Síndrome de Turner: variaciones en la constitución cromosómica y sus efectos en la expresión fenotípica / Turner Syndrome: variations in the chromosomal constitution and its effects on the phenotypic expression

El Síndrome de Turner es un desorden cromosómico causado por haploinsuficiencia completa o parcial de uno de los cromosomas sexuales. Incidencia 1: 2500 recién nacidas vivas. Clínicamente las pacientes presentan talla baja, un espectro amplio de anomalías somáticas y disgenesia gonadal. Desde el año 1968 hasta el presente se estudiaron clínica y citogenéticamente 630 niñas con fenotipo de Turner, sin ambigüedad genital y con cariotipos anormales, quienes consultaron en la División de Endocrinología del Hospital de Niños "Ricardo Gutiérrez". Se realizó cariotipo en sangre, al inicio con metodología estándar, luego con diferentes bandeos convencionales y de alta resolución. En casos especiales se aplicó la técnica FISH y el análisis molecular de los cromosomas X e Y. El número de metafases analizadas también varió con el tiempo, permitiendo evidenciar más de una línea celular. En casos de alta sospecha clínica, la lectura de 100 metafases permitió poner en evidencia mosaicismos bajos conteniendo la línea 45,X. En nuestra serie la monosomía de cromosoma sexual 45, X fue la más frecuente siguiendo los mosaicos numéricos y estructurales de uno de los cromosomas sexuales. Los diferentes hallazgos cromosómicos nos han permitido establecer una correlación fenotipo-cariotipo en regiones específicas de los cromosomas sexuales

Turner Syndrome is a common chromosomal disorder caused by total or partial haploinsufficiency of one of the sex chromosomes. Incidence: 1: 2500. Clinically is characterized by short stature, several typical somatic features, and gonadal dysgenesis. This is a retrospective study involving 630 girls with Turner phenotype and abnormal karyotype, evaluated at the Endocrinology Division of Children´s Hospital "Ricardo Gutiérrez" between 1968 and 2018. The karyotype was done in leucocytes from peripheral blood and the metaphases were analyzed at the beginning with standard methodology and then with different banding techniques, standard and high resolution. In special cases, the FISH technique and the molecular analysis of the X and Y chromosomes were applied. The number of metaphases analyzed also changed with time, allowing the finding of more than one cellular line. In cases where the clinical suspicion was strong, the analysis of 100 metaphases allowed us to put in evidence low mosaicisms containing the 45,X line. In our study the monosomy of sexual chromosome 45, X was the most frequent following the numerical and structural mosaics of one of the sex chromosomes. The different chromosomal constitutions have contributed to establish in our patients phenotype-karyotype correlation with specific regions of the sex chromosomes

Genetic counseling prior to Assisted Reproductive Technology procedures in the era of cytogenomics.

The possibility of sequencing hundreds of genes simultaneously and performing molecular karyotyping thanks to the introduction of novel genetic tools has expanded the use of preconception screening for blastocyst recessive mutations and aneuploidies before embryo transfer, with the ultimate purpose of increasing the proportion of normal healthy newborns. Since medically-assisted reproduction procedures are increasingly required to be eugenic, and the aforementioned genetic tests cover only half of the potential genetic diseases occurring at birth, it seems reasonable to incorporate genetic counseling in the practice of assisted reproduction to avoid prosecution for malpractice.

Male cytogenetic evaluation prior to assisted reproduction procedures performed in Mar del Plata, Argentina.

OBJECTIVE: This paper aimed to estimate the frequency of occurrence and the types of chromosomal abnormalities found in 141 infertile men with abnormal semen parameters. METHODS: the frequency and type of chromosomal abnormalities were determined with male mitotic karyotype analysis from peripheral blood through chromosome banding techniques before assisted reproduction procedures. RESULTS: In this series of 141 infertile men, 19 (13%) had chromosomal anomalies and 35 (25%) had polymorphic variants. The main chromosome abnormalities were reciprocal translocations and marker chromosomes in mosaic. CONCLUSIONS: These results stress the relevance of cytogenetic studies for infertile males as a diagnostic tool and a valuable input in genetic counseling.

New Sequence Variations in Spermatogenesis Candidates Genes.

