Diagnostic likelihood ratio - the next-generation of diagnostic test accuracy measurement.

To select, interpret, and assess the fitness-for-purpose of diagnostic tests, we need to compare the likelihoods of test results being true vs. false across both infected and non-infected individuals. Diagnostic sensitivity (DSe) and specificity (DSp) report the accuracy of classification in infected and non-infected individuals separately and do not compare these likelihoods directly. Positive and negative predictive values combine these likelihoods, but they also heavily depend on the prevalence in the tested populations and, therefore, cannot be generalised. We propose the adoption of the diagnostic likelihood ratio (LR), which balances the likelihoods of true vs. false results and is population independent. As a relative measure, LR ignores the absolute accuracy of tests, and two tests with different accuracy profiles may have the same LR. This can be easily mitigated by using listed complementary measures of accuracy, including DSe and DSp, or ancillary selection criteria. Overall, LR is a more relevant and universal measure of diagnostic test accuracy, which makes it the logical next-generation measure to adopt. We illustrate the applications and benefits of LR using three assays certified by the World Organisation for Animal Health as serological tests for bovine tuberculosis.

Afin de sélectionner, interpréter et évaluer l'aptitude à l'emploi de tests diagnostiques, nous devons comparer les probabilités de vrais vs faux résultats tant chez les individus infectés que chez les individus non infectés. La sensibilité diagnostique (DSe) et la spécificité diagnostique (DSp) correspondent à la capacité de classifier correctement les individus infectés ou non infectés séparément, sans toutefois comparer directement ces probabilités. Les valeurs prédictives positive et négative combinent ces probabilités mais sont fortement tributaires de la prévalence au sein de la population testée et par conséquent ne peuvent être généralisées. Les auteurs proposent d'adopter le ratio de vraisemblance diagnostique (likehood ratio : LR), qui compare les probabilités que les résultats diagnostiques soient vrais ou faux indépendamment de la population testeé. En tant que mesure relative, le LR ignore l'exactitude absolue d'un test, de sorte que deux tests présentant des profils d'exactitude différents peuvent avoir le même LR. Ces cas peuvent être résolus en faisant appel à d'autres mesures d'exactitude, y compris la DSe et la DSp, ou à des critères alternatifs. Globalement, le LR constitue une mesure plus pertinente et universelle, ce qui justifie son adoption comme la nouvelle génération de mesure pour l'exactitude diagnostique. Les auteurs illustrent les applications et les avantages du LR à travers l'exemple de trois tests validés par l'Organisation mondiale de la santé animale pour la sérologie de la tuberculose bovine.

Para seleccionar e interpretar pruebas de diagnóstico y valorar en qué medida cumplen su propósito debemos poder comparar la probabilidad de que los resultados que deparen sean verdaderos o falsos, y ello en individuos tanto infectados como no infectados. La sensibilidad y la especificidad de diagnóstico dan cuenta de la exactitud con que se pueden catalogar los individuos como infectados y no infectados separadamente, sin comparación directa entre estas dos probabilidades. Los valores predictivos positivos y negativos combinan ambas probabilidades, pero son muy dependientes de la prevalencia en la población analizada, por lo que no es posible generalizarlos. Los autores proponen que se adopte la razón de verosimilitudes (likelihood ratio: LR) del diagnóstico, que da cuenta de la probabilidad de obtener un resultado verdadero frente a la de obtener un resultado falso con independencia de la población de que se trate. Siendo un parámetro relativo, la LR es ajena a la exactitud absoluta de la prueba. Puede ocurrir por lo tanto que dos pruebas con distintas características de exactitud presenten la misma LR, extremo que se puede paliar fácilmente empleando una lista de medidas complementarias de la exactitud, entre ellas la DSe y la DSp, o criterios de selección auxiliares. Globalmente, la LR ofrece una medida más pertinente y universal de la exactitud de una prueba de diagnóstico, con lo que es lógico que sea adoptada como parámetro de próxima generación. Los autores ilustran las aplicaciones y ventajas de la LR aplicándola a tres ensayos aprobados por la Organización Mundial de Sanidad Animal como pruebas serológicas de detección de la tuberculosis bovina.

Quality standards and guidelines for test validation for infectious diseases in veterinary laboratories.

