Anaplasma marginale PURE ISOLATE OBTAINED IN COLOSTRUM-DEPRIVED NEWBORN CALVES / OBTENÇÃO DE ISOLADO PURO DE Anaplasma marginale EM BEZERROS NEONATOS PRIVADOS DE COLOSTRO

This study was conducted with the objective of obtaining pure autochthonous isolates of Anaplasma marginale from blood samples of bovines that have been raised in the tick-borne disease endemic area of the municipality of Goiânia. The inoculum of A. marginale was prepared from a donor animal, known to be natural carrier of hemoparasite mixed infections, after treatment with a babesicid sterilizing dose of imidocarb dipropionate. A 20 mL blood sample was collected from the donor animal 2 days post-infection and then transferred to a colostrum-deprived and hemoparasite free newborn calf. The receptor animal showed signs of fever and apathy with patent A. marginale parasitemia 30 days after inoculation. Blood sample was then collected and prepared as stabilates to be cryopreserved and to take part of an autochthonous blood parasites isolates library. The isolate purity was assured concomitantly by specific seroconversion tests, by PCR and by finally by the subinoculation of susceptible calves with the cryopreseved stabilates. It was confirmed that the use of colostrum-deprived free newborn calves as susceptible animals may be considered a practical and effective model to obtain pure hemoparasite isolates in endemic areas with additional advantages such as feasibility and low cost. Key words: Anaplasma marginale, isolates, calves, bovine anaplasmosis.

O trabalho foi realizado com o objetivo principal de obter isolados autóctones puros de Anaplasma marginale a partir de amostra de sangue de bovino criado em uma área endêmica para a tristeza parasitária bovina no município de Goiânia. Obteve-se o inóculo para o isolamento de A. marginale de animal doador, portador de infecções naturais mistas, após receber tratamento seletivo com dose babesicida esterelizante de dipropionato de imidocarb. Dois dias após esse tratamento, colheu-se dele uma amostra de sangue de 20 mL do animal doador para inoculação em bezerro neonato privado de colostro e livre de infecções por hemoparasitos. Após trinta dias da inoculação, o receptor apresentou febre, apatia e parasitemia patente por A. marginale. Amostras de sangue foram então colhidas e preparadas na forma de estabilizados para serem criopreservadas e, assim, comporem banco de isolados de hemoparasitos autóctones. Realizou-se a comprovação da pureza do isolado, concomitantemente, pela demonstração de soroconversão específica, pela reação de PCR e, ainda, pela subinoculação da amostra criopreservada em bezerro suscetível. Constatou-se ainda que o uso de bezerros neonatos privados de colostro, como animais suscetíveis, pode ser considerado como modelo prático, eficaz e relativamente barato para o isolamento de hemoparasitos em regiões endêmicas. PALAVRAS-CHAVES: Anaplasma marginale, anaplasmos

DINAMIC OF NATURAL INFECTION IN NEWBORN CALVES EXPOSED TO BY Babesia bigemina AS DETECTED BY POLIMERASE REACTION CHAIN / DINÂMICA DA INFECÇÃO NATURAL POR Babesia bigemina EM BEZERROS A PARTIR DO NASCIMENTO DETECTADO PELA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE

With the objetive of using PCR to study the dynamic of natural infection caused by Babesia bigemina in calves livestock in extensive system, 266 samples of blood were collected from a group of 37 calves from birth to approximately 165 days old. The samples were collected with an average intervale of 19 days and distributed according to age 0 to 15 days old, 16 to 30 days and successively until 165 days. Out of the total of the 266 samples, 116 (43.60%) were PCR positive. The reaction detected the presence of the parasite in all the intervals of collection and most of the prime infection, 12 in 37 (32.43%) were detected in the period between 31 and 45 days. Out of the 37 calves analysed, only one presented a positive PCR result within the two groups aged under 31 days. This animal was two days old at the moment of the collection. This result suggest a case of transplacentary transmission of Babesia bigemina.KEY WORD: Babesia bigemina, bovine, infection, PCR.

