ABSTRACT
Se describe la validación de un ELISA tipo inhibición, reportado por primera vez en la literatura científica para cuantificar un antígeno vacunal: el polisacárido Vi de Salmonella Typhi, para ser empleado en el control de la calidad de la vacuna antitifoídica cubana vax-TyVi. El ensayo consta de seis pasos: 1) Recubrimiento de placa de reacción con poli-L-lisina y posteriormente polisacárido Vi; 2) Bloqueo con leche descremada; 3) Inhibición o neutralización en tubos de suero anti-Vi de conejo, respectivamente, con polisacárido Vi de Curva de Calibración (concentraciones desde 132 µg/mL), control positivo y muestras de vacuna (3 diluciones); 4) Neutralización de anticuerpos anti-Vi libres, presentes en las mezclas anteriores, por el Polisacárido de Recubrimiento; 5) Reconocimiento de anticuerpos anti-Vi unidos a la placa (conjugado anti-IgG de conejo-fosfatasa alcalina) y 6) Revelado por reacción enzima-sustrato. Los parámetros de validación estudiados y sus resultados fueron: 1) Precisión, expresada como coeficiente de variación a tres niveles de concentración de polisacárido, comprendidos en el rango de su especificación (35, 50 y 70 µg/mL) y evaluada en términos de repetibilidad; precisión intraensayos (cuatro analistas) y reproducibilidad (seis analistas): £ 20por ciento; 2) Linealidad (100*R2): 99,68 por ciento; 3) Límite de detección: 0,5 µg/mL; 4) Exactitud (recuperación para las tres diluciones de la muestra: entre 100 y 118por ciento), y 5) Robustez: no influye 1,5 h de bloqueo (p = 0,52) ni ± 5 min para leer placa (p = 0,56); influye grandemente la calidad del agua (p = 0,026), a favor del agua para inyección. El ensayo es adecuado para los fines propuestos y es una medida de la inmunogenicidad in vitro del polisacárido Vi(AU)
