Eriobotrya japonica counteracts reactive oxygen species and nitric oxide stimulated by chloramphenicol.

Chloramphenicol is a toxic antibiotic used for certain infections, though aplastic anaemia is one of its side-effects. The results of our experiments showed that blood cells suffered oxidative stress in the presence of chloramphenicol, with a significant increase in reactive oxygen species (ROS) detected by luminol-chemiluminescence (CL). The extract of fruits of Eriobotrya japonica markedly decreased ROS in leukocytes and erythrocytes, the oxidative stress caused by this antibiotic. Nitro Blue Tetrazolium (NBT) assay with purified leukocytes demonstrated that the antioxidant action of E. japonica caused an intracellular reduction in ROS, and that the extracts decreased these promoters of oxidative stress to normal levels in the cytoplasm. Determinations of nitric oxide (NO) generation indicated that E. japonica extracts also inhibited the stimuli of NO provoked by chloramphenicol. This study showed that the immediate antioxidant effect of E. japonica could be associated with the action of vitamin A. The protective action of this fruit was seen on mature leukocytes and erythrocytes, beneficial effect on blood cells suggest that its extract could be used as an antioxidant agent complementing the administration of chloramphenicol, as a modern-day extension to its traditional use in Chinese medicine.

Pore formation, polymerization, hemolytic and leukotoxic effects of a new Enterobacter cloacae toxin neutralized by antiserum.

A new toxin of Enterobacter cloacae was purified and studied by SDS-PAGE electrophoresis with the purpose of investigating its ability to generate polymers and their molecular mass. Monomer of 13.3 kDa and structures of multimeric mass were detected. The toxin of 66 kDa was the most abundant form of toxin. This polymer and the monomer were selected to examine blood cells damage. Membrane pores caused by both toxin forms seemed to be of similar dimension (estimated in 3.6 nm by experiments with osmotic protectors) and were able to lyse erythrocytes and leukocytes. The results obtained indicate that polymerization and pore formation are involved in the molecular events that participate in the cytotoxic effects of E. cloacae toxin. Immunization of rabbits with 13.3kDa toxin generated antibody response capable of inhibiting oxidative stress as well as hemolytic and leukotoxic effects. Immunoblotting indicated that monomer and polymer reacted with antihemolysin serum. The importance of E. cloacae toxin "in vivo" was studied in animals by means of assays performed in peritoneum of rats, inoculated with the hemolytic strain (C1) and a non-hemolytic variant (C4). Both strains stimulated infiltration of leukocytes in peritoneum, but C1 caused cell death and lysis wheras assays with C4 maintained the viability of leukocytes even within 5 h after extraction of samples.

Bacteriocin of Enterococcus from lactoserum able to cause oxidative stress in Staphylococcus aureus.

The effect of a bacteriocin of Enterococcus on the oxidative metabolism of sensitive bacteria was investigated through the detection of oxidative stress by chemiluminescence (CL). The bacteriocin named EntB was purified to study the action on Staphylococcus aureus isolated from cosmetic. Chromatographic separation of EntB indicated different states of oligomerization with molecular weights multiple of 12,000Da monomeric form. The monomer purified by ion exchange was studied in its capacity to affect the oxidative metabolism of S. aureus, which showed increase of anion superoxide (O(2)(-)) when incubated with EntB. This effect was compared to the action of EntB on leukocytes as an assay of toxicity. EntB did not generate significant oxidative stress in leukocytes. Pyoverdin, a leukotoxic pigment of Pseudomonas fluorescens, was taken as reference, and it was found that this pigment caused similar oxidative stress to EntB in S. aureus; however, pyoverdin generated high production of anion superoxide (O(2)(-)) in leukocytes, while EntB did not increase the level of O(2)(-).

Método para cuantificar actividad proteolítica sobre sustratos insolubles coloreados / Method for quantitative proteolytic activity about stained substrates insoluble

Se cuantificó la actividad proteolítica de Staphylococcus aureus aislados de infecciones del hombre, aplicando una modificación de la técnica efectuada por otros autores con Pseudomonas aeruginosa. Además del polvo de piel coloreado con Azul Brillante de Remazol utilizado con esta bacteria, se prepararon otros sustratos insolubles, tales como elastina-Rojo Congo, colágeno-Rojo Congo y polvo de ubre-Rojo Congo. Fue posible comprobar mayor actividad proteolítica sobre colágeno que sobre elastina, mientras que con los extractos o polvos tisulares se evidenció más proteólisis con polvo de ubre de vaca (PUH) que con polvo de piel (PPA). Cabe destacar que las cepas procedían de infecciones humanas, incluyendo afecciones no epidérmicas y una de colección ATCC. El método desarrollado constituyó una ventaja con respecto a las técnicas clásicas de bacteriología que detectan cualitativamente la actividad proteolítica

Método para cuantificar actividad proteolítica sobre sustratos insolubles coloreados / Method for quantitative proteolytic activity about stained substrates insoluble