Com o objetivo de estudar por PCR a dinâmica da infecção natural da Babesia bigemina em bezerros criados em sistema extensivo, foram colhidas 266 amostras de sangue de um grupo de 37 bezerros, a partir do nascimento até aproximadamente 165 dias de vida, com intervalo médio de 19 dias entre as colheitas. Distribuíram-se as amostras de acordo com os grupos de diferentes faixas etárias (entre 0 e 15 dias, entre 16 e 30 dias e assim sucessivamente até 165 dias). Do total de 266 amostras, 116 (43,60%) mostraram-se positivas para a PCR. A reação foi capaz de detectar a presença do parasito em todos os intervalos das colheitas e registrou-se o maior número de primo-infecções 12 em 37 (32,43%) no período de 31 a 45 dias. Dos 37 bezerros estudados, apenas um apresentou resultado da PCR positivo nos dois grupos de faixa etária inferior a 31 dias. Este animal apresentava dois dias de vida no momento da colheita, sugerindo um caso de transmissão transplacentária de B. bigemina.PALAVRAS-CHAVES: Babesia bigemina, bovino, infecção, PCR.

Anaplasma marginale PURE ISOLATE OBTAINED IN COLOSTRUM-DEPRIVED NEWBORN CALVES / OBTENÇÃO DE ISOLADO PURO DE Anaplasma marginale EM BEZERROS NEONATOS PRIVADOS DE COLOSTRO

This study was conducted with the objective of obtaining pure autochthonous isolates of Anaplasma marginale from blood samples of bovines that have been raised in the tick-borne disease endemic area of the municipality of Goiânia. The inoculum of A. marginale was prepared from a donor animal, known to be natural carrier of hemoparasite mixed infections, after treatment with a babesicid sterilizing dose of imidocarb dipropionate. A 20 mL blood sample was collected from the donor animal 2 days post-infection and then transferred to a colostrum-deprived and hemoparasite free newborn calf. The receptor animal showed signs of fever and apathy with patent A. marginale parasitemia 30 days after inoculation. Blood sample was then collected and prepared as stabilates to be cryopreserved and to take part of an autochthonous blood parasites isolates library. The isolate purity was assured concomitantly by specific seroconversion tests, by PCR and by finally by the subinoculation of susceptible calves with the cryopreseved stabilates. It was confirmed that the use of colostrum-deprived free newborn calves as susceptible animals may be considered a practical and effective model to obtain pure hemoparasite isolates in endemic areas with additional advantages such as feasibility and low cost. Key words: Anaplasma marginale, isolates, calves, bovine anaplasmosis.

O trabalho foi realizado com o objetivo principal de obter isolados autóctones puros de Anaplasma marginale a partir de amostra de sangue de bovino criado em uma área endêmica para a tristeza parasitária bovina no município de Goiânia. Obteve-se o inóculo para o isolamento de A. marginale de animal doador, portador de infecções naturais mistas, após receber tratamento seletivo com dose babesicida esterelizante de dipropionato de imidocarb. Dois dias após esse tratamento, colheu-se dele uma amostra de sangue de 20 mL do animal doador para inoculação em bezerro neonato privado de colostro e livre de infecções por hemoparasitos. Após trinta dias da inoculação, o receptor apresentou febre, apatia e parasitemia patente por A. marginale. Amostras de sangue foram então colhidas e preparadas na forma de estabilizados para serem criopreservadas e, assim, comporem banco de isolados de hemoparasitos autóctones. Realizou-se a comprovação da pureza do isolado, concomitantemente, pela demonstração de soroconversão específica, pela reação de PCR e, ainda, pela subinoculação da amostra criopreservada em bezerro suscetível. Constatou-se ainda que o uso de bezerros neonatos privados de colostro, como animais suscetíveis, pode ser considerado como modelo prático, eficaz e relativamente barato para o isolamento de hemoparasitos em regiões endêmicas. PALAVRAS-CHAVES: Anaplasma marginale, anaplasmos

DINAMIC OF NATURAL INFECTION IN NEWBORN CALVES EXPOSED TO BY Babesia bigemina AS DETECTED BY POLIMERASE REACTION CHAIN / DINÂMICA DA INFECÇÃO NATURAL POR Babesia bigemina EM BEZERROS A PARTIR DO NASCIMENTO DETECTADO PELA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE

With the objetive of using PCR to study the dynamic of natural infection caused by Babesia bigemina in calves livestock in extensive system, 266 samples of blood were collected from a group of 37 calves from birth to approximately 165 days old. The samples were collected with an average intervale of 19 days and distributed according to age 0 to 15 days old, 16 to 30 days and successively until 165 days. Out of the total of the 266 samples, 116 (43.60%) were PCR positive. The reaction detected the presence of the parasite in all the intervals of collection and most of the prime infection, 12 in 37 (32.43%) were detected in the period between 31 and 45 days. Out of the 37 calves analysed, only one presented a positive PCR result within the two groups aged under 31 days. This animal was two days old at the moment of the collection. This result suggest a case of transplacentary transmission of Babesia bigemina.KEY WORD: Babesia bigemina, bovine, infection, PCR.