The World Organisation for Animal Health Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, Chapter 1.1.1. summarises the most relevant governance and managerial aspects of veterinary testing laboratories, and Chapter 1.1.5. introduces quality management. Both chapters are based on the International Organization for Standardization/International Electrotechnical Commission standard, ISO/IEC 17025:2005 'General requirements for the competence of testing and calibration laboratories'. This paper provides an update of standards and regulatory bodies relevant for accreditation of quality management systems (QMS), with a focus on ISO/IEC 17025:2017 for testing and calibration laboratories. Important issues and considerations that a laboratory should address in the design and maintenance of its QMS are highlighted and examples provided, in particular aspects of test validation and verification, including measurement uncertainty (MU). A QMS aims to address all aspects of the laboratory operation, including staff, organisational structure, processes, and procedures. Accreditation of a diagnostic laboratory requires three notable components: (a) independent or third-party assessment; (b) suitably validated tests performed by proficient laboratory operators in an adequately equipped laboratory; and (c) ongoing internal and external quality control. Together, these components ensure a test outcome is the result of a standardised process and structured peer review, and demonstrate both competency and ability to produce technically valid diagnostic results that will meet the needs of customers - veterinarians, animal owners, regulators, organisations and industry - as well as the needs of decision-makers involved in animal health and surveillance programmes.

Le chapitre 1.1.1 du Manuel des tests de diagnostic et des vaccins pour les animaux terrestres de l'Organisation mondiale pour la santé animale donne une vue d'ensemble des principaux aspects de la gouvernance et de la gestion d'un laboratoire de diagnostic vétérinaire tandis que le chapitre 1.1.5 introduit aux principes de la gestion de la qualité dans les laboratoires. Les deux chapitres reposent sur la norme de l'Organisation internationale de normalisation/Commission électrotechnique internationale ISO/IEC 17025:2005, « Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d'étalonnages et d'essais ¼. Les auteurs font le point sur l'état actuel des normes et des organismes de réglementation pertinents en matière d'accréditation des systèmes de gestion de la qualité , en mettant l'accent sur la norme ISO/IEC 17025:2017 qui est plus précisément axée sur les laboratoires d'essais et d'étalonnage. Les auteurs mettent en avant un certain nombre de questions et de considérations importantes qu'un laboratoire devrait prendre en compte lors de la conception et de la mise en œuvre continue de son système de gestion de la qualité et les illustrent d'exemples relatifs à des aspects particuliers de la validation et du contrôle des performances d'un test, notamment l'incertitude des mesures. Un système de gestion de la qualité doit courir tous les aspects opérationnels d'un laboratoire, y compris le personnel, la structure organisationnelle, les processus et les procédures. L'accréditation d'un laboratoire de diagnostic repose sur trois composantes majeures : a) l'évaluation, qui doit être conduite de manière indépendante ou par des tiers ; b) des tests validés de manière appropriée et utilisés par des opérateurs de laboratoire qualifiés dans un laboratoire correctement équipé; c) un contrôle de la qualité continu, à la fois interne et externe. Prises ensemble, ces composantes garantissent que les résultats d'un test sont le fruit d'un processus normalisé et d'un examen structuré et conduit par des pairs, et démontrent aussi bien la compétence que la capacité à produire des résultats diagnostiques robustes sur le plan technique et répondant aux besoins des clients ­ vétérinaires, propriétaires d'animaux, régulateurs, organisations et secteur privé ­ ainsi qu'aux besoins des décideurs en charge des programmes de santé animale et de surveillance.

En el capítulo 1.1.1 del Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) se resumen los aspectos más importantes de la dirección y la gestión de laboratorios de análisis veterinarios, mientras que en el capítulo 1.1.5 se aborda el tema de la gestión de la calidad. Ambos capítulos están basados en la norma ISO/IEC 17025:2005, "Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración" de la Organización Internacional de Normalización y la Comisión Electrotécnica Internacional. Los autores ofrecen información actualizada sobre las normas aplicables y los organismos de reglamentación competentes por lo que respecta a la certificación de sistemas de gestión de la calidad, partiendo básicamente de las disposiciones de la norma ISO/IEC 17025:2017 que se aplican a los laboratorios de ensayo y de calibración. También destacan las cuestiones y consideraciones importantes que un laboratorio debe tener en cuenta para concebir y mantener su sistema de gestión de la calidad, en particular los aspectos relativos a la validación y verificación de pruebas, incluida la incertidumbre de medición, y ofrecen ejemplos al respecto. Un sistema de gestión de la calidad tiene por objetivo cubrir todos los aspectos del funcionamiento de un laboratorio, lo que comprende su personal, su estructura organizativa y sus procesos y protocolos. La acreditación de un laboratorio de diagnóstico consta de tres componentes fundamentales: a) una evaluación por parte de un tercero independiente; b) la realización de pruebas debidamente validadas, a cargo de técnicos de laboratorio competentes, en un laboratorio convenientemente equipado; y c) controles continuos de la calidad, tanto internos como externos. La suma de estos componentes garantiza que los resultados de un ensayo sean fruto de un proceso normalizado y de una revisión por homólogos estructurada y demuestra que el laboratorio posee tanto la competencia como la capacidad necesarias para obtener resultados de diagnóstico técnicamente válidos, que respondan a las necesidades tanto de los clientes (veterinarios, propietarios de animales, organismos de reglamentación, organizaciones y entidades industriales) como de las instancias decisorias que intervienen en los programas de sanidad animal y vigilancia zoosanitaria.

