Interferencia por iopamidol en el proteinograma por elecroforesis capilar y su relación con la función renal / Iopamidol interference in protein separation by capillary electrophoresis and its connection to renal function

Introducción: Las interferencias en el proteinograma electroforético por electroforesis capilar incluyen la aparición de picos con concentraciones y movilidades electroforéticas, que podrían simular la presencia de un componente monoclonal. Objetivos: Ante la aparición de un pico adicional con movilidad intera2-ß por electroforesis capilar (Minicap®-Sebia), el objetivo fue identificar el interferente y evaluar su relación con la funcionalidad renal. Material y métodos: Se estudiaron muestras de suero que presentaron dicha interferencia en un período de un año mediante proteinograma en soporte sólido, electroinmunofijación e inmunoelectroforesis. Se adicionó in vitro el probable interferente para confirmar su movilidad electroforética. Se evaluó el impacto de la corrección de la interferencia con la herramienta "eliminación de artefactos" (Phoresis®-Sebia) y la correlación de la concentración del pico a línea de base del interferente con la estimación de la tasa de filtrado glomerular (CKD- EPI). Resultados: La integración a la línea de base de los picos fue de 0,07-0,36 g/dL. No se observaron particularidades al realizar los estudios complementarios. Se evidenció, en todos los casos, la administración de iopamidol como medio de contraste, confirmándose su movilidad electroforética por su adición in vitro. Mediante la herramienta "eliminación de artefactos" se recuperaron los niveles basales de las fracciones. Se demostró la existencia de una correlación entre la concentración del pico a línea de base del interferente y la estimación de la tasa de filtración glomerular por CKD-EPI (r=-0.534, p<0.0001). Conclusiones: Se identificó al interferente como Iopamidol y se demostró su relación con la disminución de la tasa de filtración glomerular

Introduction: Interferences in the electrophoretic proteinogram by capillary electrophoresis include the appearance of peaks with concentrations and electrophoretic mobilities, which could simulate the presence of a monoclonal component. Objectives: In the light of an additional peak with interα2-ß mobility by capillary electrophoresis (MINICAP®-Sebia), the aim was to identify the interferent and evaluate its connection to renal functionality. Methods: Serum samples that presented this interference over a period of one year were studied by proteinogram on solid support, electroimmunofixation and immunoelectrophoresis. The probable interferent was added in vitro to confirm its electrophoretic mobility. The impact of the interference correction with the "artifact removal" tool (Phoresis®-Sebia) and the correlation of the baseline peak concentration of the interferent with the estimation of the glomerular filtration rate (CKD-EPI) were evaluated. Results: The integration to the baseline of the peaks was 0.07-0.36 g/dL. No particularities were observed when performing the complementary studies. In all cases, the administration of Iopamidol as a contrast medium was demonstrated, confirming its electrophoretic mobility due to its in vitro addition. Using the "artifact removal" tool, the basal levels of the fractions were recovered. The existence of a correlation between the concentration of the baseline peak of the interferent and the estimation of the glomerular filtration rate by CKD-EPI was shown (r=-0.534, p <0.0001). Conclusions: The interferent was identified as Iopamidol and its connection to the decrease in the glomerular filtration rate was demonstrated

El rol de la proteína beta trace en distintas áreas de la Medicina / The role of beta trace protein in different areas of Medicine / O papel da proteína beta trace em diferentes áreas da Medicina

La proteína beta trace (PBT), también llamada Prostaglandina D2 Sintasa de tipo lipocalina, es una glicoproteína de peso molecular entre 23 y 29 kDa que convierte la prostaglandina H2 en prostaglandina D2. La misma está asociada a diferentes entidades clínicas. Por sus características moleculares puede ser un indicador útil de la alteración precoz en la filtración glomerular; por el aumento de su síntesis y su concomitante elevación en suero, un predictor de riesgo cardiovascular; y por su alta concentración en líquido cefalorraquídeo (LCR), un biomarcador de fístula de LCR. Puede medirse en distintos líquidos biológicos, como suero, orina y LCR. El objetivo de esta revisión fue actualizar los conocimientos de esta proteína para evaluar su utilidad en distintas áreas de la Medicina. La trascendencia de PBT en el campo de la bioquímica como posible biomarcador dependerá de la patología de base del paciente.