Com o objetivo de estudar por PCR a dinâmica da infecção natural da Babesia bigemina em bezerros criados em sistema extensivo, foram colhidas 266 amostras de sangue de um grupo de 37 bezerros, a partir do nascimento até aproximadamente 165 dias de vida, com intervalo médio de 19 dias entre as colheitas. Distribuíram-se as amostras de acordo com os grupos de diferentes faixas etárias (entre 0 e 15 dias, entre 16 e 30 dias e assim sucessivamente até 165 dias). Do total de 266 amostras, 116 (43,60%) mostraram-se positivas para a PCR. A reação foi capaz de detectar a presença do parasito em todos os intervalos das colheitas e registrou-se o maior número de primo-infecções 12 em 37 (32,43%) no período de 31 a 45 dias. Dos 37 bezerros estudados, apenas um apresentou resultado da PCR positivo nos dois grupos de faixa etária inferior a 31 dias. Este animal apresentava dois dias de vida no momento da colheita, sugerindo um caso de transmissão transplacentária de B. bigemina.PALAVRAS-CHAVES: Babesia bigemina, bovino, infecção, PCR.

Seasonal dynamics of Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) in dogs from a police unit in Goiânia, Goiás, Brazil

The seasonal dynamics of Rhipicephalus sanguineus ticks was developed in dogs from a Police Unit in Goiânia, Goiás, Brazil, from July 2001 to July 2002. The study was carried out on seven naturally infested dogs (two English Cocker Spaniels and five mongrel dogs), with ages between six months and 10 years. Every two weeks, the numbers of feeding larvae, nymphs, and adults were determined. Dogs showing infestation levels above 500 adult ticks received three acaricide treatments. Considering that the treatments had affected the development of some peaking populations of ticks, it was inferred the occurrence of the following peaks: - larvae (four peaks): from August to November, from November to February, from March to May, and from May to July; - nymphs (five peaks): from July to September, from October to December, from December to February, from March to May, and from June to July; - adults (four peaks): from July to October, from October to January, from January to March, and from April to July. The occurrence of these consecutive peaks of activity of each stage of R. sanguineus may indicate that this tick can develop up to four generations per year in Goiânia. On the other hand, if the acaricide treatment did not interfere with the development of R. sanguineus peaks, more than four peaks of each stage have occurred on the dogs. In this case, it is acceptable to infer that more than one population of R. sanguineus was developing within the kennel concomitantly. The mean numbers of each tick stage was similar in the different seasons. The main attachment sites were located on the neck, chest, forelegs, armpits, ears, between toes and on the head. The number of adult ticks feeding on English Cocker Spaniel dogs was 1.4 to 11.5 times higher than that feeding on mongrel dogs.

O estudo de dinâmica sazonal de Rhipicephalus sanguineus foi desenvolvido em cães de uma Unidade da Polícia de Goiânia, Goiás, Brasil, de julho de 2001 a julho de 2002. Sete cães naturalmente infestados com R. sanguineus (dois da raça Cocker Spaniel Inglês, e cinco cães sem raça definida), com idades variando de 6 meses a 10 anos, foram utilizados no monitoramento da infestação. A cada duas semanas, o número de larvas, ninfas e adultos parasitando os animais era contado. Três tratamentos acaricidas foram feitos nos cães que tiveram níveis de infestação de 500 adultos. Considerando que os tratamentos interferiram no desenvolvimento de alguns picos do carrapato, pôde-se inferir que ocorreram nos quatro picos de larvas: de agosto a novembro, de novembro a fevereiro, de março a maio e de maio a julho; cinco picos de ninfas: de julho a setembro, de outubro a dezembro, de dezembro a fevereiro, de março a maio e de junho a julho, e quatro picos de adultos: de julho a outubro, de outubro a janeiro, de janeiro a março e de abril a julho. A ocorrência destes picos consecutivos de cada estágio pode indicar que o R. sanguineus realiza quatro gerações anuais em Goiânia. Por outro lado, se os tratamentos não interferiram no desenvolvimento dos picos de atividade, mais de quatro picos de cada estágio ocorreram nos cães. Então, é aceitável supor que mais de uma população de R. sanguineus estava se desenvolvendo no canil, ao mesmo tempo. O número médio de carrapatos de cada estádio foi similar nas estações do ano. Os sítios preferenciais de fixação foram o pescoço, o peito, as patas, as axilas, as orelhas, os espaços interdigitais e a cabeça. O número de carrapatos contados nos cães da raça Cocker Spainel Inglês foi de 1,4 a 11,5 vezes maior que o número observado nos cães sem raça definida.

