Método, software e banco de dados para sorotipagem molecular de Streptococcus pneumoniae visando o monitoramento da eficácia do programa de vacinação no Brasil

Noventa e dois sorotipos de Streptococcus pneumoniae já foram descritos, mas a vacina pneumocócica conjugada (PCV10) introduzida no calendário básico de vacinação do Brasil, em 2010, cobre somente os mais prevalentes no país. A substituição dos sorotipos vacinais após imunização em massa é uma grande preocupação e monitorar esse fenômeno requer métodos de sorotipagem eficientes e acessíveis. A Sorotipagem clássica de pneumococos baseada em antissoros produzidos em animais é trabalhosa, restrita a poucos laboratórios de referência, e não pode tipar isolados não capsulados. Alternativamente, os métodos de sorotipagem molecular avaliam os polimorfismos dos genes do cluster cps, que codificam enzimas chave para a síntese do CPS em Streptococcus pneumoniae. Em uma abordagem apropriada, cps-RFLP, os loci cps amplificados por PCR são digeridos com uma endonuclease gerando perfis únicos à eletroforese em gel de agarose, permitindo assim a identificação do sorotipo. Neste trabalho, nós combinamos abordagens in silico e in vitro para demonstrar que XhoII é a endonuclease mais discriminante para o método cps-RFLP, e para construir um banco de dados de perfis sorotipo-específico que acomodou a diversidade genética do lócus cps de 91 conhecidos sorotipos de pneumococos. O banco de dados de perfis cps-RFLP foi integrado ao Molecular Serotyping Tool (MST), software anteriormente publicado baseado em web-based para sorotipagem molecular. Usando XhoII, o método cpsRFLP obteve especificidade de 84,6% para sorotipagem e 100 % para sorogrupagem de pneumococos. Esta nova ferramenta pode representar uma colaboração relevante para vigilância epidemiológica em tempo real da diversidade de pneumococos em resposta a programas de imunização em massa.

Método, software e banco de dados para sorotipagem molecular de Streptococcus pneumoniae visando o monitoramento da eficácia do programa de vacinação no Brasil / Method, software and database for molecular serotyping of Streptococcus pneumoniae aimed at monitoring the effectiveness of the vaccination program in Brazil

Noventa e dois sorotipos de Streptococcus pneumoniae já foram descritos, mas a vacina pneumocócica conjugada (PCV10) introduzida no calendário básico de vacinação do Brasil, em 2010, cobre somente os mais prevalentes no país. A substituição dos sorotipos vacinais após imunização em massa é uma grande preocupação e monitorar esse fenômeno requer métodos de sorotipagem eficientes e acessíveis. A Sorotipagem clássica de pneumococos baseada em antissoros produzidos em animais é trabalhosa, restrita a poucos laboratórios de referência, e não pode tipar isolados não capsulados. Alternativamente, os métodos de sorotipagem molecular avaliam os polimorfismos dos genes do cluster cps, que codificam enzimas chave para a síntese do CPS em Streptococcus pneumoniae. Em uma abordagem apropriada, cps-RFLP, os loci cps amplificados por PCR são digeridos com uma endonuclease gerando perfis únicos à eletroforese em gel de agarose, permitindo assim a identificação do sorotipo. Neste trabalho, nós combinamos abordagens in silico e in vitro para demonstrar que XhoII é a endonuclease mais discriminante para o método cps-RFLP, e para construir um banco de dados de perfis sorotipo-específico que acomodou a diversidade genética do lócus cps de 91 conhecidos sorotipos de pneumococos. O banco de dados de perfis cps-RFLP foi integrado ao Molecular Serotyping Tool (MST), software anteriormente publicado baseado em web-based para sorotipagem molecular. Usando XhoII, o método cpsRFLP obteve especificidade de 84,6% para sorotipagem e 100 % para sorogrupagem de pneumococos. Esta nova ferramenta pode representar uma colaboração relevante para vigilância epidemiológica em tempo real da diversidade de pneumococos em resposta a programas de imunização em massa...

Immune response and protective efficacy of S9 ribosomal protein of Streptococcus pneumoniae in a model of sepsis.

Vaccination is the most promising strategy to reduce the incidence of pneumococcal infection. Although there are vaccines available, all of them are based on polysaccharide antigens (conjugated or not). In addition to their high cost, those vaccines do not cover all serotypes. To overcome these hindrances, we evaluated the immunogenicity and the protective efficacy of the S9 ribosomal protein of Streptococcus pneumoniae with the aim of developing a protein-based vaccine in the future. The gene encoding the S9 ribosomal protein was cloned in pET21-a expression vector, and the recombinant S9 protein was used to immunize mice. Significantly higher levels of anti-S9 immunoglobulin G were achieved (with predominance of immunoglobulin G1) in comparison with the control. Antibodies elicited against S. pneumoniae protein extract in rabbit recognized the recombinant S9 protein by Western blot, thus demonstrating its immunogenicity. Moreover, mice immunized with recombinant S9 protein and challenged with a virulent strain of S. pneumoniae presented a significant reduction of bacteremia after 24 h of infection as compared with the control. However, in the S9-immunized mice the onset of death was insignificantly delayed, but all of them died by the fourth day postinfection.

Meningites bacterianas: Vigilância laboratorial

Webaula contendo informações sobre a rede laboratorial de vigilância das meningites bacterianas.