Bos taurus and Bos indicus folicular aspiration and oocytes vitrification at field conditions / Aspiração folicular em vacas Bos taurus e Bos indicus e vitrificação dos oócitos em condições de campo

The aim of this study was to evaluate the viability of cryopreservation of bovine oocytes from Bos taurus and Bos indicus cows, at field conditions. The average rate of oocyte recovered by Ovum Pick up (OPU) from Bos taurus taurus cows (Devon) or Bos taurus indicus cows (Nelore), and the embryo development after vitrification were determined. After 60 sessions, an average rate of 4.6 oocytes/session was obtained from Devon cows. This number was significantly lower than the 16.3 oocytes obtained from Nelore cows, in 12 sessions. Selected recovered oocytes were vitrified in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose, in TCM 199 medium, with open pulled straws (OPS) technology, and stored in a cryogenic container. Just after warmed, oocytes were submitted to standard in vitro maturation, fertilization and culture in the laboratory. There were no differences in cleavage rates obtained from Devon cows oocytes (17.6%) and Nelore cows oocytes (29.1%). Evaluation of embryo development resulted in only one blastocyst obtained from Devon cows. Data from this study showed that Bos taurus indicus cows had higher oocytes recovery rates when compared with Bos taurus taurus, and that association of OPU with oocytes vitrification at farm conditions resulted in unsatisfactory indexes of embryo development, regardless of cow breed.

Com o objetivo de avaliar a viabilidade da criopreservação de oócitos de fêmeas taurinas e zebuínas em condição de campo, este estudo determinou a taxa média de oócitos obtidos por punção folicular in vivo (OPU) de fêmeas bovinas Bos taurus taurus (Devon) e Bos taurus indicus (Nelore), bem como o desenvolvimento embrionário após a vitrificação destes oócitos. Em 60 sessões, obteve-se média de 4,6 oócitos por sessão de OPU nas vacas Devon, número significativamente inferior aos 16,3 oócitos obtidos nas vacas Nelore, em 12 sessões. Os oócitos selecionados foram vitrificados em solução de 20% de EG + 20% de DMSO + 0,5 M de sacarose, em meio TCM 199, utilizando-se palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi efetuado em laboratório, seguindo-se a maturação, fecundação e cultivo in vitro. As taxas de clivagem obtidas foram 17,6% no grupo de vacas Devon e 29,1% no grupo Nelore, não havendo diferença significativa entre as mesmas. Na avaliação do desenvolvimento embrionário, obteve-se apenas um blastocisto no grupo Devon. Concluiu-se que fêmeas zebuínas (Nelore) proporcionam maior taxa de oócitos recuperados por sessão em relação às fêmeas taurinas (Devon), e que a associação da OPU com a vitrificação dos oócitos na própria fazenda não proporciona taxas aceitáveis de desenvolvimento embrionário, independente da origem dos animais.

Bos taurus and Bos indicus folicular aspiration and oocytes vitrification at field conditions / Aspiração folicular em vacas Bos taurus e Bos indicus e vitrificação dos oócitos em condições de campo

The aim of this study was to evaluate the viability of cryopreservation of bovine oocytes from Bos taurus and Bos indicus cows, at field conditions. The average rate of oocyte recovered by Ovum Pick up (OPU) from Bos taurus taurus cows (Devon) or Bos taurus indicus cows (Nelore), and the embryo development after vitrification were determined. After 60 sessions, an average rate of 4.6 oocytes/session was obtained from Devon cows. This number was significantly lower than the 16.3 oocytes obtained from Nelore cows, in 12 sessions. Selected recovered oocytes were vitrified in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose, in TCM 199 medium, with open pulled straws (OPS) technology, and stored in a cryogenic container. Just after warmed, oocytes were submitted to standard in vitro maturation, fertilization and culture in the laboratory. There were no differences in cleavage rates obtained from Devon cows oocytes (17.6%) and Nelore cows oocytes (29.1%). Evaluation of embryo development resulted in only one blastocyst obtained from Devon cows. Data from this study showed that Bos taurus indicus cows had higher oocytes recovery rates when compared with Bos taurus taurus, and that association of OPU with oocytes vitrification at farm conditions resulted in unsatisfactory indexes of embryo development, regardless of cow breed.