Seasonal dynamics of Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) in dogs from a police unit in Goiânia, Goiás, Brazil

The seasonal dynamics of Rhipicephalus sanguineus ticks was developed in dogs from a Police Unit in Goiânia, Goiás, Brazil, from July 2001 to July 2002. The study was carried out on seven naturally infested dogs (two English Cocker Spaniels and five mongrel dogs), with ages between six months and 10 years. Every two weeks, the numbers of feeding larvae, nymphs, and adults were determined. Dogs showing infestation levels above 500 adult ticks received three acaricide treatments. Considering that the treatments had affected the development of some peaking populations of ticks, it was inferred the occurrence of the following peaks: - larvae (four peaks): from August to November, from November to February, from March to May, and from May to July; - nymphs (five peaks): from July to September, from October to December, from December to February, from March to May, and from June to July; - adults (four peaks): from July to October, from October to January, from January to March, and from April to July. The occurrence of these consecutive peaks of activity of each stage of R. sanguineus may indicate that this tick can develop up to four generations per year in Goiânia. On the other hand, if the acaricide treatment did not interfere with the development of R. sanguineus peaks, more than four peaks of each stage have occurred on the dogs. In this case, it is acceptable to infer that more than one population of R. sanguineus was developing within the kennel concomitantly. The mean numbers of each tick stage was similar in the different seasons. The main attachment sites were located on the neck, chest, forelegs, armpits, ears, between toes and on the head. The number of adult ticks feeding on English Cocker Spaniel dogs was 1.4 to 11.5 times higher than that feeding on mongrel dogs.

O estudo de dinâmica sazonal de Rhipicephalus sanguineus foi desenvolvido em cães de uma Unidade da Polícia de Goiânia, Goiás, Brasil, de julho de 2001 a julho de 2002. Sete cães naturalmente infestados com R. sanguineus (dois da raça Cocker Spaniel Inglês, e cinco cães sem raça definida), com idades variando de 6 meses a 10 anos, foram utilizados no monitoramento da infestação. A cada duas semanas, o número de larvas, ninfas e adultos parasitando os animais era contado. Três tratamentos acaricidas foram feitos nos cães que tiveram níveis de infestação de 500 adultos. Considerando que os tratamentos interferiram no desenvolvimento de alguns picos do carrapato, pôde-se inferir que ocorreram nos quatro picos de larvas: de agosto a novembro, de novembro a fevereiro, de março a maio e de maio a julho; cinco picos de ninfas: de julho a setembro, de outubro a dezembro, de dezembro a fevereiro, de março a maio e de junho a julho, e quatro picos de adultos: de julho a outubro, de outubro a janeiro, de janeiro a março e de abril a julho. A ocorrência destes picos consecutivos de cada estágio pode indicar que o R. sanguineus realiza quatro gerações anuais em Goiânia. Por outro lado, se os tratamentos não interferiram no desenvolvimento dos picos de atividade, mais de quatro picos de cada estágio ocorreram nos cães. Então, é aceitável supor que mais de uma população de R. sanguineus estava se desenvolvendo no canil, ao mesmo tempo. O número médio de carrapatos de cada estádio foi similar nas estações do ano. Os sítios preferenciais de fixação foram o pescoço, o peito, as patas, as axilas, as orelhas, os espaços interdigitais e a cabeça. O número de carrapatos contados nos cães da raça Cocker Spainel Inglês foi de 1,4 a 11,5 vezes maior que o número observado nos cães sem raça definida.