Validation, certification and registration of veterinary diagnostic test kits by the World Organisation for Animal Health Secretariat for Registration of Diagnostic Kits.

In the field of diagnostic test validation, World Organisation for Animal Health (OIE) Reference Laboratories (RLs) have a pivotal role and provide the international community with impartial advice and support in the selection, development and validation of diagnostic tests, which can be applied to the specialist diseases for which they are designated. National RLs provide an invaluable function in supporting the introduction, ongoing validation and application of validated diagnostic tests in line with international standards. Experienced staff with extensive knowledge of such systems and access to specialist facilities for conducting work are available to monitor changes or advancements in technology. They consider their relevance and value to evolving diagnostic test requirements. Reference Laboratories often have a broad mandate of activity linking research or development programmes and surveillance activities to benefit the continual assessment and, if necessary, improvement of diagnostic tools. Reference Laboratories maintain or have access to unique biological archives (known positive and negative sample populations) and produce international reference standards, both of which are vital in establishing the necessary and detailed validation of any diagnostic test. Reference Laboratories act either singularly or in collaborative partnerships with other RLs or science institutes, but also, when required, and with impartiality, with the commercial sector, to ensure new tests are validated according to OIE standards. They promote and apply formal programmes of quality assurance (including proficiency testing programmes) for newly validated tests, ensuring ongoing monitoring and compliance with standards, or as required set out any limitations or uncertainties. Reference Laboratories publish information on test validation in the scientific literature and on relevant websites, as well as disseminating information at workshops and international conferences. Furthermore, they can offer training in the processes and systems underpinning test validation.

Dans le domaine de la validation des tests de diagnostic, les Laboratoires de référence de l'Organisation mondiale de la santé animale (OIE) jouent un rôle central et fournissent à la communauté internationale des conseils impartiaux ainsi qu'un soutien pour la sélection, la mise au point et la validation des tests de diagnostic utilisés pour la détection des maladies correspondant à leur domaine de spécialisation. Les Laboratoires de référence nationaux remplissent une fonction inestimable en facilitant l'introduction, la validation continue et l'application de tests de diagnostic validés conformément aux normes internationales. Ces laboratoires sont dotés de personnels expérimentés possédant une connaissance approfondie de ces systèmes et qui ont accès à des installations spécialisées pour mener à bien leurs opérations et suivre de près les changements ou les avancées technologiques. Ils peuvent ainsi examiner leur pertinence et intérêt au regard de l'évolution des exigences relatives aux tests de diagnostic. Le mandat des Laboratoires de référence recouvre souvent un large éventail d'activités reliant les programmes de recherche ou développement et les activités de surveillance, ce qui permet de réaliser une évaluation continue des outils diagnostiques et, si besoin, de procéder à leur amélioration. Les Laboratoires de référence entretiennent ou ont accès à des banques de matériels biologiques uniques (panels d'échantillons positifs et négatifs connus) et produisent des réactifs de référence internationale, deux catégories de matériels essentielles pour procéder à la validation point par point d'un test diagnostique suivant les critères requis. Les Laboratoires de référence interviennent individuellement ou en partenariat avec d'autres Laboratoires de référence ou instituts scientifiques, mais aussi, lorsque c'est nécessaire et dans le respect des règles d'impartialité, avec le secteur privé, afin de s'assurer que les nouveaux tests sont validés conformément aux normes de l'OIE. Ils soutiennent et appliquent des programmes officiels d'assurance de la qualité (y compris en participant à des programmes d'essais d'aptitude inter-laboratoires) pour les tests nouvellement validés et garantissent leur suivi continu ainsi que leur conformité avec les normes, ou, suivant les cas, définissent les limites ou le niveau d'incertitude à prendre en considération. Les Laboratoires de référence publient les données relatives à la validation des tests dans des journaux scientifique et sur les sites Web pertinents et diffusent également des informations sur le sujet lors d'ateliers et de conférences internationales. En outre, ils peuvent proposer des formations sur les procédures et les systèmes qui sous-tendent la validation des tests.