OBJECTIVE: The aim of this paper was to estimate the frequency and types of mutations in key candidate genes involved in spermatogenesis, and their potential role as a cause of azoospermia /cryptozoospermia. METHODS: The sequencing of the coding region of genes DBY, RBMY, DAZ, CDY and BPY2, excluding the promoter region, was performed in a series of 25 patients with azoospermia or severe oligozoospermia without AZF microdeletions. The exon 3 from the DAZL gene (DAL3) was also sequenced. The sequences obtained were analyzed by ProSeq, DnaSP v5 and compared with the database using Blastn and tblastx. RESULTS: 16 of the 25 patients showed some type of variants, such as transversions, transitions, deletions and/or insertions in the DAZ, DAZL, CDY and RBMY genes. The mutated sequences had between 97 and 99% homology with the specific protein of every gene, except the DAZL (73%) and DAZ (94%) proteins. CONCLUSION: The variants found have not been described previously, suggesting they could be mutations that might affect protein function.

Reprogenetics: Preimplantational genetics diagnosis.

Preimplantational Genetics Diagnosis (PGD) is requested by geneticists and reproductive specialists. Usually geneticists ask for PGD because one or both members of the couple have an increased genetic risk for having an affected offspring. On the other hand, reproductive specialists ask for embryo aneuploidy screening (PGS) to assures an euploid embryo transfer, with the purpose to achieve an ongoing pregnancy, although the couple have normal karyotypes. As embryonic aneuploidies are responsible for pre and post implantation abortions, it is logical to considerer that the screening of the embryonic aneuploidies prior to embryo transfer could improve the efficiency of the in vitro fertilization procedures. Nevertheless, it is still premature to affirm this until well-designed clinical trials were done, especially in women of advanced age where the rate of embryos with aneuploidies is much greater. Although the indications of PGD are similar to conventional prenatal diagnosis (PND), PGD has less ethical objections than the PND. As with the PGD/PGS results only unaffected embryos are transferred, both methods can avoid the decision to interrupt the pregnancy due to a genetic problem; this makes an important difference when compared to conventional prenatal diagnosis.

Estudio preconcepcional en un heterocigota de translocación t(1;4) (p32;q25): análisis de segregación y aneuploidia por FISH doble y triple color / Preconceptional study in a heterozygote of traslocation t(1;4) (p32;q25): segregation analysis and aneuploidy by double and triple color FISH

Introducción: Los reordenamientos cromosómicos equilibrados se asocian con infertilidad debido a que los portadores producen gametas con desequilibrios cromosómicos, que conducen a concepciones anormales, lascuales pueden ser letales o dar lugar a nacidos malformados. Objetivos: Evaluar la segregación del cuadrivalente meiótico y el posible efecto intercromosómico del mismo. Pacientes y Métodos: Consulta para ingresar a nuestro programa de Diagnóstico Genético Preimplantatorio (DGP) una pareja con antecedentes de cuatro abortos espontáneos, dos de ellos con estudio crosómico anormal. La mujer con cariotipo normal y el varón 46,XY,t(1;4) (p32;q25). Antes de acceder al DGP decidimos estudiar a los espermatozoides para analizar la segregación del cuadrivalente con sondas, que a posteriori serían usadas en el DGP, y además evaluar el efecto intercromosómico sobre los cromosomas 13, 18, 21 y cromosomas sexuales. Los estudios se relizaron sobre extendidos de espermatozoides previamente decondensados. Se usaron para realizar FISH las siguientes mezclas de sondas: A) dos centroméricas de los cromosomas 1 y 4,y una telomérica 4q. B) Tres centroméricas de los cromosomas 18 X e Y. C) Dos loci específicas de los cromosomas 13 y 21. Se analizaron aproximadamente 1000 espermatozoides para cada mezcla de sondas utilizadas, registrándose los patrones de segregación del cuadrivalente meiótico con las sondas centroméricas 1 y 4 y la telomérica 4q, y las nulisomías, disomías y diploidías con las sondas de los cromosomas 13, 18, 21 y crosomas sexuales. Resultados: Las frecuencias de los patrones de segregación alternada, adyacente I, adyacente II y 3:1 fueron: 24.0 por ciento, 26.4 por ciento, 11.4 por ciento y 38.2 por ciento, respectivamente. Las frecuencias de aneuploidía de los crosomas 13, 18, 21 y par sexual fueron: 21.5 por ciento, 15.2 por ciento, 31.0 por ciento y 28.2 por ciento, respectivamente. Además se encontró una frecuencia de espermatozoides presumiblemente disploides de 11.2 por ciento. Conclusiones: Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en el futuro DGP no sólo se deberían estudiar a los cromosomas involucrados en la translocación, sino también a los correspondientes a las aneuploidías viables más frecuentes, debido al efecto intercromosómico demostrado

Estudio preconcepcional en un heterocigota de translocación t(1;4) (p32;q25): análisis de segregación y aneuploidia por FISH doble y triple color / Preconceptional study in a heterozygote of traslocation t(1;4) (p32;q25): segregation analysis and aneuploidy by double and triple color FISH