TRIPANOSSOMÍASE EM BOVINOS NO MUNICÍPIO DE FORMOSO DO ARAGUAIA, TOCANTINS (relato de caso) / Bovine tripanosomiasis in the municipality of formoso do araguaia county, tocantins, brazil (case report)

The bovine tripanosomiasis by Trypanosoma vivax was reported for the first time in Brazil by Shaw & Lainson, in 1972, in Pará. Recently it has been reported in several areas of the Pantanal Mato-Grossense Region. The objective of the present paper was to report, for the first time, the occurrence of T. vivax in the State of Tocantins, in a Brahman herd of 250 animals, which had been introduced into a property in the municipality of Formoso do Araguaia, coming from São Paulo. From animals presenting signs of weakness, 9 was randomly chosen for detailed clinical assessment and laboratory exams such as blood smears and hematocrit. These animals presented weigh loss, edema, fever and mucous membrane paleness. The microscopic smear examination revealed high parasitemias for T. vivax in samples of three animals, with the packet cell volumes ranging between 15 and 20%. The herd history, the ecosystem of the area and the results of the clinical and laboratory exams confirmed the occurrence of an outbreak of trypanosomiasis by T. vivax in a bovine herd in the State of Tocantins. KEY WORDS: Trypanosoma vivax, bovine trypanosomiasis, Tocantins, epidemiology.

A tripanossomíase bovina por Trypanosoma vivax foi registrada pela primeira vez no Brasil por SHAW & LAINSON, em 1972, no Pará. Recentemente, tem sido reportada em várias regiões do Pantanal Mato-Grossense. O presente trabalho teve como objetivo relatar, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Tocantins, em um rebanho composto de 250 animais da raça Brahman, recém-introduzido em uma propriedade no município de Formoso do Araguaia, procedente de São Paulo. Esc olheram- se ao acaso nove animais que apresentavam sinais de debilidade para a execução de exames clínicos detalhados e colheita de sangue para preparo de esfregaços sangüíneos e determinação do hematócrito. Entre os animais examinados observaram-see emagrecimento, edema de barbela, febre e palidez de mucosa. O exame microscópico revelou parasitemias elevadas por T. vivax em amostras de três animais, cujos hematócritos apresentavam valores entre 15% e 20%. O histórico do rebanho, o ecossistema da região e os resultados dos exames clínicos e laboratoriais confirmaram a ocorrência de um surto de tripanossomíase por T. vivax em um rebanho no Estado do Tocantins. PALAVRAS-CHAVE: Epidemiologia, Trypanosoma vivax, Tocantins, tripanossomíase bovina.

Diferenciação específica entre Taenia saginata e Taenia solium por ensaio de PCR e duplex-PCR

This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex-PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') as well as T. solium specific primers TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') and TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') were selected from different semi-conserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA) extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa.

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.

Diferenciação específica entre Taenia saginata e Taenia solium por ensaio de PCR e duplex-PCR

This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex-PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') as well as T. solium specific primers TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') and TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') were selected from different semi-conserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA) extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa.

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.

BOVINE TRIPANOSOMIASIS IN THE MUNICIPALITY OF FORMOSO DO ARAGUAIA COUNTY, TOCANTINS, BRAZIL (CASE REPORT) / TRIPANOSSOMÍASE EM BOVINOS NO MUNICÍPIO DE FORMOSO DO ARAGUAIA, TOCANTINS (relato de caso)

The bovine tripanosomiasis by Trypanosoma vivax was reported for the first time in Brazil by Shaw & Lainson, in 1972, in Pará. Recently it has been reported in several areas of the Pantanal Mato-Grossense Region. The objective of the present paper was to report, for the first time, the occurrence of T. vivax in the State of Tocantins, in a Brahman herd of 250 animals, which had been introduced into a property in the municipality of Formoso do Araguaia, coming from São Paulo. From animals presenting signs of weakness, 9 was randomly chosen for detailed clinical assessment and laboratory exams such as blood smears and hematocrit. These animals presented weigh loss, edema, fever and mucous membrane paleness. The microscopic smear examination revealed high parasitemias for T. vivax in samples of three animals, with the packet cell volumes ranging between 15 and 20%. The herd history, the ecosystem of the area and the results of the clinical and laboratory exams confirmed the occurrence of an outbreak of trypanosomiasis by T. vivax in a bovine herd in the State of Tocantins. KEY WORDS: Trypanosoma vivax, bovine trypanosomiasis, Tocantins, epidemiology.

