Strain-specific polyketide synthase genes of Aspergillus niger.

In silico comparison of 34 putative pks genes in Aspergillus niger strain CBS 513.88 versus A. niger strain ATCC 1015 genome revealed significant nucleotide identity (>95% covering a minimum of 99% of the gene sequence) for 31 of these genes (approximately 91%). A. niger CBS 513.88 harbors three putative pks genes (An01g01130, An11g05940, and An15g07920), for which nucleotide identity was not found in A. niger ATCC 1015. To compare the results of the in silico analysis with the in vivo situation, experimental data were obtained for a large number of A. niger strains obtained from different substrates and geographical regions. Three putative pks genes that were found to be variable between the two A. niger strains using bioinformatics tools were in fact strain-specific genes based on experimental data. The PCR amplification signals for the An01g01130, An11g05940, and An15g07920 pks genes were detected in only 97%, 71%, and 26% of the strains, respectively. Southern blot analyses confirmed the PCR data. Because one of the strain-specific pks genes (An15g07920) is located in a putative ochratoxin cluster, we focused our investigation on that region. We assessed the ochratoxin production capability of the 119 A. niger strains and found a positive association between the presence of this pks gene and the capability of the respective strain to produce ochratoxin.

Obtenção de mutantes de Aspergillus carbonarius via transformação genética mediada por Agrobacterium tumefaciens / Generation of Aspergillus carbonarius mutants by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation method

Aspergillus carbonarius é um potente produtor de ocratoxina A, uma toxina que apresenta efeitos nefrotóxico e carcinogênico. O conhecimento de genes envolvidos em sua biossíntese pode contribuir para o desenvolvimento de medidas de controle. O método de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens tem sido demonstrado como uma importante ferramenta para a obtenção de mutantes insercionais visando à caracterização de novos genes. O objetivo deste trabalho foi adequar o método de transformação genética via A. tumefaciens para a linhagem ITAL187 de A. carbonarius e obter mutantes alterados para a produção de ocratoxina A. Conídios foram transformados para resistência a higromicina B usando a linhagem AGL-1 de A. tumefaciens. A freqüência média de transformação foi de 20,04 transformantes por 105 conídios-alvo. A prova física da transformação foi obtida pela detecção do gene hph por PCR e Southern Blot. Esta última demonstrou que a integração do DNA exógeno ocorreu de forma aleatória no genoma fúngico. Dentre 238 transformantes, 12 (5,042%) mostraram variações morfológicas. Três mutantes (T44, T47 e T188) com significativa redução e dois mutantes (T238 e T162) com aumento da capacidade de produção de ocratoxina A foram obtidos. A identificação dos genes nocauteados contribuirá para a compreensão da biossíntese desta toxina.