrophoresis of unconcentrated urines with heavy metal staining

Se describe una técnica sencilla y altamente sensible para la identificación inmunológica de proteínas en orina sin concentración previa, basada en la alta sensibilidad de las tinciones con metales pesados, como plata y oro, al estado coloidal (100 veces más sensible que el azul brillante de Coomassie (CBB) R y G 250). Posteriormente a la corrida electroforética convencional se efectuó una inmunofijación utilizando una cantidad de antisuero monoespecífico en el orden de 3,5 µl/cm² de gel. El contacto antígeno-antisuero se mantuvo durante 30 minutos y posteriormente se efectuaron lavados con sucesivos recambios de solución fisiológica y se aplicaron las coloraciones argénticas, áurica y con CBB R 250. Bajo las condiciones de trabajo utilizadas se lograron identificar satisfactoriamente las cadenas livianas k y ? monoclonales en proteinurias de Bence Jones (BJ) positivo, y la ß2 microglobulina en proteinurias de tipo tubular, con un límite de sensibilidad del orden de los 5 x 10-4ug de proteína/mm2 de gel. Esta técnica resultó de gran utilidad en el estudio del cuadro uroproteico y se presenta como un método simple, rápido, de alta sensibilidad y baja relación costo/beneficio, para el estudio de los distintos cuadros de proteinuria en muestras sin concentrar

Electroinmunofijación de orinas sin concentrar por coloración con metales pesados / Immunofixation electrophoresis of unconcentrated urines with heavy metal staining

Se describe una técnica sencilla y altamente sensible para la identificación inmunológica de proteínas en orina sin concentración previa, basada en la alta sensibilidad de las tinciones con metales pesados, como plata y oro, al estado coloidal (100 veces más sensible que el azul brillante de Coomassie (CBB) R y G 250). Posteriormente a la corrida electroforética convencional se efectuó una inmunofijación utilizando una cantidad de antisuero monoespecífico en el orden de 3,5 Al/cm² de gel. El contacto antígeno-antisuero se mantuvo durante 30 minutos y posteriormente se efectuaron lavados con sucesivos recambios de solución fisiológica y se aplicaron las coloraciones argénticas, áurica y con CBB R 250. Bajo las condiciones de trabajo utilizadas se lograron identificar satisfactoriamente las cadenas livianas k y ? monoclonales en proteinurias de Bence Jones (BJ) positivo, y la ß2 microglobulina en proteinurias de tipo tubular, con un límite de sensibilidad del orden de los 5 x 10-4ug de proteína/mm2 de gel. Esta técnica resultó de gran utilidad en el estudio del cuadro uroproteico y se presenta como un método simple, rápido, de alta sensibilidad y baja relación costo/beneficio, para el estudio de los distintos cuadros de proteinuria en muestras sin concentrar (AU)

Caracterización de formas macroenzimáticas de la fosfatasa alcalina: descripción de un nuevo método / A new method for the characterization of alkaline phosphatase macroenzymes

Se describe un nuevo método para la caracterización de macroenzimas de la fosfatasa alcalina. El método combina una separación previa de las formas isoenzimáticas por gel filtración en capa fina de Sephadex G-200, y el posterior revelado de la correspondiente actividad enzimática in situ. Entre otras ventajas, este sistema no sólo separa adecuadamente las formas macroenzimáticas, sino que mantiene todas las isoenzimas en estado nativo, a diferencia de las técnicas con desnaturalizantes, por lo que es posible su detección y eventual aislamiento. Permite además la resolución simultánea de un gran número de muestras, así como la inclusión de controles de distinto peso molecular (PM) dentro de una misma corrida, lo que facilita en forma significativa la posterior interpretación del perfil obtenido, aportando una gran ventaja con respecto a la técnica de gel filtración en columna. El método propuesto se presenta como una técnica relativamente simple y rápida para el screening de macroenzimas en el laboratorio clínico

Caracterización de formas macroenzimáticas de la fosfatasa alcalina: descripción de un nuevo método / A new method for the characterization of alkaline phosphatase macroenzymes

Se describe un nuevo método para la caracterización de macroenzimas de la fosfatasa alcalina. El método combina una separación previa de las formas isoenzimáticas por gel filtración en capa fina de Sephadex G-200, y el posterior revelado de la correspondiente actividad enzimática in situ. Entre otras ventajas, este sistema no sólo separa adecuadamente las formas macroenzimáticas, sino que mantiene todas las isoenzimas en estado nativo, a diferencia de las técnicas con desnaturalizantes, por lo que es posible su detección y eventual aislamiento. Permite además la resolución simultánea de un gran número de muestras, así como la inclusión de controles de distinto peso molecular (PM) dentro de una misma corrida, lo que facilita en forma significativa la posterior interpretación del perfil obtenido, aportando una gran ventaja con respecto a la técnica de gel filtración en columna. El método propuesto se presenta como una técnica relativamente simple y rápida para el screening de macroenzimas en el laboratorio clínico (AU)