A tripanossomíase bovina por Trypanosoma vivax foi registrada pela primeira vez no Brasil por SHAW & LAINSON, em 1972, no Pará. Recentemente, tem sido reportada em várias regiões do Pantanal Mato-Grossense. O presente trabalho teve como objetivo relatar, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Tocantins, em um rebanho composto de 250 animais da raça Brahman, recém-introduzido em uma propriedade no município de Formoso do Araguaia, procedente de São Paulo. Esc olheram- se ao acaso nove animais que apresentavam sinais de debilidade para a execução de exames clínicos detalhados e colheita de sangue para preparo de esfregaços sangüíneos e determinação do hematócrito. Entre os animais examinados observaram-see emagrecimento, edema de barbela, febre e palidez de mucosa. O exame microscópico revelou parasitemias elevadas por T. vivax em amostras de três animais, cujos hematócritos apresentavam valores entre 15% e 20%. O histórico do rebanho, o ecossistema da região e os resultados dos exames clínicos e laboratoriais confirmaram a ocorrência de um surto de tripanossomíase por T. vivax em um rebanho no Estado do Tocantins. PALAVRAS-CHAVE: Epidemiologia, Trypanosoma vivax, Tocantins, tripanossomíase bovina.

SOROVARES DE Leptospira interrogans E RESPECTIVAS PREVALÊNCIAS EM CAVALOS DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIA, GO

A leptospirose eqüina é uma doença infecciosa que se manifesta, principalmente, por uveíte recorrente, abortos e outros distúrbios reprodutivos, podendo ser transmitida acidentalmente ao homem.O presente trabalho teve como objetivo identificar os sorovares do complexo Leptospira interrogans e estudar a sua prevalência em cavalos da microrregião de Goiânia. Para a pesquisa foram utilizadas 182 amostras de soro, colhidas conforme delineamento estatístico. As amostras foram submetidas à pesquisa de anticorpos específicos através da prova de soroaglutinação microscópica, utilizando-se antígenos vivos cultivados em meio EMJH, enriquecido com 10% de soro de coelho, referentes aos seguintes sorovares: australis, autumnalis, ballum, bataviae, butembo, canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, javanica, panama, pomona, pyrogenes, tarassovi, whitcombi e wolffi.Considerou-se amostra positiva aquela que apresentou aglutinação igual ou superior a 1/100. Dos 182 soros sangüíneos analisados, 82 (45,05%) foram reagentes a um ou mais sorovares de Leptospira interrogans e 100 (54,95%)foram negativos. Dentre os soros reagentes, 56 (68,29%)foram positivos para o sorovar ictero haemorrhagie, 11(13,41%) para pomona, 7 (8,53%) para wolffi, 5 (6,09%) para hardjo e 3 (3,65%) para tipo canicola. PALAVRAS-CHAVE: Cavalos, leptospira interrogans, leptospirose, soroprevalência, sorovares, teste

SOROVARES DE Leptospira interrogans E RESPECTIVAS PREVALÊNCIAS EM CAVALOS DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIA, GO

A leptospirose eqüina é uma doença infecciosa que se manifesta, principalmente, por uveíte recorrente, abortos e outros distúrbios reprodutivos, podendo ser transmitida acidentalmente ao homem.O presente trabalho teve como objetivo identificar os sorovares do complexo Leptospira interrogans e estudar a sua prevalência em cavalos da microrregião de Goiânia. Para a pesquisa foram utilizadas 182 amostras de soro, colhidas conforme delineamento estatístico. As amostras foram submetidas à pesquisa de anticorpos específicos através da prova de soroaglutinação microscópica, utilizando-se antígenos vivos cultivados em meio EMJH, enriquecido com 10% de soro de coelho, referentes aos seguintes sorovares: australis, autumnalis, ballum, bataviae, butembo, canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, javanica, panama, pomona, pyrogenes, tarassovi, whitcombi e wolffi.Considerou-se amostra positiva aquela que apresentou aglutinação igual ou superior a 1/100. Dos 182 soros sangüíneos analisados, 82 (45,05%) foram reagentes a um ou mais sorovares de Leptospira interrogans e 100 (54,95%)foram negativos. Dentre os soros reagentes, 56 (68,29%)foram positivos para o sorovar ictero haemorrhagie, 11(13,41%) para pomona, 7 (8,53%) para wolffi, 5 (6,09%) para hardjo e 3 (3,65%) para tipo canicola. PALAVRAS-CHAVE: Cavalos, leptospira interrogans, leptospirose, soroprevalência, sorovares, teste

Assessment of primers designed from the small ribosomal subunit rna for specific discrimination between babesia bigemina and babesia bovis by pcr