Introducción: Los reordenamientos cromosómicos equilibrados se asocian con infertilidad debido a que los portadores producen gametas con desequilibrios cromosómicos, que conducen a concepciones anormales, lascuales pueden ser letales o dar lugar a nacidos malformados. Objetivos: Evaluar la segregación del cuadrivalente meiótico y el posible efecto intercromosómico del mismo. Pacientes y Métodos: Consulta para ingresar a nuestro programa de Diagnóstico Genético Preimplantatorio (DGP) una pareja con antecedentes de cuatro abortos espontáneos, dos de ellos con estudio crosómico anormal. La mujer con cariotipo normal y el varón 46,XY,t(1;4) (p32;q25). Antes de acceder al DGP decidimos estudiar a los espermatozoides para analizar la segregación del cuadrivalente con sondas, que a posteriori serían usadas en el DGP, y además evaluar el efecto intercromosómico sobre los cromosomas 13, 18, 21 y cromosomas sexuales. Los estudios se relizaron sobre extendidos de espermatozoides previamente decondensados. Se usaron para realizar FISH las siguientes mezclas de sondas: A) dos centroméricas de los cromosomas 1 y 4,y una telomérica 4q. B) Tres centroméricas de los cromosomas 18 X e Y. C) Dos loci específicas de los cromosomas 13 y 21. Se analizaron aproximadamente 1000 espermatozoides para cada mezcla de sondas utilizadas, registrándose los patrones de segregación del cuadrivalente meiótico con las sondas centroméricas 1 y 4 y la telomérica 4q, y las nulisomías, disomías y diploidías con las sondas de los cromosomas 13, 18, 21 y crosomas sexuales. Resultados: Las frecuencias de los patrones de segregación alternada, adyacente I, adyacente II y 3:1 fueron: 24.0 por ciento, 26.4 por ciento, 11.4 por ciento y 38.2 por ciento, respectivamente. Las frecuencias de aneuploidía de los crosomas 13, 18, 21 y par sexual fueron: 21.5 por ciento, 15.2 por ciento, 31.0 por ciento y 28.2 por ciento, respectivamente. Además se encontró una frecuencia de espermatozoides presumiblemente disploides de 11.2 por ciento. Conclusiones: Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en el futuro DGP no sólo se deberían estudiar a los cromosomas involucrados en la translocación, sino también a los correspondientes a las aneuploidías viables más frecuentes, debido al efecto intercromosómico demostrado (AU)

Evaluación citológica de la falla de fertilización en el ICSI / Cytology valuation of failed of fertilization after intracytoplasmic sperm injection

Objetivo: Determinar si la falla de fertilización en el ICSI fue debida a problemas técnicos o a la calidad intrínseca de las gametas. Diseño: Aplicación de la técnica de Tarkowski en los ovocitos que no evindeciaron pronúcleos entre las 15 y 19 horas ni clivaron entre las 40y 48 horas después de efectuado el ICSI. Pacientes: Ovocitos no fertilizados provenientes de 152 mujeres que accedieron a 221 ciclos de ICSI, correspondiendo 82 por ciento a factores masculinos y 18 por ciento a fallas previas de FIV. Principal evolución: El hallazgo citológico de los ovocitos no fertilizados luego del ICSI. Resultados: De los 158 ovocitos citológicamente procesados, 32 fueron no informativos. En los 126 informativos los hallazgos fueron los siguientes: 16 (12,7 por ciento) ovocitos sin la presencia del espermatozoide inyectado, 32 (25,5 por ciento) con la presencia de un espermatozoide intacto, 14 (11 por ciento) con el espermatozoide hinchado, 34 (27 por ciento) con cromosomas de espermatozoides dispersos (condensación prematura de los cromosomas del espermatozoide), 1 (0,8 por ciento) con un pronúcleo, 19 (15 por ciento) con dos pronúcleos, 1 (0,8 por ciento) con cuatro pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con dos complementos haploides de cromosomas mitóticos correspondientes a los pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con un núcleo singámico y 5 (4 por ciento) con un complemento diploide de cromosomas mitóticos correspondiente a la primera división mitótica. Conclusiones: Las principales causas de fallas fueron ovocitos no embriogénicos (50,5 por ciento) e incapacidad fertilizante del espermatozoide (36,5 por ciento). El 13 por ciento fue debida a problemas técnicos de la inyección

Evaluación citológica de la falla de fertilización en el ICSI / Cytology valuation of failed of fertilization after intracytoplasmic sperm injection

