ABSTRACT
Introducción: El citomegalovirus (CMV) es el agente causal de la enfermedad viral de mayor prevalencia en pacientes transplantados. La detección del ADN de CMV por medio del PCR es común entre los pacientes receptores de ri±ones, dando resultados falsos positivos en pacientes que no tienen enfermedad. Hemos desarrollado una técnica de PCR-ELISA cuantitativa y competitiva para identificar pacientes que padecen la enfermedad por CMV. Métodos: Analizamos 350 muestras provenientes de 65 receptores de transplantes renales cadavéricos no seleccionados. Se extrajo ADN de CMSP semanalmente hasta el día de la alta hospitalaria y se lo estudio por PCR cualitativa. Los casos positivos se analizaron por PCR-ELISA cuantitativa y competitiva también. Esta técnica usa un estßndar interno(SI) heterólogo que contiene la misma secuencia de oligonucleótido para el 4to exon del gen del antigeno temprano inmediato (ATI) utilizado en una PCR cualitativa. La detección y cuantificación se realizó en placas de 96 pozo cubiertas con sondas específicas para él SI y CMV. Los resultados se expresaron como copias virales (CV) por 1 millón de CMSP. Resultados: Cuarenta y uno de los pacientes (63,1 por ciento) tuvieron un ensayo cualitativo positivo y 8 de ellos tenían infección clínica por CMV. Los 41 pacientes con PCR (+) fueron re-analizados por ensayo cuantitativo. Los 8 que tenían la enfermedad por CMV presentaron un valor promedio de 219,6+/- 117,2 CV/106 CMSP (P<0,01)Conclusión: La carga viral de CMV es útil para identificar los pacientes transplantados renales que desarrollaron la enfermedad por CMV. Valores mayores a 500 CV/106 CMSP se relacionan altamente con el desarrollo de la enfermedad.ABSTRACT: Background: Cytomegalovirus (CMV)is the most prevalent viral disease in organ transplantation. Detection of CMV DNA in PBMC by PCR occurs frequently in renal allograft recipients, yielding false positive patient not having the CMV disease. We have developed a quantitative and competitive PCR-ELISA assay to identify patients with CMV disease. Methods: Three hundred and fifty sample from 65 non-selected cadaveric renal transplant recipients were studies. DNA was extracted from PBMC weekly up to day of discharge and tested by qualitative PCR. The positive samples were studied by quantitative competitive PCR-ELISA
Subject(s)
Kidney Transplantation , CytomegalovirusABSTRACT
Introducción: El citomegalovirus (CMV) es el agente causal de la enfermedad viral de mayor prevalencia en pacientes transplantados. La detección del ADN de CMV por medio del PCR es común entre los pacientes receptores de ri±ones, dando resultados falsos positivos en pacientes que no tienen enfermedad. Hemos desarrollado una técnica de PCR-ELISA cuantitativa y competitiva para identificar pacientes que padecen la enfermedad por CMV. Métodos: Analizamos 350 muestras provenientes de 65 receptores de transplantes renales cadavéricos no seleccionados. Se extrajo ADN de CMSP semanalmente hasta el día de la alta hospitalaria y se lo estudio por PCR cualitativa. Los casos positivos se analizaron por PCR-ELISA cuantitativa y competitiva también. Esta técnica usa un estßndar interno(SI) heterólogo que contiene la misma secuencia de oligonucleótido para el 4to exon del gen del antigeno temprano inmediato (ATI) utilizado en una PCR cualitativa. La detección y cuantificación se realizó en placas de 96 pozo cubiertas con sondas específicas para él SI y CMV. Los resultados se expresaron como copias virales (CV) por 1 millón de CMSP. Resultados: Cuarenta y uno de los pacientes (63,1 por ciento) tuvieron un ensayo cualitativo positivo y 8 de ellos tenían infección clínica por CMV. Los 41 pacientes con PCR (+) fueron re-analizados por ensayo cuantitativo. Los 8 que tenían la enfermedad por CMV presentaron un valor promedio de 219,6+/- 117,2 CV/106 CMSP (P<0,01)Conclusión: La carga viral de CMV es útil para identificar los pacientes transplantados renales que desarrollaron la enfermedad por CMV. Valores mayores a 500 CV/106 CMSP se relacionan altamente con el desarrollo de la enfermedad.ABSTRACT: Background: Cytomegalovirus (CMV)is the most prevalent viral disease in organ transplantation. Detection of CMV DNA in PBMC by PCR occurs frequently in renal allograft recipients, yielding false positive patient not having the CMV disease. We have developed a quantitative and competitive PCR-ELISA assay to identify patients with CMV disease. Methods: Three hundred and fifty sample from 65 non-selected cadaveric renal transplant recipients were studies. DNA was extracted from PBMC weekly up to day of discharge and tested by qualitative PCR. The positive samples were studied by quantitative competitive PCR-ELISA