Six pairs of species-specific primers were designed from the alignment of the sequences of the SS rRNA gene obtained from the Genbank database for Babesia bigemina (accession number X59604) and for B. bovis (accession number U06105). Three pairs of primers were designed specifically for B. bigemina and another 3 sets of primers for B. bovis. All oligonucleotide sequences selected as primers were examined for similarities to other organisms through the Genbank Blast procedure and these 6 sets of primers demonstrated high level of specificity. The synthetic oligonucleotides were also tested for specificity by PCR assay using genomic DNA extracted from 40 isolates of B. bigemina and 30 from B. bovis, obtained in six different States of Brazil. All 6 sets of primers were validated as 100% specific for the respective parasite. The PCR amplified the expected fragments for each set of primers, as follows: a) B. bigemina: primers GAU5 forward/GAU6 reverse with amplicon of 1,124 bp; primers GAU5 forward/GAU8 reverse with amplicon of 458 bp; primers GAU7 forward/GAU6 reverse with amplicon of 685 bp; b) B. bovis: primers GAU9 forward/GAU10 reverse with amplicon of 541 bp; primers GAU9 forward/GAU 13 reverse with amplicon of 883 bp; primers SOGIN forward/GAU 10 with amplicon of 1211 bp. KEYWORDS: Babesia bovis, Babesia bigemina, SS rRNA gene, PCR, primers, bovine babesiosis.

ASSESSMENT OF PRIMERS DESIGNED FROM THE SMALL RIBOSOMAL SUBUNIT RNA FOR SPECIFIC DISCRIMINATION BETWEEN BABESIA BIGEMINA AND BABESIA BOVIS BY PCR

Six pairs of species-specific primers were designed from the alignment of the sequences of the SS rRNA gene obtained from the Genbank database for Babesia bigemina (accession number X59604) and for B. bovis (accession number U06105). Three pairs of primers were designed specifically for B. bigemina and another 3 sets of primers for B. bovis. All oligonucleotide sequences selected as primers were examined for similarities to other organisms through the Genbank Blast procedure and these 6 sets of primers demonstrated high level of specificity. The synthetic oligonucleotides were also tested for specificity by PCR assay using genomic DNA extracted from 40 isolates of B. bigemina and 30 from B. bovis, obtained in six different States of Brazil. All 6 sets of primers were validated as 100% specific for the respective parasite. The PCR amplified the expected fragments for each set of primers, as follows: a) B. bigemina: primers GAU5 forward/GAU6 reverse with amplicon of 1,124 bp; primers GAU5 forward/GAU8 reverse with amplicon of 458 bp; primers GAU7 forward/GAU6 reverse with amplicon of 685 bp; b) B. bovis: primers GAU9 forward/GAU10 reverse with amplicon of 541 bp; primers GAU9 forward/GAU 13 reverse with amplicon of 883 bp; primers SOGIN forward/GAU 10 with amplicon of 1211 bp. KEYWORDS: Babesia bovis, Babesia bigemina, SS rRNA gene, PCR, primers, bovine babesiosis.

Aspectos epidemiológicos e tratamento da tungíase bovina no município de jataí, estado de goiás

O presente trabalho teve como objetivo relatar a ocorrência de tungíase em bovinos oriundos de seis propriedades rurais localizadas na região sudoeste do Estado de Goiás. De um total de 550 animais examinados clinicamente, 375 (68%) apresentavam lesões características da tungíase. Constatou-se que as extremidades distais dos membros locomotores, especialmente a zona de crescimento do casco, o espaço interdigital e a região dos talões, foram os locais mais acometidos. Através de enucleação cirúrgica, foram colhidas algumas amostras das lesões para o exame microscópico, que permitiu a identificação morfológica das fêmeas ovígeras de Tunga penetrans. Em 43 vacas, observaram-se também lesões típicas nos tetos, sendo que quatro apresentavam mastite clínica. Alguns animais claudicavam durante a marcha. PALAVRAS-CHAVE: Bovino, Tunga, tungiase, Siphonaptera.

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS E TRATAMENTO DA TUNGÍASE BOVINA NO MUNICÍPIO DE JATAÍ, ESTADO DE GOIÁS

O presente trabalho teve como objetivo relatar a ocorrência de tungíase em bovinos oriundos de seis propriedades rurais localizadas na região sudoeste do Estado de Goiás. De um total de 550 animais examinados clinicamente, 375 (68%) apresentavam lesões características da tungíase. Constatou-se que as extremidades distais dos membros locomotores, especialmente a zona de crescimento do casco, o espaço interdigital e a região dos talões, foram os locais mais acometidos. Através de enucleação cirúrgica, foram colhidas algumas amostras das lesões para o exame microscópico, que permitiu a identificação morfológica das fêmeas ovígeras de Tunga penetrans. Em 43 vacas, observaram-se também lesões típicas nos tetos, sendo que quatro apresentavam mastite clínica. Alguns animais claudicavam durante a marcha. PALAVRAS-CHAVE: Bovino, Tunga, tungiase, Siphonaptera.

