ABSTRACT
BACKGROUND: The contraceptive effect of the progestogen norethisterone (NET) and its main metabolites 5alpha-NET and 3beta,5alpha-NET has been demonstrated in several species, and most studies have focused on the effects of these compounds in the uterus. We previously reported that 5alpha-NET inhibits the progesterone (P(4))-induced acrosome reaction in pig and mouse spermatozoa and induces severe morphological damage in two-cell fertilized mouse oocytes. STUDY DESIGN: The main goal of this study was to analyze the possible role of P(4) receptor (PR) in the effects of NET and 5alpha-NET on the oocyte fertilization process. Different steroid treatments were used with or without cumulus-enclosed oocytes. RESULTS: It was demonstrated that NET increases the percentage of fertilized oocytes in the same manner as P(4) does, while 5alpha-NET reduces the percentage of fertilized oocytes. This effect was not reversed by P(4) in the same concentrations. CONCLUSION: A possible molecular mechanism for the effects of 5alpha-NET may be through a PR localized in the oocyte plasma membrane.
Subject(s)
Contraceptives, Oral, Synthetic/pharmacology , Fertilization/drug effects , Norethindrone/pharmacology , Oocytes/metabolism , Receptors, Progesterone/drug effects , Acrosome Reaction , Animals , Female , Fertilization/physiology , Fertilization in Vitro , Male , Mice , Mice, Inbred BALB C , Mice, Inbred C57BL , Norethindrone/analogs & derivatives , Random Allocation , Receptors, Progesterone/metabolismABSTRACT
BACKGROUND: Estrogens exert profound effects on target tissues. These effects are mediated by two estrogen receptors (ER(alpha) and ER(beta)) that bind to specific DNA sequences in estrogen-dependent genes. Other molecules such as growth factors, transcription factors and some oncoproteins might interact with the estrogen receptors and thus regulate the transcription of these genes. Currently there is no adequate cellular model to study these interactions. METHODS: We transfected the human wild-type ER(alpha) to an ER-negative rat epithelial endometrial cell line (Rentr01) using a tetracycline-regulated gene expression system. The exogenous receptor was correctly translated, had an appropriate hormone-binding affinity, and bound well to estrogen response elements containing DNA. RESULTS: We obtained a new stable cell line that is ER(beta) negative but ER(alpha) positive (R1-49E1). The expression of receptor alpha can be regulated in a dose-response manner by addition of tetracycline in the culture medium. Estradiol treatment of ER(alpha)-containing cells apparently diminished cellular proliferation, and the exogenous receptor can induce the transcription of the endogenous progesterone receptor isoform B (PgR-B) gene. CONCLUSIONS: This epithelial cellular model may be useful to study the interaction between estrogens and other cell signaling pathways in epithelial endometrial cell physiology.
Subject(s)
Cell Line , Endometrium/cytology , Estrogen Receptor alpha/biosynthesis , Tetracycline/pharmacology , Animals , Cell Differentiation , Cell Proliferation , Chloramphenicol O-Acetyltransferase/metabolism , Culture Media/pharmacology , DNA/chemistry , Dose-Response Relationship, Drug , Estrogen Receptor alpha/chemistry , Estrogen Receptor alpha/metabolism , Estrogen Receptor beta/metabolism , Female , Genes, Reporter , Humans , Immunohistochemistry , Mice , NIH 3T3 Cells , Protein Binding , Rats , Receptors, Progesterone/metabolism , Response Elements , Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction , Signal Transduction , Time Factors , TransfectionABSTRACT
OBJECTIVE: To investigate whether the serum prolactin (PRL) response to a dopamine antagonist was different in nonobese, euthyroid women with malignant or benign breast tumors in comparison with healthy women, considering their age at first full-term pregnancy or their nulliparity. METHODS: Serum PRL concentrations before and 60, 90, and 120 minutes after oral administration of metoclopramide (10 mg) were studied in 122 nonobese, nonsmoking, euthyroid women: 28 who had invasive breast cancer, stage I or II (group 1), 34 who had benign breast disease (group 2), and 60 who were clinically healthy (group 3). These three main groups were subdivided into early and late parous women (< or = 25 and >25 years, respectively) and nulliparous women, and the menopausal status was also considered. RESULTS: Early parous women with invasive breast cancer (both premenopausal and postmenopausal) and early parous premenopausal women with benign breast disease had significantly higher serum PRL concentrations in response to administration of metoclopramide (P<0.05) and a greater area under the PRL curve (P<0.05) than those observed in early parous healthy women. No other significant differences in the serum PRL response were noted between or within groups. CONCLUSION: The results of this study suggest the existence of an increased hypothalamic dopaminergic tone in early parous women but not in late parous or nulliparous women with malignant or benign breast tumors in comparison with similar healthy women. This finding may represent an adaptive protective mechanism attempting to prevent persistently increased serum PRL concentrations, a factor that could adversely affect the clinical evolution of the disease.