En el terreno de la validación de pruebas de diagnóstico, los Laboratorios de Referencia de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) cumplen una función central y proporcionan a la comunidad internacional servicios de apoyo y asesoramiento imparcial para la selección, el desarrollo y la validación de pruebas de diagnóstico, que pueden aplicarse a la enfermedad para la que cada laboratorio esté designado. Los laboratorios de referencia nacionales cumplen una inestimable función de apoyo a la implantación, la continua validación y la utilización de pruebas de diagnóstico validadas con arreglo a las normas internacionales. Disponen de personal experimentado y muy buen conocedor de estos sistemas y de acceso a instalaciones especializadas de trabajo, lo que les permite seguir de cerca los cambios o adelantos tecnológicos y estudiar su utilidad o interés en relación con la evolución de los requisitos de las pruebas de diagnóstico. Los Laboratorios de Referencia suelen tener un mandato amplio, que a los programas de investigación y desarrollo aúna actividades de vigilancia, en aras de la continua evaluación y, en caso necesario, mejora de las herramientas de diagnóstico. Estos laboratorios poseen (o tienen acceso a) archivos biológicos únicos (conjuntos de muestras probadamente positivas y negativas) y elaboran patrones de referencia internacional, elementos ambos indispensables para llevar a buen fin la necesaria validación detallada de toda prueba de diagnóstico. Los Laboratorios de Referencia pueden trabajar en solitario o en colaboración con otros Laboratorios de Referencia, con institutos científicos e incluso, cuando hace falta, y procediendo con imparcialidad, con entidades del sector privado, a fin de garantizar que toda nueva prueba sea validada con arreglo a las normas de la OIE. También promueven y llevan adelante programas oficiales de garantía de la calidad de pruebas recién validadas (incluidos programas de pruebas de competencia), lo que asegura un seguimiento continuo y el cumplimiento de la normativa en todo momento, o fijan, cuando es necesario, limitaciones o niveles de incertidumbre. Asimismo, estos laboratorios publican datos sobre la validación de pruebas en revistas científicas y sitios web conexos y difunden información al respecto en talleres y conferencias internacionales. Además, pueden impartir formación sobre los procesos y sistemas que fundamentan la validación de pruebas de diagnóstico.

Introduction - Validation of tests for OIE-listed diseases as fit-for-purpose in a world of evolving diagnostic technologies.

The World Organisation for Animal Health (OIE) has made leading contributions to the discipline of test validation science by providing standards and guidelines that inform the test validation process in terrestrial and aquatic animals. The OIE Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, and the Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals describe the test validation pathway in the context of fitness for purpose, elaborate on the importance of diagnostic sensitivity (DSe) and specificity (DSp) as measures of test accuracy, and designate additional factors (e.g. test cost, laboratory throughput capacity and rapidity of test results) that influence choices of a single test over others or the inclusion of a new test in a diagnostic process that includes multiple tests. This paper provides examples of each of the six main testing purposes listed in the Terrestrial Manual and describes additional metrics such as ruggedness and robustness that should be included in the validation of point-of-care tests. Challenges associated with new diagnostic technologies and platforms are described. Validated tests with estimates of DSe and DSp are needed to measure confidence in test results for OIE-listed diseases, to facilitate risk assessments related to animal movement, to estimate true prevalence, and for certification of disease freedom and use in epidemiological (risk factor) studies.