Estudo da prevalência de anticorpos anti·Anap/asma marginale em bovinos de leite da microrregião de Goiânia, pela reação de imunofluorescência indireta e ELISA

A pesquisa teve como objetivo o cálculo da prevalência de Anaplasma margina/e no rebanho bovino de leite da microrregiãode Goiânia, por meio da reação de imunofluorescência indireta (RI FI) e reação imunoenzimática indireta (ELISA). No delinea- ·mento experimental o mapa da microrregião foi dividido em 47 quadrantes, dos quais 25 foram sorteados para a colheita dematerial. Em cada propriedade visitada foi colhido sangue aleatoriamente em cerca de 10% dos animais. Dessa forma, foramcolhidas 521 amostras de sangue, número acima do recomendado pelo modelo estatístico adotado.Do total das amostras testadas, 505 foram positivas à RIFI e 517 ao ELISA, correspondendo a prevalência de 96,92% e99,23%, respectivamente. A análise estatística dos resultados obtidos por ambas as técnicas sorológicas revelou umaconcordância de 96,16% entre elas, e nenhuma diferença estatisticamente significativa. Das 25 propriedades rurais visitadas,todas (1 00%) apresentaram rebanhos positivos para os testes sorológicos. Com base nos dados obtidos, a microrregião deGoiânia pôde ser caracterizada como área de estabilidade enzoótica para A. marginale, sendo elevado, os riscos de perdaseconômicas na introdução de animais suscetíveis provenientes de áreas livres da enfermidade, sem um planejamentoprofilático adequado.Palavras-chave: Anap/asma marginale; anaplasmose; bovinos; epidemiologia

AVALIAÇÃO IN VITRO DA EFICÁCIA DO CLORFENVINFÓS E DA CIALOTRINA SOBRE O Boophilus microplus, COLHIDOS EM BOVINOS DA BACIA LEITEIRA DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIAGOIÁS

Para a avaliação da eficácia do clorfenvinfós e da cialotrina no combate ao Boophilus microplus na bacia lei teira de Goiânia (GO), amostras de fêmeas ingurgitadas do carrapato, colhidas de bovinos em 22 propriedades rurais da região, foram analisadas pelo teste de imersão de teleóginas. Os princípios ativos foram avaliados nas concentrações normalmente indicadas pelos fabricantes para uso em bovinos como carrapaticida, ou seja, de 500 ppm para o clorfenvinfós e de 45 ppm para a cialotrina. Como resultado, o tratamento com o clorfenvinfós apresentou eficácia de 100%, determinada através da percentagem de inibição da reprodução das teleóginas, enquanto a cialotrina apresentou eficácia insatisfatória como carrapaticida para uso em programas de controle do carrapato, com uma percentagem de inibição da reprodução no valor de 77,2%. PALAVRAS-CHAVES: Clorfenvinfós, cialotrina, Boophilus microplus, organofosforado, piretróide.

AVALIAÇÃO IN VITRO DA EFICÁCIA DO CLORFENVINFÓS E DA CIALOTRINA SOBRE O Boophilus microplus, COLHIDOS EM BOVINOS DA BACIA LEITEIRA DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIAGOIÁS

Para a avaliação da eficácia do clorfenvinfós e da cialotrina no combate ao Boophilus microplus na bacia lei teira de Goiânia (GO), amostras de fêmeas ingurgitadas do carrapato, colhidas de bovinos em 22 propriedades rurais da região, foram analisadas pelo teste de imersão de teleóginas. Os princípios ativos foram avaliados nas concentrações normalmente indicadas pelos fabricantes para uso em bovinos como carrapaticida, ou seja, de 500 ppm para o clorfenvinfós e de 45 ppm para a cialotrina. Como resultado, o tratamento com o clorfenvinfós apresentou eficácia de 100%, determinada através da percentagem de inibição da reprodução das teleóginas, enquanto a cialotrina apresentou eficácia insatisfatória como carrapaticida para uso em programas de controle do carrapato, com uma percentagem de inibição da reprodução no valor de 77,2%. PALAVRAS-CHAVES: Clorfenvinfós, cialotrina, Boophilus microplus, organofosforado, piretróide.