The beta trace protein (BTP), also called Prostaglandin D2 Synthase lipocalin type PGDS, is a glycoprotein between 23 and 29 kDa of low molecular weight that converts prostaglandin H2 in prostaglandin D2. BTP is a protein that has multiple clinical associations. Due to the characteristics of the molecule, it may indicate an early alteration in glomerular filtration; by the serum increase of its synthesis, it is a predictor of cardiovascular risk, and for its high concentration in cerebrospinal fluid (CSF), it is a marker of leakage. This protein can be measured in different biological fluids such as serum, urine, and CSF. The objective of this review is to update the knowledge about this protein as a biomarker. The significance of BTP in the field of biochemistry as a possible biomarker will depend on the patient's underlying pathology.

A proteína beta trace (PBT), também chamada de Prostaglandina D2, sintase de lipocalina é uma glicoproteína de peso molecular entre 23 e 29 kDa, que converte prostaglandina H2 em prostaglandina D2. PBT é uma proteína que está associada a várias entidades clínicas. Devido às características moleculares, pode ser uma indicação útil da alteração precoce na filtração glomerular, devido ao aumento de sua síntese e sua concomitante elevação em soro, um preditor de risco cardiovascular e, devido à sua alta concentração no líquido cefalorraquidiano (LCR), é um biomarcador da fístula LCR. É uma proteína que pode ser medida em diferentes fluidos biológicos, como soro, urina e LCR, e o objetivo desta revisão foi atualizar os conhecimentos desta proteína para avaliar sua utilidade em diversas áreas da medicina. A importância de PBT no campo da bioquímica como possível biomarcador dependerá da patologia subjacente do paciente.

Proteinuria: lesión estructural renal y comparación de métodos / Proteinuria: renal structural injury and comparison of methods / Proteinúria: lesão estrutural renal e comparação de métodos

La proteinuria (PT-ur) es un marcador de enfermedad renal, sin un método de referencia establecido. Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) con tinción argéntica pueden identificarse de manera no-invasiva perfiles proteicos urinarios (PPU) de tipo glomerular (G), tubular (Tc: completos, Ti: incompletos) y mixtos (GTc, GTi) con fines diagnósticos/pronósticos y de evolución. El objetivo del estudio fue determinar la prevalencia (P) de los PPU para cada nivel de PT-ur obtenido con cuatro métodos diferentes, en pacientes con sospecha de lesión renal. Se procesaron 105 orinas de 24 h de recolección clasificadas mediante tira reactiva (TR) y 2 pacientes con proteinuria de Bence Jones (PBJ)>2 g/L. La cuantificación de PT-ur se realizó con ácido sulfosalicílico (SSA) y Bradford (CBB) "in-house"; cloruro de benzetonio (BZT-Roche) y rojo de pirogallol-molibdato (PRM-Wiener)-Hitachi 917. Se realizó uroproteinograma y SDS-PAGE. Los cuatro métodos presentaron correlación significativa (p<0,05) para PT-ur y una comparación de medias estadísticamente no-significativa en todos los niveles de TR. Para TR negativa (PT-ur en rango normal), la P del Ti fue del 33% y del 16% para GTi. En TR 1+/2+, el GTi de mediana selectividad presentó una P del 33%/30% y el GTc de 26%/57%, respectivamente, que se incrementó al 66% para TR 3+, con escasa-selectividad. Las PBJ presentaron valores estables mediante BZT, con diluciones manuales o realizadas por el equipo. La PT-ur mediante los métodos de cuantificación ensayados resultaron comparables y el BZT mostró PT-ur variables en presencia de PBJ dependiendo de la dilución empleada. En todos los niveles de PT-ur fue posible identificar la P de todas las lesiones estructurales con selectividades progresivamente comprometidas.