L'Organisation mondiale de la santé animale (OIE) a apporté d'importantes contributions dans le domaine de la validation des tests en élaborant des normes et des lignes directrices qui informent sur le processus de validation des tests chez les animaux terrestres et aquatiques. Le Manuel des tests de diagnostic et des vaccins pour les animaux terrestres et le Manuel des tests de diagnostic pour les animaux aquatiques de l'OIE décrivent le processus de validation des tests dans le contexte de leur aptitude à l'emploi, expliquent l'importance de la sensibilité (DSe) et de la spécificité (DSp) diagnostiques pour mesurer l'exactitude des tests, et désignent d'autres facteurs (ex. coût des tests, capacité de traitement des laboratoires et rapidité d'obtention des résultats des tests) qui influencent le choix d'un test par rapport à un autre ou l'inclusion d'un nouveau test dans un processus de diagnostic composé de multiples tests. Le présent article fournit des exemples pour chacun des six principaux objectifs définis pour les tests figurant dans le Manuel terrestre et décrit des mesures supplémentaires, telle la robustesse (aussi bien interne qu'externe), qu'il conviendrait d'inclure dans la validation des tests au point d'intervention. Il aborde également les défis soulevés par les nouvelles technologies et plateformes de diagnostic. Des tests validés accompagnés d'estimations de la DSe et de la DSp sont nécessaires pour mesurer la fiabilité des résultats des tests pour les maladies listées par l'OIE, faciliter les évaluations des risques associés aux mouvements des animaux, estimer le véritable taux de prévalence et certifier l'absence de maladies ; ils sont également indispensables pour les études (des facteurs de risque) épidémiologiques.

La Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE), con su labor de elaboración de normas y directrices que fundamentan el proceso de validación de pruebas para enfermedades de los animales terrestres y acuáticos, ha hecho aportaciones punteras a la disciplina científica que se ocupa de la validación de pruebas. En su Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres y su Manual de las Pruebas de Diagnóstico para los Animales Acuáticos, la OIE describe el procedimiento de validación de pruebas en clave de idoneidad para determinados propósitos, ahonda en la importancia de la sensibilidad y la especificidad diagnósticas (DSe y DSp) como medidas de la exactitud de una prueba y señala otros factores (como el costo de la prueba, la productividad del laboratorio o la rapidez de los resultados) que también influyen en la elección de una determinada prueba por delante de otras o en la inclusión de una nueva prueba en un proceso de diagnóstico que entraña el uso de varias. Los autores ofrecen ejemplos de cada uno de los seis principales propósitos con las que puede utilizarse una prueba, según vienen enunciados en el Manual Terrestre, y describen otros parámetros que es preciso tener en cuenta a la hora de validar pruebas practicadas en el punto de consulta, como la robustez o también la solidez (ruggedness en inglés; llamada a veces «robustez interlaboratorios¼). También describen las dificultades ligadas a nuevas tecnologías y plataformas de diagnóstico. Se necesitan pruebas validadas y acompañadas de un cálculo de la DSe y la DSp para fines tan diversos e importantes como medir la confianza que merecen los resultados de pruebas para enfermedades inscritas en las listas de la OIE, facilitar la evaluación del riesgo ligado al desplazamiento de animales, estimar la prevalencia real, certificar la ausencia de enfermedad o realizar estudios epidemiológicos (factores de riesgo).

Optimization and diagnostic evaluation of monoclonal antibody-based blocking ELISA formats for detection of neutralizing antibodies to Hendra virus in mammalian sera.

Maintenance of Hendra virus (HeV) in pteropid bat populations has been associated with spillover events in horses, humans and dogs. Experimental studies have demonstrated infections for several other species including guinea pigs, cats and ferrets. The criteria of a sensitive and specific serological test that is effective for a range of species, but which does not require use of live virus, has not been satisfactorily addressed by currently available tests. We have evaluated the use of two HeV neutralizing monoclonal antibodies (mAbs) in a blocking format enzyme-linked immunosorbent assay (bELISA) to detect serum antibody against a recombinant expressed HeV G protein (sol G) in several animal species. The human mAb m102.4 neutralises both HeV and the closely related Nipah virus (NiV); the mouse mAb 1.2 neutralises only HeV. Given these functional differences, we have investigated both antibodies using a bELISA format. Diagnostic sensitivity (DSe) and diagnostic specificity (DSp) were optimized using individual thresholds for mAb 1.2 and m102.4. For mAb 1.2 the positive threshold of >33% inhibition yielded DSe and DSp values of 100% (95% CI 95.3-100.0) and 99.5 (95% CI 98.8-99.8) respectively; for mAb m102.4 a positive threshold of >49% inhibition gave DSe and DSp values of 100 (95% CI 95.3-100.0) and 99.8 (95% CI 99.2-100.0) respectively. At these thresholds the DSe was 100% for both tests relative to the virus neutralization test. Importantly, the occurrence of false positive reactions did not overlap across the assays. Therefore, by sequential and selective application of these assays, it is possible to identify false positive reactions and achieve a DSp that approximates 100% in the test population.

Next-generation sequencing workflows in veterinary infection biology: towards validation and quality assurance.