Com o objetivo de avaliar a viabilidade da criopreservação de oócitos de fêmeas taurinas e zebuínas em condição de campo, este estudo determinou a taxa média de oócitos obtidos por punção folicular in vivo (OPU) de fêmeas bovinas Bos taurus taurus (Devon) e Bos taurus indicus (Nelore), bem como o desenvolvimento embrionário após a vitrificação destes oócitos. Em 60 sessões, obteve-se média de 4,6 oócitos por sessão de OPU nas vacas Devon, número significativamente inferior aos 16,3 oócitos obtidos nas vacas Nelore, em 12 sessões. Os oócitos selecionados foram vitrificados em solução de 20% de EG + 20% de DMSO + 0,5 M de sacarose, em meio TCM 199, utilizando-se palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi efetuado em laboratório, seguindo-se a maturação, fecundação e cultivo in vitro. As taxas de clivagem obtidas foram 17,6% no grupo de vacas Devon e 29,1% no grupo Nelore, não havendo diferença significativa entre as mesmas. Na avaliação do desenvolvimento embrionário, obteve-se apenas um blastocisto no grupo Devon. Concluiu-se que fêmeas zebuínas (Nelore) proporcionam maior taxa de oócitos recuperados por sessão em relação às fêmeas taurinas (Devon), e que a associação da OPU com a vitrificação dos oócitos na própria fazenda não proporciona taxas aceitáveis de desenvolvimento embrionário, independente da origem dos animais.

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e

Vacuum-cooled liquid nitrogen increases the developmental ability of vitrified-warmed bovine oocytes

The objective of this study was to determine the effects of vacuum-cooled liquid nitrogen on the development of vitrified immature (germinal vesicle stage; GV) and mature (metaphase II; MII) bovine oocytes after re-warming. Liquid nitrogen was exposed to either atmospheric pressure or to a vacuum (300mm Hg for 45sec); the latter decreased the temperature of the liquid nitrogen to -200°C. Partially denuded oocytes were vitrified either just after selection (GV) or after 22 hours of in vitro maturation (MII) in TCM 199 medium + 10% of estrous mare serum. For vitrification, oocytes were firstly exposed to an intermediate solution (10% EG + 10% DMSO) for 30sec, followed by the vitrification solution (20% EG + 20% DMSO + 0.5M sucrose) for 20sec. Groups of three or four oocytes were loaded into an open-pulled-straw and directly plunged into liquid nitrogen. Oocytes were subsequently re-warmed by exposure to air (25°C) for 4sec, followed by 5 min exposure to decreasing concentrations (0.3 and 0.15M) of sucrose. Fertilization (Day 0) was done with 2 x 106 spermatozoa mL-1 (selected by a swim-up procedure) and incubated for 18 to 22 hours. Presumptive zygotes were cultured at 39°C in four-well dishes with SOFaaci medium, under 5% CO2 and saturated humidity. Cleavage (Day 2) and blastocyst rates (Day 8) were 33.9 and 4.2%, respectively, for GV stage oocytes at atmospheric pressure, 41.2 and 8.8% for GV oocytes under vacuum, 43.5 and 6.7% for MII oocytes at atmospheric pressure, and 53.6 and 10.6% for MII oocytes under vacuum. In conclusion, vacuum-cooled liquid nitrogen improved developmental rates of vitrified-thawed bovine oocytes.

O objetivo deste estudo foi determinar o efeito do nitrogênio liquido super resfriado por vácuo no desenvolvimento, após reaquecimento, de oócitos bovinos vitrificados imaturos ou maturados. O nitrogênio líquido foi mantido em atmosfera normal ou submetido ao vácuo (300mm Hg por 45s) este último reduzindo a temperatura do nitrogênio para -200°C. Oócitos parcialmente desnudos foram vitrificados logo após a seleção (estádio de vesícula germinativa; VG), ou após 22 horas de maturação (metáfase II; MII) em meio TCM 199 + 10% de soro de égua em estro. Para a vitrificação, os oócitos foram inicialmente expostos a uma solução intermediária (10% EG + 10% DMSO) por 30s e a seguir a uma solução de vitrificação (20% EG + 20% DMSO + 0,5M sacarose) por 20s. Grupos de 3 ou 4 oócitos foram envasados em palhetas estiradas e abertas e mergulhados no nitrogênio líquido. Os oócitos foram então reaquecidos por exposição ao ar (25°C) por 4s, seguido de exposição a concentrações decrescentes de sacarose (0,3 e 0,15M - 5 minutos cada). A fecundação (dia 0) foi realizada com 2 x 106 espermatozóides mL-1 (selecionados por "swim-up") e incubação por 18 a 22 horas. Os presumíveis zigotos foram cultivados a 39°C, em placas de quatro poços, com meio SOFaaci, com 5% de CO2 e umidade saturada. As taxas de clivagem (Dia 2) e de blastocistos (Dia 8) obtidas foram de 33,9 e de 4,2%, respectivamente, para oócitos no estágio de VG / pressão normal, de 41,2 e 8,8% para oócitos VG / vácuo, 43,5 e 6,7% para oócitos MII / pressão normal e de de 53,6 e 10,6% para oócitos MII / vácuo. Conclui-se que o emprego de nitrogênio líquido super resfriado pelo vácuo melhora as taxas de desenvolvimento de oócitos bovinos após a vitrificação.