Se cuantificó la actividad proteolítica de Staphylococcus aureus aislados de infecciones del hombre, aplicando una modificación de la técnica efectuada por otros autores con Pseudomonas aeruginosa. Además del polvo de piel coloreado con Azul Brillante de Remazol utilizado con esta bacteria, se prepararon otros sustratos insolubles, tales como elastina-Rojo Congo, colágeno-Rojo Congo y polvo de ubre-Rojo Congo. Fue posible comprobar mayor actividad proteolítica sobre colágeno que sobre elastina, mientras que con los extractos o polvos tisulares se evidenció más proteólisis con polvo de ubre de vaca (PUH) que con polvo de piel (PPA). Cabe destacar que las cepas procedían de infecciones humanas, incluyendo afecciones no epidérmicas y una de colección ATCC. El método desarrollado constituyó una ventaja con respecto a las técnicas clásicas de bacteriología que detectan cualitativamente la actividad proteolítica

Enterotoxinas y hemolisinas en Klebsiella pneumoniae / Enterotoxins and hemolysins in Klebsiella pneumoniae

Se estudió la capacidad de producir exterotoxinas en cepas de Klebsiellas pneumoniae aisladas de lactantes internados con septicemia y diarrea. La actividad enterotóxica se investigó mediante las pruebas del ratón lactante y del intestino ligado de conejo, determinando respectivamente el incremento del peso intestinal y la acumulación de fluido en los segmentos ligados. Los resultados indicaron que las bacterias provenientes de sangre, intestino y líquido cefalorraquídeo presentaron efecto semejante al observado con Escherichia coli enteropatógena, pero con mayor reacción inflamatoria. Las klebsiella se aislaron inicialmente de materia fecal y luego de sangre, originando finalmente meningitis, que resultó mortal en cuatro de los ocho casos estudiados. La entetoxina posee actividad hemolítica, pero difiere de la hemolisina activa en presencia de agentes reductores, porque tiene un rango de especies sensibles más amplio; no se inactiva por contacto con el oxígeno; no requiere de grupos sulfhidrilos libres para hemolizar eritrocitos; no pierde actividad a 60-C y sólo está presente en un número reducido de cepas con klebolisina, que es la hemolisina activada por agentes reductores como el 2 mercaptoetanol

Enterotoxinas y hemolisinas en Klebsiella pneumoniae / Enterotoxins and hemolysins in Klebsiella pneumoniae

Se estudió la capacidad de producir exterotoxinas en cepas de Klebsiellas pneumoniae aisladas de lactantes internados con septicemia y diarrea. La actividad enterotóxica se investigó mediante las pruebas del ratón lactante y del intestino ligado de conejo, determinando respectivamente el incremento del peso intestinal y la acumulación de fluido en los segmentos ligados. Los resultados indicaron que las bacterias provenientes de sangre, intestino y líquido cefalorraquídeo presentaron efecto semejante al observado con Escherichia coli enteropatógena, pero con mayor reacción inflamatoria. Las klebsiella se aislaron inicialmente de materia fecal y luego de sangre, originando finalmente meningitis, que resultó mortal en cuatro de los ocho casos estudiados. La entetoxina posee actividad hemolítica, pero difiere de la hemolisina activa en presencia de agentes reductores, porque tiene un rango de especies sensibles más amplio; no se inactiva por contacto con el oxígeno; no requiere de grupos sulfhidrilos libres para hemolizar eritrocitos; no pierde actividad a 60-C y sólo está presente en un número reducido de cepas con klebolisina, que es la hemolisina activada por agentes reductores como el 2 mercaptoetanol (AU)

Actividad hemolítica de Klebsiella pneumoniae sobre glóbulos rojos de conejo / Hemolytic activity of Klebsiella pneumoniae on rabbit erythrocytes

Se investigó la actividad hemolítica de Klebsiella pneumoniae, empleando cepas de referencia y cepas aisladas de infecciones. Todas las bacterias estudiadas resultaron hemolíticas en forma selectiva sobre eritrocitos de conejo. El frío intensificó el efecto lítico sobre los glóbulos rojos. Se estimó la capacidad hemolítica de las cepas mediante el diámetro de los halos producidos alrededor de orificios inoculados con 5 micron**l de suspensiones bacterianas. Cuando se realizó la detección de hemolisis en medios líquidos, sólo fue posible evidenciar lisis franca al tratar los cultivos con ciertos agentes reductores; de los cuales el más efectivo resultó el 2 mercaptoetanol. A la misma concentración los demás agentes químicos utilizados dieron menor porcentaje de eritrocitos lisados. La actividad hemolítica apareció en los cultivos durante la fase exponencial del crecimiento bacteriano y al cabo de 24 horas disminuyó al 33% del valor máximo alcanzado. Tanto la hemolisina cruda como la purificada reqirieron SH-activación y fueron inhibidas por suero