Proteinuria: lesión estructural renaly comparación de métodos / Proteinuria: renal structural injury and comparison of methods / Proteinúria: lesÒo estrutural renal e comparaþÒo de métodos

La proteinuria (PT-ur) es un marcador de enfermedad renal, sin un método de referencia establecido. Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) con tinción argéntica pueden identificarse de manera no-invasiva perfiles proteicos urinarios (PPU) de tipo glomerular (G), tubular (Tc: completos, Ti: incompletos) y mixtos (GTc, GTi) con fines diagnósticos/pronósticos y de evolución. El objetivo del estudio fue determinar la prevalencia (P) de los PPU para cada nivel de PT-ur obtenido con cuatro métodos diferentes, en pacientes con sospecha de lesión renal. Se procesaron 105 orinas de 24 h de recolección clasificadas mediante tira reactiva (TR) y 2 pacientes con proteinuria de Bence Jones (PBJ)>2 g/L. La cuantificación de PT-ur se realizó con ácido sulfosalicílico (SSA) y Bradford (CBB) "in-house"; cloruro de benzetonio (BZT-Roche) y rojo de pirogallol-molibdato (PRM-Wiener)-Hitachi 917. Se realizó uroproteinograma y SDS-PAGE. Los cuatro métodos presentaron correlación significativa (pla P del Ti fue del 33% y del 16% para GTi. En TR 1+/2+, el GTi de mediana selectividad presentó una P del 33%/30% y el GTc de 26%/57%, respectivamente, que se incrementó al 66% para TR 3+, con escasa-selectividad. Las PBJ presentaron valores estables mediante BZT, con diluciones manuales o realizadas por el equipo. La PT-ur mediante los métodos de cuantificación ensayados resultaron comparables y el BZT mostró PT-ur variables en presencia de PBJ dependiendo de la dilución empleada. En todos los niveles de PT-ur fue posible identificar la P de todas las lesiones estructurales con selectividades progresivamente comprometidas.(AU)

Proteinuria (TP-ur) is associated with adverse outcomes. Analytical specificities as well as the calibration of the methods cause considerable variation of TP-ur. SDS-PAGE with silver staining is an excellent single-test for non-invasively diagnosing a complete (cT) or incompleted tubular (iT) and/or glomerular (G) protein profile (PP). In order to establish the prevalence (P) of structural lesions and to compare four TP-ur methods, one hundred and five 24 h urine collection, selected by dipstick urinalysis values (DUV), were analyzed. Coomassie Brilliant Blue G-250(CBB)/Sulphosalicylic Acid (SSA) (in-house manually developed methods) and benzethonium-chloride(BZT)/ pyrogallol red-molybdate(PRM) (Hitachi-917 analyzer) were employed. Two samples containing >2 g/L of Bence Jones protein (BJP) were assayed. SDS-PAGE and conventional zone electrophoresis (ZE), both stained with the silver stain procedure were developed. The data showed consistency in detecting a P of GiT (16%) and iT (33%) for negative DUV. 1+/2+ DUV presented a P of 33%, 30% for GiT with a partially conserved selectivity, and 26%, 57% of a GcT PP, respectively. In 3+ DUV a GcT PP was 66%, with non-selective profile. Statistically significant correlation coefficients (p2 g/L TP-ur must be performed by diluting the sample to get useful clinical information.(AU)

