ABSTRACT
Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05
(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C
Subject(s)
Mice , Animals , Ascitic Fluid , HIV , Antibodies, Monoclonal , HybridomasABSTRACT
Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C