Vacuum-cooled liquid nitrogen increases the developmental ability of vitrified-warmed bovine oocytes

The objective of this study was to determine the effects of vacuum-cooled liquid nitrogen on the development of vitrified immature (germinal vesicle stage; GV) and mature (metaphase II; MII) bovine oocytes after re-warming. Liquid nitrogen was exposed to either atmospheric pressure or to a vacuum (300mm Hg for 45sec); the latter decreased the temperature of the liquid nitrogen to -200°C. Partially denuded oocytes were vitrified either just after selection (GV) or after 22 hours of in vitro maturation (MII) in TCM 199 medium + 10% of estrous mare serum. For vitrification, oocytes were firstly exposed to an intermediate solution (10% EG + 10% DMSO) for 30sec, followed by the vitrification solution (20% EG + 20% DMSO + 0.5M sucrose) for 20sec. Groups of three or four oocytes were loaded into an open-pulled-straw and directly plunged into liquid nitrogen. Oocytes were subsequently re-warmed by exposure to air (25°C) for 4sec, followed by 5 min exposure to decreasing concentrations (0.3 and 0.15M) of sucrose. Fertilization (Day 0) was done with 2 x 106 spermatozoa mL-1 (selected by a swim-up procedure) and incubated for 18 to 22 hours. Presumptive zygotes were cultured at 39°C in four-well dishes with SOFaaci medium, under 5% CO2 and saturated humidity. Cleavage (Day 2) and blastocyst rates (Day 8) were 33.9 and 4.2%, respectively, for GV stage oocytes at atmospheric pressure, 41.2 and 8.8% for GV oocytes under vacuum, 43.5 and 6.7% for MII oocytes at atmospheric pressure, and 53.6 and 10.6% for MII oocytes under vacuum. In conclusion, vacuum-cooled liquid nitrogen improved developmental rates of vitrified-thawed bovine oocytes.

O objetivo deste estudo foi determinar o efeito do nitrogênio liquido super resfriado por vácuo no desenvolvimento, após reaquecimento, de oócitos bovinos vitrificados imaturos ou maturados. O nitrogênio líquido foi mantido em atmosfera normal ou submetido ao vácuo (300mm Hg por 45s) este último reduzindo a temperatura do nitrogênio para -200°C. Oócitos parcialmente desnudos foram vitrificados logo após a seleção (estádio de vesícula germinativa; VG), ou após 22 horas de maturação (metáfase II; MII) em meio TCM 199 + 10% de soro de égua em estro. Para a vitrificação, os oócitos foram inicialmente expostos a uma solução intermediária (10% EG + 10% DMSO) por 30s e a seguir a uma solução de vitrificação (20% EG + 20% DMSO + 0,5M sacarose) por 20s. Grupos de 3 ou 4 oócitos foram envasados em palhetas estiradas e abertas e mergulhados no nitrogênio líquido. Os oócitos foram então reaquecidos por exposição ao ar (25°C) por 4s, seguido de exposição a concentrações decrescentes de sacarose (0,3 e 0,15M - 5 minutos cada). A fecundação (dia 0) foi realizada com 2 x 106 espermatozóides mL-1 (selecionados por "swim-up") e incubação por 18 a 22 horas. Os presumíveis zigotos foram cultivados a 39°C, em placas de quatro poços, com meio SOFaaci, com 5% de CO2 e umidade saturada. As taxas de clivagem (Dia 2) e de blastocistos (Dia 8) obtidas foram de 33,9 e de 4,2%, respectivamente, para oócitos no estágio de VG / pressão normal, de 41,2 e 8,8% para oócitos VG / vácuo, 43,5 e 6,7% para oócitos MII / pressão normal e de de 53,6 e 10,6% para oócitos MII / vácuo. Conclui-se que o emprego de nitrogênio líquido super resfriado pelo vácuo melhora as taxas de desenvolvimento de oócitos bovinos após a vitrificação.