A proteinúria (PT-ur) é um marcador de doenþa renal, sem um método de referÛncia estabelecido. Através da eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) com tinþÒo argÛntea podem ser identificados de maneira nÒo-invasiva perfis proteicos urinários (PPU) de tipo glomerular (G), tubular (Tc: completos, Ti: incompletos) e mistos (GTc, GTi) com fins diagnósticos/prognósticos e de evoluþÒo. O objetivo do estudo foi determinar a prevalÛncia (P) dos PPU para cada nível de PT-ur obtido com quatro métodos diferentes, em pacientes com suspeita de lesÒo renal. Foram processadas 105 urinas de 24 h. de coleta classificadas mediante fita reagente (FR) e 2 pacientes com Proteinúria de Bence Jones (PBJ)>2 g/L. A quantificaþÒo de PT-ur foi realizada com ácido sulfossalicílico (SSA) e Bradford (CBB) "in-house"; cloreto de benzet¶nio (BZT-Roche) e vermelho de pirogalol-molibdato (PRM-Wiener)-Hitachi917. Realizou-se uroproteinograma e SDS-PAGE. Os quatro métodos apresentaram correlaþÒo significativa (p< 0,05) para PT-ur e uma comparaþÒo estatisticamente nÒo-significativa de médias em todos os níveis de TR. Para TR negativa (PT-ur em faixa normal), a P do Ti foi de 33% e de 16% para GTi. Em TR 1+/2+, o GTi de média seletividade apresentou uma P de 33%/30% e o GTc de 26%/57%, respectivamente, que aumentou para 66% para TR 3+, com escassa-seletividade. As PBJ apresentaram valores estáveis mediante BZT, com diluiþ§es manuais ou realizadas pela equipe. A PT-ur mediante os métodos de quantificaþÒo ensaiados resultaram comparáveis e o BZT mostrou PT-ur variáveis em presenþa de PBJ dependendo da diluiþÒo utilizada. Em todos os níveis de PT-ur foi possível identificar a P de todas as les§es estruturais com seletividades progressivamente comprometidas.(AU)

Proteinuri: lesión estructural renal y comparación de métodos / Proteinuria: renal structural injury and comparison of methods

La proteinuria (PT-ur) es un marcador de enfermedad renal, sin un método de referencia establecido. Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) con tinción argéntica pueden identificarse de manera no-invasiva perfiles proteicos urinarios (PPU) de tipo glomerular (G), tubular (Tc: completos, Ti: incompletos) y mixtos (GTc, GTi) con fines diagnósticos/pronósticos y de evolución. El objetivo del estudio fue determinar la prevalencia (P) de los PPU para cada nivel de PT-ur obtenido con cuatro métodos diferentes, en pacientes con sospecha de lesión renal. Se procesaron 105 orinas de 24 h de recolección clasificadas mediante tira reactiva (TR) y 2 pacientes con proteinuria de Bence Jones (PBJ)>2 g/L. La cuantificación de PT-ur se realizó con ácido sulfosalicílico (SSA) y Bradford (CBB) "in-house"; cloruro de benzetonio (BZT-Roche) y rojo de pirogallol-molibdato (PRM-Wiener)-Hitachi 917. Se realizó uroproteinograma y SDS-PAGE. Los cuatro métodos presentaron correlación significativa (p<0,05) para PT-ur y una comparación de medias estadísticamente no-significativa en todos los niveles de TR. Para TR negativa (PT-ur en rango normal), la P del Ti fue del 33% y del 16% para GTi. En TR 1+/2+, el GTi de mediana selectividad presentó una P del 33%/30% y el GTc de 26%/57%, respectivamente, que se incrementó al 66% para TR 3+, con escasa-selectividad. Las PBJ presentaron valores estables mediante BZT, con diluciones manuales o realizadas por el equipo. La PT-ur mediante los métodos de cuantificación ensayados resultaron comparables y el BZT mostró PT-ur variables en presencia de PBJ dependiendo de la dilución empleada. En todos los niveles de PT-ur fue posible identificar la P de todas las lesiones estructurales con selectividades progresivamente comprometidas.(AU)

Oligoclonal bands and immunoglobulin isotype switch during monitoring of patients with multiple myeloma and autologous hematopoietic cell transplantation: a 16-year experience.