Recent advancements in DNA sequencing methodologies and sequence data analysis have revolutionised research in many areas of biology and medicine, including veterinary infection biology. New technology is poised to bridge the gap between the research and diagnostic laboratory. This paper defines the potential diagnostic value and purposes of next-generation sequencing (NGS) applications in veterinary infection biology and explores their compatibility with the existing validation principles and methods of the World Organisation for Animal Health. Critical parameters for validation and quality control (quality metrics) are suggested, with reference to established validation and quality assurance guidelines for NGS-based methods of diagnosing human heritable diseases. Although most currently described NGS applications in veterinary infection biology are not primary diagnostic tests that directly result in control measures, this critical reflection on the advantages and remaining challenges of NGS technology should stimulate discussion on its diagnostic value and on the potential to validate NGS methods and monitor their diagnostic performance.

Les avancées récentes enregistrées en matière de séquençage de l'ADN et d'analyse des données de séquences ont révolutionné la recherche dans de nombreux domaines de la biologie et de la médecine, notamment la biologie des maladies animales infectieuses. Ces nouvelles technologies vont permettre de combler le fossé qui séparait la recherche fondamentale du laboratoire de diagnostic. Après avoir défini l'intérêt diagnostique des applications du séquençage de nouvelle génération (SNG) ainsi que leurs finalités dans le domaine de la biologie des maladies animales infectieuses, les auteurs examinent leur compatibilité avec les méthodes et les principes actuels de validation recommandés par l'Organisation mondiale de la santé animale. Ils proposent quelques paramètres critiques de validation et de contrôle qualité (mesure de la qualité), en se référant aux lignes directrices de validation et d'assurance qualité des techniques diagnostiques basées sur le séquençage de nouvelle génération visant à détecter les maladies humaines héréditaires. Certes, la plupart des applications actuelles des méthodes de séquençage de nouvelle génération en biologie des maladies animales infectieuses ne constituent pas des tests de diagnostic primaire (dont dépendent directement les décisions de contrôle sanitaire) ; toutefois, l'analyse critique proposée par les auteurs sur les avantages de cette technologie et sur les difficultés restant à résoudre devrait ouvrir la voie à des discussions sur l'intérêt diagnostique des méthodes recourant au séquençage de nouvelle génération ainsi que sur les perspectives de validation et de contrôle de leurs performances diagnostiques.

Los recientes avances en los métodos de secuenciación del ADN y el análisis de los datos de secuencias han revolucionado la investigación en muchos ámbitos de la biología y la medicina, entre ellos la biología de las infecciones veterinarias. Las nuevas técnicas encierran la promesa de reducir la distancia entre el mundo de la investigación y los laboratorios de diagnóstico. Tras explicar el interés que pueden revestir las aplicaciones de la secuenciación de próxima generación y su posible uso con fines de diagnóstico de infecciones veterinarias, los autores examinan su compatibilidad con los principios y métodos de validación que tiene definidos la Organización Mundial de Sanidad Animal. Asimismo, proponen parámetros básicos para su validación y control de calidad (medición de la calidad), haciendo referencia a las pautas ya establecidas de validación y garantía de calidad de métodos de diagnóstico de enfermedades humanas hereditarias que reposan en técnicas de secuenciación de próxima generación. Aunque la mayoría de las aplicaciones de estas técnicas actualmente descritas en biología de las infecciones veterinarias no constituyen pruebas primarias de diagnóstico, esto es, cuyos resultados puedan inducir directamente medidas de control, esta crucial reflexión sobre las ventajas que entraña la secuenciación de próxima generación y los problemas que aún plantea debería alentar un debate sobre su interés para labores de diagnóstico y sobre la posibilidad de validar métodos basados en estas técnicas y de hacer un seguimiento de la eficacia diagnóstica que ofrezcan.

Development and validation of a 3ABC antibody ELISA in Australia for foot and mouth disease.

