Potential role of oxidative exoenzymes of the extremophilic fungus Pestalotiopsis palmarum BM-04 in biotransformation of extra-heavy crude oil.

Large amount of drilling waste associated with the expansion of the Orinoco Oil Belt (OOB), the biggest proven reserve of extra-heavy crude oil (EHCO) worldwide, is usually impregnated with EHCO and highly salinized water-based drilling fluids. Oxidative exoenzymes (OE) of the lignin-degrading enzyme system (LDS) of fungi catalyse the oxidation of a wide range of toxic pollutants. However, very little evidences on fungal degradation or biotransformation of EHCO have been reported, which contain high amounts of asphaltenes and its biodegradation rate is very limited. The aims of this work were to study the ability of Pestalotiopsis palmarum BM-04 to synthesize OE, its potential to biotransform EHCO and to survive in extreme environmental conditions. Enzymatic studies of the LDS showed the ability of this fungus to overproduce high amounts of laccase (LACp) in presence of wheat bran or lignin peroxidase (LIPp) with EHCO as sole carbon and energy source (1300 U mgP(-1) in both cases). FT-IR spectroscopy with Attenuated Total Reflectance (ATR) analysis showed the enzymatic oxidation of carbon and sulfur atoms in both maltenes and asphaltenes fractions of biotreated EHCO catalysed by cell-free laccase-enriched OE using wheat bran as inducer. UV-visible spectrophotometry analysis revealed the oxidation of the petroporphyrins in the asphaltenes fraction of biotreated EHCO. Tolerance assays showed the ability of this fungus to grow up to 50,000 p.p.m. of EHCO and 2000 mM of NaCl. These results suggest that P. palmarum BM-04 is a hopeful alternative to be used in remediation processes in extreme environmental conditions of salinity and EHCO contamination, such as the drilling waste from the OOB.

Tamaño de muestra en experimentos biotecnológicos con suspensiones celulares / Sample size in biotechnical experiments with cellular suspensions

Se propone la metodología del Bootstrap para estudiar la calidad de las estimaciones de la medida a travéz de los errores estándar, sesgo e intervalos de confianza, y determinar el tamaño óptimo de muestra usando muestreo piloto, en experimentos biotecnológicos que involucran el estudio de la dinámica de células en suspensión. Se utilizaron las variables peso seco (mg/ml) y número total de células/ml de los cultivares B6749 y V6410 de caña de azúcar (Saccharum spp.). El tamaño de muestra óptimo se calculó a partir del mínimo relativo o punto de máxima curvatura de la función generada entre los errores estándar Bootstrap y el tamaño de muestra. Se encontraron reducciones en más del 50 por ciento del tamaño de la muestra cuando estos resultados son comparados con los métodos clásicos utilizados para el cálculo del tamaño de la muestra

Transformación de embriones somáticos de mango por biobalística / Transformations of somatic embryos of mango for biobalistica

Con la finalidad de transformar genéticamente mango mediante biobalística, se bombardearon ambriones somáticos de variedades Haden, Francis y Kent. Se determinó la dosis máxima de PPT en que los embriones somáticos sobreviven, cultivándolos en el medio Gamborg, Miller y Ojima en concentraciones de 0; 0,5; 1 y 2mg/l de PPT durante tres meses y subcultivado mensualmente para evaluar peso fresco y seco. Los embriones somáticos fueron bombardeados con el plásmido CAMBIA 3201 que contiene los genes que los genes GUS y BAR, con dos tamaños de partículas de tungsteno (0,7 y 1,3um), presión de 80psi, distancias de bombardeo (10,0 y 15,5cm) y 5ug de ADN. Se seleccionaron los embriones transformados en medio Gamborg, Miller y Ojima con 0,5mg/l de PPT. Las condiciones de bombardeo escogidas fueron el tamaño de partículas de 0,7um y la distancias de bombardeo de 16,5cm. Después de tres meses de selección en las concentraciones de PPT utilizadas se hizo evidente la sobrevivencia de los embriones transformados en la variedad Kent, mientras que los embriones no transformados sobrevivieron en concentración de 0,5mg/l. Las variedades Hadem y Madame Francis fueron sensibles a las condiciones de bombardeo y selección suministrados, muriendo después en este proceso. Se logró una sobrevivencia de 4 por ciento y la regeneración de 3 clones por 0,5g de tejido bombardeado. Se evidenció la actividad enzimática de la expresión transitoria del gen GUS pero no la estable y la incorporación de los genes GUS y BAR mediante PCR