BACKGROUND: Over the last 20 years, high dose therapy followed by hemopoietic stem cell transplantation has been employed in patients with multiple myeloma (MM). During 16 years of follow-up, the degree of tumor response and survival in 238 patients with autologous stem cell transplantation (ASCT) and changes in the serum protein electrophoretic pattern were analyzed. METHODS: Agarose gel electrophoresis with densitometric analysis and immunofixation were performed to evaluate serum monoclonal protein. IgM, IgA, IgG and beta(2)-microglobulin (beta2M) were quantitated. Urine protein electrophoresis with IF was performed on cellulose acetate gel using colloidal silver staining without concentrating. RESULTS: After 34 months of follow-up (range 1-160 months), eight patients (3.4%) showed a distinct monoclonal protein band that was different from their original isotype switch. This was observed to be a transient phenomenon (22.2 months). Thirty-seven patients (15.5%) developed oligoclonal bands (OB) between the first and the twentieth month after ASCT (mean 4.4 months), which persisted for 7.9 months (1-36 months). The mean overall survival time was statistically different (p<0.05) between the group with OB and the group without them. Mean values of serum albumin, beta2M, and non-involved immunoglobulins did not show statistical differences. CONCLUSIONS: The occurrence of OB could be a potential favorable prognostic marker after transplantation due to the prolonged survival observed. Close follow-up of anomalous protein bands, either in serum or urine, is essential due to the additional difficulty in interpretation when the therapeutic response and evolution are evaluated.

Validación post-analítica de la correlación inmunoglobulinas-gammaglobulinas / Post-analytical validation of the correlation between immunoglobulins-gammaglobulins

La electroforesis convencional en gel de agarosa con registro densitométrico (PRE) y la cuantificación de inmunoglobulinas IgG, IgA e IgM (GAM) por inmunoturbidimetría permiten estimar el estado inmunológico humoral. Debido a las diferencias metodológicas, los resultados de GAM y la densitometría de la fracción gamma obtenida ( GAMMA OBT) del PRE, son difíciles de correlacionar. El objetivo del presente estudio fue establecer una forma de validación post-analítica entre ambos métodos. Se seleccionaron 1.057 sueros, 736 no presentaban componentes monoclonales en la electroforesis. Se determinó GAM en un autoanalizador Hitachi 917 (Tina-quant-Roche, EE.UU.). La GAMMA OBT se obtuvo por electroforesis mediante un sistema semiautomático (Hydragel-Protein) seguido de densitometría (Hyrys), SEBIA (París-Francia). Mediante regresión lineal múltiple sobre GAMMA OBT y GAM de los 736 sueros, se predijo el valor esperado de la fracción gamma (GAMMA ESP) en g/dL a partir de los resultados de GAM: GAMMA ESP=0,84xIgG+0,23xIgA+0,75xIgM (Error estándar: 0,009; 0,041; 0,050, respectivamente; r=0,955; p<0,0001). Para detectar anomalías, como la presencia de componentes monoclonales, se utilizaron los 1.057 sueros, obteniéndose para la diferencia entre la GAMMA ESP y la GAMMA OBT, los siguientes valores de corte: -0,21 y +0,18 g/dL, los cuales incluyen la región de menor incidencia de anomalías. Se determinó el cociente de cada inmunoglobulina respecto de su valor normal superior, estableciéndose 1,5 como valor de corte. Combinando ambos procedimientos se obtuvo una sensibilidad y especificidad global de 81,4%, y 76,6%, respectivamente, para la detección de anomalías. En el presente trabajo se expone el algoritmo de decisiones que luego se ha aplicado a otros 307 pacientes encontrándose 68,0% y 83,1% de sensibilidad y especificidad, respectivamente.