OBJECTIVE: To measure the diagnostic performance of an Australian-developed ELISA for the detection of antibodies against the non-structural proteins (NSP) 3ABC of the foot and mouth disease (FMD) virus. DESIGN: Test development and validation study. METHODS: The diagnostic specificity was determined using 2535 sera from naïve animals and 1112 sera from vaccinated animals. Diagnostic sensitivity was calculated from the data for 995 sera from experimentally and field-infected animals from FMD-endemic countries in South East Asia. A commercial ELISA detecting antibodies against FMD virus NSP was used as the reference test to establish relative sensitivity and specificity. Bayesian latent class analysis was performed to corroborate results. The diagnostic window and rate of detection were determined at different times using sera from cattle, sheep and pigs before and after infection, and after vaccination and subsequent infection. Repeatability and reproducibility data were established. RESULTS: At 35% test cut-off, the 3ABC ELISA had an overall diagnostic sensitivity of 91.5% and diagnostic specificity of 96.4%. The diagnostic sensitivity in vaccinated and subsequently infected cattle was 68.4% and diagnostic specificity in vaccinated cattle was 98.0%. CONCLUSIONS: The 3ABC ELISA identified field and experimentally infected animals, as well as vaccinated and subsequently infected animals. Diagnostic sensitivity and specificity estimates for other FMD NSP tests are comparable with the results obtained in this study. This NSP ELISA was found to be 'fit for purpose' as a screening assay at the herd level to detect viral infection and also to substantiate absence of infection.

Henipavirus microsphere immuno-assays for detection of antibodies against Hendra virus.

Hendra and Nipah viruses (HeV and NiV) are closely related zoonotic pathogens of the Paramyxoviridae family. Both viruses belong to the Henipavirus genus and cause fatal disease in animals and humans, though only HeV is endemic in Australia. In general and due to the acute nature of the disease, agent detection by PCR and virus isolation are the primary tools for diagnostic investigations. Assays for the detection of antibodies against HeV are fit more readily for the purpose of surveillance testing in disease epidemiology and to meet certification requirements in the international movement of horses. The first generation indirect ELISA has been affected by non-specific reactions which must be resolved using virus neutralisation serology conducted at laboratory bio-safety level 4 containment (PC4). Recent developments have enabled improvements in the available serology assays. The production of an expressed recombinant truncated HeV G protein has been utilised in ELISA and in Luminex-based multiplexed microsphere assays. In the latter format, two Luminex assays have been developed for use in henipavirus serology: a binding assay (designed for antibody detection and differentiation) and a blocking assay (designed as a surrogate for virus neutralisation). Equine and canine field sera were used to evaluate the two Luminex assays relative to ELISA and virus neutralisation serology. Results showed that Luminex assays can be effective as rapid, sensitive and specific tests for the detection of HeV antibody in horse and dog sera. The tests do not require PC4 containment and are appropriate for high throughput applications as might be required for disease investigations and other epidemiological surveillance. Also, the results show that the Luminex assays detect effectively HeV vaccine-induced antibodies.

Foot and mouth disease in the Lao People's Democratic Republic: I. A review of recent outbreaks and lessons from control programmes.

Foot and mouth disease (FMD) causes sporadic disease outbreaks in the Lao People's Democratic Republic (Lao PDR). As the Lao PDR is a major thoroughfare for transboundary animal movements, regular FMD outbreaks occur, causing economic hardship for farmers and their families. In this review of the recent history of FMD in the Lao PDR between 1997 and 2006, the authors examine the virological and epidemiological aspects of the disease and appropriate control measures, including the distribution of outbreaks, causative serotypes and the molecular epidemiology of the viruses, as well as large-scale vaccination programmes. The dominant serotype, type O, was reported every year from 1998 to 2005. The majority of outbreaks occurred in Vientiane Capital (n = 42; 28%) and the highest number of outbreaks were reported in cattle (n = 94; 61%); followed by buffalo (n = 41; 27%) and pigs (n = 18; 12%). All type A outbreaks occurred in cattle. Type Asia 1 outbreaks were reported in the central provinces around Vientiane Capital between 1996 and 1998.

Foot and mouth disease in the Lao People's Democratic Republic: II. Seroprevalence estimates, using structured surveillance and surveys of abattoirs.

An examination of the seroprevalence of foot and mouth disease (FMD) virus was conducted in the Lao People's Democratic Republic (Lao PDR) from 1996 to 2005, using structured surveillance and abattoir-based studies. Under structured surveillance, seropositivity ranged from 65.7% (Vientiane Capital, 1996) to 3% (Houaphan, 2005) for cattle and buffalo; and from 2.8% (Vientiane Capital, 1998) to 0% in separate studies of pigs. In each study, species composition was significantly associated with seroprevalence rates. For abattoir surveys, the majority of samples (60.5%) came from Vientiane Capital (33.0%), Savannakhet (14.0%) and Champasak (13.5%) provinces. The overall proportion of animals testing positive for the presence of antibodies against the FMD virus was 18.7% (ranging from 50.8% in Vientiane Province to 1% in Phongsali). Generally, antibodies against serotype O were the most prevalent. Cattle and buffalo that tested as seropositive were significantly older than the seronegative animals (p < 0.00005). The overall proportional seropositivity was significantly different for different species, as was the case with the antibodies against serotypes O, A and Asia 1. Some 22% of cattle, 55% of buffalo and 23% of pigs demonstrated seropositivity but this varied significantly between provinces.