Objetivo: Determinar si la falla de fertilización en el ICSI fue debida a problemas técnicos o a la calidad intrínseca de las gametas. Diseño: Aplicación de la técnica de Tarkowski en los ovocitos que no evindeciaron pronúcleos entre las 15 y 19 horas ni clivaron entre las 40y 48 horas después de efectuado el ICSI. Pacientes: Ovocitos no fertilizados provenientes de 152 mujeres que accedieron a 221 ciclos de ICSI, correspondiendo 82 por ciento a factores masculinos y 18 por ciento a fallas previas de FIV. Principal evolución: El hallazgo citológico de los ovocitos no fertilizados luego del ICSI. Resultados: De los 158 ovocitos citológicamente procesados, 32 fueron no informativos. En los 126 informativos los hallazgos fueron los siguientes: 16 (12,7 por ciento) ovocitos sin la presencia del espermatozoide inyectado, 32 (25,5 por ciento) con la presencia de un espermatozoide intacto, 14 (11 por ciento) con el espermatozoide hinchado, 34 (27 por ciento) con cromosomas de espermatozoides dispersos (condensación prematura de los cromosomas del espermatozoide), 1 (0,8 por ciento) con un pronúcleo, 19 (15 por ciento) con dos pronúcleos, 1 (0,8 por ciento) con cuatro pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con dos complementos haploides de cromosomas mitóticos correspondientes a los pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con un núcleo singámico y 5 (4 por ciento) con un complemento diploide de cromosomas mitóticos correspondiente a la primera división mitótica. Conclusiones: Las principales causas de fallas fueron ovocitos no embriogénicos (50,5 por ciento) e incapacidad fertilizante del espermatozoide (36,5 por ciento). El 13 por ciento fue debida a problemas técnicos de la inyección (AU)

Análisis mólecular de los cromosomas sexuales: aplicación al diagnóstico de las patologías gonadales / Molecular analysis of the sexual chromosomes: applications to the diagnosis of the gonadal pathologies

Con el advenimiento de la tecnología ADN recombinante, el análisis mólecular de los cromosomas sexuales en pacientes con patologías gonadales, es hoy una realidad y ha brindado a la clínica un método diagnóstico de alta sensibilidad y eficacia. Debido a que las anomalías de los cromosomas sexuales no siempre pueden ser evaluadas o detectadas por métodos citogéneticos, se estudiaron molecularmente pacientes con disgenesia gonadal con sondas de ADN para los cromosomas X e Y y se amplificó por la reacción en cadena de la polimerasa [PCR] al gen de la diferenciación sexual SRY [Sex Region of Y chromosome] y de la región heterocromática de Y [Yq12-Yqter]. Desde abril de 1989 hasta la fecha se realizó una pesquisa citogénetica, en la que fueron estudiados 134 pacientes con presunción clínica de disgenesia gonadal, de los cuales se seleccionaron 25 pacientes por presentar cariotipos aparentemente normales o con anomalías cromosomicas de difícil interpretación citogénetica. Se analizaron los siguientes pacientes: 9 pacientes con Síndrome de Turner: 6 con cariotipo 45,X/46,Xr[XoY?] con un anillo de un cromosoma sexual no identificable, 2 con cariotipo 45,X/46,Xdel[Y][Yq11] con deleción del brazo largo del Y, 1 mujer 45,X/46,Xidic[Yp12] con un isodicéntrico de brazo largo del Y. Cinco varones azoospérmicos: 2 varones con cariotipo 46,XY aparentemente normal, 1 varón 46,Xi[Yp], 1 con cariotipo46,Xidic[Yq11], 1 con cariotipo 45,X. Cinco varones pseudohermafroditas masculinos: 2 con cariotipo aparentemente normal 46,XY, uno 45,X/46,Xr[Y], uno 46,Xr[Y], uno 45,X/46,XY/47,Xr[Y]r[Y]. Cuatro pacientes con genitales ambiguos: uno con constitución 45,X,t[Y;13], 2 con diferenciación gonadal asimétrica 45,X/46,XY, y un hermafrodita verdadero 46,XX. Dos varones 46,XX: llamados también varones "sex reversed" con cariotipo femenino aparentemente normal sin ningún indicio citogénetico de Y. Además se seleccionaron controles masculinos y femeninos con constitución cromosomica normal. Con las técnicas de Southern blot y PCR se logró establecer el origen X o Y de los anillos cromosómicos, de los cromosomas isodicéntricos y de los cromosomas Y delecionados. El análisis del gen SRY en los varones XX reveló su presencia siendo probablemente el resultado de un mal apareamiento y recombinación anómala de los cromosomas X-Y durante la gametogénesis paterna... (TRUNCADO)(AU)