Subject(s)
Breast Diseases/physiopathology , Breast Neoplasms/physiopathology , Dopamine/physiology , Hypothalamus/physiopathology , Parity , Adult , Age Factors , Dopamine Antagonists , Estradiol/blood , Female , Humans , Kinetics , Menarche , Metoclopramide , Middle Aged , Pregnancy , Progesterone/blood , Prolactin/bloodABSTRACT
Introducción. La 5Ó-Noretisterona (5Ó-NET) es un metabolito sintético que tiene alta afinidad por el receptor de progesterona e inhibe la acción de este esteroide natural. En conejas gestantes se demostró que la administración de este compuesto durante los primeros días post-coito inhibe tanto la implantación del ovocito como la actividad del Factor de Embarazo Temprano (FET), dicho factor es producido por el ovocito una vez que se ha llevado a cabo la fertilización. Sin embargo, en éstos trabajos no desmuestran si este compuesto ejerce acciones deletéreas sobre el ovocito en desarrollo, previas a la implantación. Objetivo. Analizar el efecto in vitro e in vivo de 5Ó-NET sobre el desarrollo del ovocito desde la etapa post-fertilización hasta la formación de la mórula. Material y métodos. Los gametos fueron obtenidos de ratones hembras de la cepa Balb/C y de machos C57BL/6J. La fertilización se llevó a cabo tanto in vitro como in vivo utilizando técnicas previamente descritas, con algunas modificaicones. Una vez que se observó la formación de los cuerpos polares, se inició la administración de 5Ó-NET a diferentes dosis al medio de cultivo y se incubaron a 37ºC, 5 por ciento CO2 y 95 por ciento aire. Los cambios en la estructura y morfología fueron analizados a diferentes tiempos de incubación por microscopio de luz (400x). Un total de 153 ovocitos fueron analizados en el modelo in vivo y de 142 en los experimentos in vitro. En ambos casos el análisis estadístico se hizo mediante la prueba de x2 con Ó=0.05. Resultados. El análisis estadístico en ambos modelos muestra que la presencia de 5Ó-NET en el medio de cultivo ejerce efectos deletéreos sobre el desarrollo y morfología de los ovocitos fertilizados, reflejándose en la destrucción de los blastómeros y la aparición de granulaciones en su interior
Subject(s)
Animals , Pregnancy , Rats , Blastomeres , Fetal Development/drug effects , Morula , Norethindrone/administration & dosage , ProgestinsABSTRACT
Objetivo. Estudiar el efecto de 1,25-dihydroxycholecalciferol D(1,25-(OH)2D3 sobre la proliferación y muerte de las células de endometrio de la rata en cultivo. Material y métodos. Se usó la línea celular de endometrio de rata Rentro 1. El medio de incubación se suplementó con 1 por ciento de suero bovino fetal inactivado y previamente tratado con carbón para eliminar las hormonas esteroides. Las monocapas de células fueron mantenidas en presencia o ausencia de 1,25-(OH)2D3 o 17ß-estradiol o del vehículo. Posteriormente se evaluó la proliferación celular mediante conteo en un hemocitómetro, utilizando azul tripano 0.4 por ciento y se analizó la fase de síntesis de ADN por citofluorometría fe flujo. La muerte celular fue determinada por el análisis de la integridad del ADN genómico en geles de agarosa y tinción con bromuro de etidio. Resultados. Las células en presencia de 1 por ciento de suero bovina fetal sin hormonas esteroides en el medio de cultivo, estimuló su crecimiento de las mismas. Por otro lado, las células Rentro 1 no respondieron a la estimulación con 17ß-estradiol y sí al 1,25-(OH)2D3, lo que confirmó la ausencia del receptor de estrógenos en estas células y demostró la capacidad de esta línea celular para responder al 1,25-(OH)2D3. Por último, se encontró que a diferencia de otros tipos celulares, las células Rentro 1 no sufrieron daño a nivel del ADN (apoptosis) con el 1,25-(OH)2D3. Conclusiones. 1) El 1,25-(OH)2D3 promovió la proliferación de las células Rentro 1 de manera independiente de la dosis e independiente de la presencia del estímulo estrogénico; 2) el incremento en el número de células estuvo en relación con la activación de la fase de síntesis de ADN del ciclo celular; 3) la presencia de esta hormona en el cultivo celular no indujo la muerte celular no indujo la muerte celular por apoptosis