Rapid serological profiling by enzyme-linked immunosorbent assay and its use as an epidemiological indicator of foot-and-mouth disease viral activity.

Frequency distribution of reactivity levels of foot-and-mouth disease infection-specific antibodies in livestock populations was analysed. Specific antibody responses against non-capsid polyprotein 3ABC were assessed through a highly sensitive indirect enzyme-linked immonosorbent assay (I-ELISA 3ABC). A graphic display of data was designed based on three negative and three positive categories to illustrate reactivity patterns. The resulting patterns were correlated to the epidemiological status. On this basis, results of over 100,000 sera derived from cattle populations in regions with various well-documented epidemiological situations were compiled and are exemplified in this paper.Distinct distributions of antibody reactivity patterns reflecting the various epidemiological situations were attained. Whereas non-affected areas presented a rather homogenous negative pattern with very limited test-positive reactions, affected regions revealed quite heterogeneous profiles, including positive and negative categories, with distributions that varied according to the region. The use of graphic prints encompassing I-ELISA 3ABC antibody profile responses constituted an adequate epidemiological indicator of the risk of foot-and-mouth disease viral activity, providing immediate visualization for a rapid inference of the epidemiological situation of a region. Moreover, such profiles allowed for convenient follow-up of infection after a focus as a function of time and geographical spread.

Enzyme immunoassays for serological diagnosis of bovine brucellosis: A trial in Latin America.

The results of a field trial conducted in Latin America with two indirect enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) and two competitive ELISAs (CELISAs) for the detection of bovine antibody to Brucella abortus are reported. One of the CELISA formats performed most accurately. The percentage of positive reactions in the CELISA relative to the selected positive rose bengal agglutination test (RBT) and complement fixation test (CFT) results was 97.47%, the percentage of negatives relative to the selected negative RBT and CFT results for unexposed cattle was 98.32%, and the percentage of negatives in cattle vaccinated with B. abortus 19 was 96.51%. The same assay format under Canadian conditions had an actual sensitivity of 100%, a specificity of 99.90% in nonvaccinates, and a specificity of 97.7% in a strain 19-vaccinated population. Overall, the CELISA performed as expected and the results were not dissimilar from the results obtained in the Canadian study. This provided further evidence that this CELISA can in many instances differentiate infected cattle from those that are vaccinated or infected with a cross-reacting organism while still giving very few false-positive or false-negative results.

Minimum amount of penicillin prophylaxis required to control Streptococcus pyogenes epidemic in closed community.

The prophylaxis required to control an epidemic of Streptococcus pyogenes throat infection in a junior detention centre has been reported. In a further epidemic an attempt was made to determine the minimum amount of penicillin required to control the outbreak. Oral penicillin (0.5 g) given as a single daily dose for 10 days to all boys after entry proved effective. The added risk of relatively deprived adolescent boys developing rheumatic fever is stressed.

Streptococcal infection in a Junior Detention Centre: a five-year study.

In 1972 more than 20% of boys admitted to a closed community (Junior Detention Centre) developed acute tonsillitis and group-A streptococci were isolated from more than 40% of all boys at some time during their stay of two months. The most common serotype was M-type 5, which has frequently been associated with rheumatic fever in other epidemics; four cases of rheumatic fever occurred between 1972 and 1977. Various methods were tried to eliminate the infection, but only full penicillin prophylaxis (0.25 g oral penicillin 4 times a day for 10 days) to all boys on entry appeared to be effective. In a sample of cases of acute tonsillitis, group-A haemolytic streptococci were isolated from 31.7% by the use of dry swabs or unenriched transport medium, but with enrichment medium duplicate swabs, 77.6% yielded positive results. We question the current practice in some laboratories of reporting positive cultures only when more than ten colonies of beta-haemolytic streptococci are present. In this survey viruses did not appear to be an important cause of acute tonsillitis. High titres of streptococcal antibodies (antistreptolysin O, anti-desoxyribonuclease B and anti-M associated protein) were found, not only in cases and carriers, but in boys on entry to the centre. This supports epidemiological evidence that adolescent boys are particularly prone to streptococcal throat infections.