An alternative in vitro drug screening test using Leishmania amazonensis transfected with red fluorescent protein.

Fluorescent and colorimetric reporter genes are valuable tools for drug screening models, since microscopy is labor intensive and subject to observer variation. In this work, we propose a fluorimetric method for drug screening using red fluorescent parasites. Fluorescent Leishmania amazonensis were developed after transfection with integration plasmids containing either red (RFP) or green fluorescent protein (GFP) genes. After transfection, wild-type (LaWT) and transfected (LaGFP and LaRFP) parasites were subjected to flow cytometry, macrophage infection, and tests of susceptibility to current antileishmanial agents and propranolol derivatives previously shown to be active against Trypanosoma cruzi. Flow cytometry analysis discriminated LaWT from LaRFP and LaGFP parasites, without affecting cell size or granulosity. With microscopy, transfection with antibiotic resistant genes was not shown to affect macrophage infectivity and susceptibility to amphotericin B and propranolol derivatives. Retention of fluorescence remained in the intracellular amastigotes in both LaGFP and LaRFP transfectants. However, detection of intracellular RFP parasites was only achieved in the fluorimeter. Murine BALB/c macrophages were infected with LaRFP parasites, exposed to standard (meglumine antimoniate, amphotericin B, Miltefosine, and allopurinol) and tested molecules. Although it was possible to determine IC(50) values for 4 propranolol derivatives (1, 2b, 3, and 4b), all compounds were considered inactive. This study is the first to develop a fluorimetric drug screening test for L. amazonensis RFP. The fluorimetric test was comparable to microscopy with the advantage of being faster and not requiring manual counting.

Resíduos de endosulfan em solo (Latossolo Roxo) cultivado com soja [Glycine max (L) Merrill] / Residues of endosulfan in soil (Latossolo Roxo) cultivated with soybean [Glycine max (L) Merril]

O emprego dos agrotóxicos na agricultura reduz a perda de alimentos ao combater as pragas, porém os seus resíduos podem contaminar o meio ambiente, principalmente o solo. Este trabalho teve como objetivo avaliar os níveis de resíduos do inseticida endosulfan e seu principal metabólito, sulfato de endosulfan, em solo cutilvado com a soja. O experimento com a soja foi conduzido em uma área de 900m2, dividida em três parcelas iguais, destinadas ao controle (sem aplicação do inseticida), ao sistema de manejo integrado de pragas (MIP) e ao sistema convencional, com aplicações de endosulfan nas doses de 437g i.a./ha e 1312g i.a./ha, respectivamente. O endosulfan foi quantificado por cromatografia gasosa com detector de captura de elétrons (63Ni), sete dias e um ano após cada pulverização. Não foi detectado nenhum resíduo do inseticida endosulfan no solo (10-20cm), onde foi cultivada a soja no sistema MIP, dentro do limite de quantificação do método [a-endosulfan (0,005mg/g), B-endosulfan (0,005mg/g) e sulfato de endosulfan (0,1mg/g)]. O resíduo de endosulfan total no solo foi de 0,06 mg/g para o MIP na profundidade de 0-10cm e para o sistema convencional os níveis forma 0,14ug/g (0-10cm) e 0,03ug/g (10-20cm). Após um ano da aplicação de endosulfan, nenhum resíduo foi detectado em solo (0-20cm) nos dois sistemas. Ambos os sistemas de cultivo da soja formam eficazes no controle de pragas, todavia o MIP foi sugerido por resultar em menor nível de contaminação de endosulfan no solo

Avaliaçäo de resíduos de Endosulfan em matriz de vagem e soja para comparaçäo de dois sistemas de aplicaçäo do produto formulado / Evaluation of Endosulfan residue in pod and soybean matrices for comparation of two aplication systems of formulated product

O objetivo deste trabalho foi determinar os níveis de resíduos de a-endosulfan, b-endosulfan e sulfato de endosulfan na vagem e no gräo de soja. A soja foi cultivada em uma área de 900 m2, dividida em três parcelas iguais, sendo uma parcela reservada para a soja testemunha, sem aplicaçäo de endosulfan, e as outras duas reservadas para pulverizaçäo deste inseticida por meio do sistema manejo integrado de pragas (MIP) e dos sistema convencional. Os níveis de resíduos de endosulfan foram quantificados por cromatografia gasosa com detector de captura de elétrons (Ni63). Foram encontrados na vagem cerca de 6 e 7 vezes mais resíduos de endosulfan total do que no gräo de soja, nos sistemas MIP e convencional, respectivamente. Em ambos os sistemas, näo foram detectados a presença de sulfato de endosulfan dentro do limite de quantificaçäo do método de 0,5 mg/kg para o gräo de soja e 0,1 mg/kg para a vagem de soja. Em relaçäo aos resultados obtidos conclui-se que a vagem apresentou um efeito protetor à penetraçäo do inseticida no gräo. Ambos os sistemas foram eficientes no combate às pragas, porém sugere-se o uso do MIP porque resultou em menor contaminaçäo do gräo. A soja estava adequada para consumo em relaçäo à Legislaçäo Brasileira de Resíduos de Pesticidas. ( AU)

The objective of this study was to evaluate the residue levels of the α-endosulfan,ß-endosulfan and endosulfan sulphate in pod and soybean. Soybean was cultivated in 900m2 divided inthree equal parcels: control (without endosulfan), PIM and conventional system. The endosulfan residuelevels were quantified by gas chromatography equipped with electron capture detector (Ni63). It wasshowed 6 and 7 times more residues of total endosulfan in PIM and conventional systems, respectively,in pod than soybean. In both systems were not detected endosulfan sulphate within method quantifiedlimit of 0,5 mg/kg and 0,1 mg/kg for soybean and pod, respectively. It concluded that pod showedprotector effect to grains in both systems. Both treatments were efficient to pest control, however PIMwas suggested to use in soybean because it results in low contamination level of food. The soybean wasadequate for eat in relation at Pesticide Residue Brazilian Legislation. (AU)