Conventional agarose gel electrophoresis (AE) followed by densitometric analysis and quantitation of immunoglobulins IgG, IgA, and IgM (GAM) enable the evaluation of the immunological humoral status. Due to methodological differences, the results of the immunoglobulins quantitation by immunoturbidimetry (GAM), and the ones of the GAMMAAE region by densitometer tracing, are difficult to correlate. The aim of the present study was to establish a method of post-analytical validation between both procedures. One thousand and fifty-seven sera were selected, out of which 736 did not show any monoclonal components in the AE. GAM concentration was determined with a 917 Hitachi autoanalizer (Tina-quant-Roche). The GAMMA region was obtained by AE with a semiautomatic system (Hydragel Protein), followed by densitometer tracing (Hyrys, SEBIA). By means of the least-square multiple linear regression analysis of the GAMMA and GAM determinations of the 736 sera, the percentage fractions of each immunoglobulin corresponding to the GAMMA region were obtained: GAMMAGAM=0,84xIgG+0,23xIgA+0,75xIgM; (r=0.955; p<0.0001). In order to detect abnormalities such as the presence of monoclonal components, the 1057 sera were tested. The cut-off values for the normal difference between the GAMMAGAM and the GAMMAAEAE, were the following: -0.21;+0.18 (g/dL). The ratio of each immunoglobulin with respect to its higher normal value was determined, and the resulting cut-off value was 1.5. For the detection of abnormalities, a global sensitivity and specificity of 81.4%, and 76.6%, respectively was obtained by combining both procedures. In the present study the algorithm of decisions applied is shown.

Perfil proteico en líquido cefalorraquídeo: aporte al diagnóstico de esclerosis múltiple / Protein profile in cerebrospinal fluid: contribution to the diagnosis of multiple sclerosis

El presente estudio permitió determinar dos perfiles proteicos, mediante SDS-PAGE con tinción argéntica, en 104 líquidos cefalorraquídeos (LCR) de pacientes con diversas patologías. En el perfil A (PA) se observaron bandas de peso molecular (PM) 67 KDa. En el perfil B (PB) se observaron, además, bandas correspondientes a proteínas de bajo PM (20-25 KDa y 13 KDa). Se analizó la presencia de bandas oligoclonales (BO) mediante electroforesis y electroinmunofijación en acetato de celulosa con tinción argéntica, sin concentración previa. El análisis estadístico estableció una asociación entre la presencia de PB y esclerosis múltiple (EM) (p<0,0001) y la presencia de BO y EM (p<0,001) comparada con el resto de las neuropatías. Dentro del grupo de pacientes con PB se observó una asociación significativa entre la presencia de BO y el diagnóstico de EM (p<0,05). Tres pacientes sin EM presentaron BO positivas. El perfil proteico y la presencia de BO fueron útiles como herramientas diagnósticas adicionales para definir a la población de pacientes con EM. La utilización de ambas determinaciones fortalecería el aporte del Laboratorio al diagnóstico de EM, al evaluar dos eventos patológicos complementarios, la síntesis local de IgG (BO) y la destrucción axonal con liberación de proteínas de origen cerebral (PB) (AU)

Perfil proteico en líquido cefalorraquídeo: aporte al diagnóstico de esclerosis múltiple / Protein profile in cerebrospinal fluid: contribution to the diagnosis of multiple sclerosis

El presente estudio permitió determinar dos perfiles proteicos, mediante SDS-PAGE con tinción argéntica, en 104 líquidos cefalorraquídeos (LCR) de pacientes con diversas patologías. En el perfil A (PA) se observaron bandas de peso molecular (PM) 67 KDa. En el perfil B (PB) se observaron, además, bandas correspondientes a proteínas de bajo PM (20-25 KDa y 13 KDa). Se analizó la presencia de bandas oligoclonales (BO) mediante electroforesis y electroinmunofijación en acetato de celulosa con tinción argéntica, sin concentración previa. El análisis estadístico estableció una asociación entre la presencia de PB y esclerosis múltiple (EM) (p<0,0001) y la presencia de BO y EM (p<0,001) comparada con el resto de las neuropatías. Dentro del grupo de pacientes con PB se observó una asociación significativa entre la presencia de BO y el diagnóstico de EM (p<0,05). Tres pacientes sin EM presentaron BO positivas. El perfil proteico y la presencia de BO fueron útiles como herramientas diagnósticas adicionales para definir a la población de pacientes con EM. La utilización de ambas determinaciones fortalecería el aporte del Laboratorio al diagnóstico de EM, al evaluar dos eventos patológicos complementarios, la síntesis local de IgG (BO) y la destrucción axonal con liberación de proteínas de origen cerebral (PB)