Análisis mólecular de los cromosomas sexuales: aplicación al diagnóstico de las patologías gonadales / Molecular analysis of the sexual chromosomes: applications to the diagnosis of the gonadal pathologies

Con el advenimiento de la tecnología ADN recombinante, el análisis mólecular de los cromosomas sexuales en pacientes con patologías gonadales, es hoy una realidad y ha brindado a la clínica un método diagnóstico de alta sensibilidad y eficacia. Debido a que las anomalías de los cromosomas sexuales no siempre pueden ser evaluadas o detectadas por métodos citogéneticos, se estudiaron molecularmente pacientes con disgenesia gonadal con sondas de ADN para los cromosomas X e Y y se amplificó por la reacción en cadena de la polimerasa [PCR] al gen de la diferenciación sexual SRY [Sex Region of Y chromosome] y de la región heterocromática de Y [Yq12-Yqter]. Desde abril de 1989 hasta la fecha se realizó una pesquisa citogénetica, en la que fueron estudiados 134 pacientes con presunción clínica de disgenesia gonadal, de los cuales se seleccionaron 25 pacientes por presentar cariotipos aparentemente normales o con anomalías cromosomicas de difícil interpretación citogénetica. Se analizaron los siguientes pacientes: 9 pacientes con Síndrome de Turner: 6 con cariotipo 45,X/46,Xr[XoY?] con un anillo de un cromosoma sexual no identificable, 2 con cariotipo 45,X/46,Xdel[Y][Yq11] con deleción del brazo largo del Y, 1 mujer 45,X/46,Xidic[Yp12] con un isodicéntrico de brazo largo del Y. Cinco varones azoospérmicos: 2 varones con cariotipo 46,XY aparentemente normal, 1 varón 46,Xi[Yp], 1 con cariotipo46,Xidic[Yq11], 1 con cariotipo 45,X. Cinco varones pseudohermafroditas masculinos: 2 con cariotipo aparentemente normal 46,XY, uno 45,X/46,Xr[Y], uno 46,Xr[Y], uno 45,X/46,XY/47,Xr[Y]r[Y]. Cuatro pacientes con genitales ambiguos: uno con constitución 45,X,t[Y;13], 2 con diferenciación gonadal asimétrica 45,X/46,XY, y un hermafrodita verdadero 46,XX. Dos varones 46,XX: llamados también varones "sex reversed" con cariotipo femenino aparentemente normal sin ningún indicio citogénetico de Y. Además se seleccionaron controles masculinos y femeninos con constitución cromosomica normal. Con las técnicas de Southern blot y PCR se logró establecer el origen X o Y de los anillos cromosómicos, de los cromosomas isodicéntricos y de los cromosomas Y delecionados. El análisis del gen SRY en los varones XX reveló su presencia siendo probablemente el resultado de un mal apareamiento y recombinación anómala de los cromosomas X-Y durante la gametogénesis paterna... (TRUNCADO)

Retinoblastoma: un nuevo modelo de carcinogenesis / Retinoblastoma: a new model of carcinogenesis

Se estudiaron las aberraciones cromosómicas de intercambio inducidas "in vitro" por rayos X (150 rads) en linfocitos de pacientes con retinoblastoma y de individuos normales. El retinoblastoma unilateral esporádico (no hereditario) mostró una radiosensibilidad cromosómica normal. Algunos casos de retinoblastoma bilateral esporádico (hereditario) tuvieron una exagerada respuesta a los rayos X, mientras que otros casos se comportaron en forma similar a los controles. Todos los casos de retinoblastoma unilateral hereditario demostraron ser hipersensibles a las radiaciones. La hipersensibilidad a los rayos X presente en algunos individuos con retinoblastoma hereditario, probablemente está relacionada con su labilidad para desarrollar carcinomas secundarios por acción de la radioterapia

Retinoblastoma: un nuevo modelo de carcinogenesis / Retinoblastoma: a new model of carcinogenesis

Se estudiaron las aberraciones cromosómicas de intercambio inducidas "in vitro" por rayos X (150 rads) en linfocitos de pacientes con retinoblastoma y de individuos normales. El retinoblastoma unilateral esporádico (no hereditario) mostró una radiosensibilidad cromosómica normal. Algunos casos de retinoblastoma bilateral esporádico (hereditario) tuvieron una exagerada respuesta a los rayos X, mientras que otros casos se comportaron en forma similar a los controles. Todos los casos de retinoblastoma unilateral hereditario demostraron ser hipersensibles a las radiaciones. La hipersensibilidad a los rayos X presente en algunos individuos con retinoblastoma hereditario, probablemente está relacionada con su labilidad para desarrollar carcinomas secundarios por acción de la radioterapia (AU)