Omparison between two medium for embryo transfer in mares from mangalarga marchador breed / Comparação entre dois meios para transferência de embriões em éguas da raça mangalarga marchador

Different buffers are used in the solution for washing and embryo maintenance during the procedures of equine embryo transfer (EET). The buffers carbonate, phosphate, and zwitterionic are the most used. During the procedures of transference, it is common to keep the embryos into the maintenance solution during a time longer than previewed. This experiment was realized with the objective of comparing the costs and benefits of using two solutions with different buffers for embryo transfer in mares of the breeding Mangalarga Marchador. The solutions are DPBS (phosphate) and Embriocare® (zwitterionic). The embryos were divided randomly in two treatment , zwitterionic and phosphate, and kept in the solution for 0, 30, 60, and 120 minutes. The results indicate that both solutions are efficient (P > 0.05) in the processes of scanning, washing, maintenance at ambient temperature for different time periods (0 to 120 minutes), and inovulation of equine embryos under tropical conditions. The pregnancy rates using the solution were 65% and 69.7%. The greatest pregnancy rate using DPBS was obtained with embryos kept in the solution for 60 minutes (P 0.05). Using zwitterionic buffer, the greatest rate of pregnancy was obtained with embryos kept during 30 minutes in the solution (P 0.05). Since Embriocare® is more expensive, DPBS presented the best cost-benefit ratio.KEY WORDS: E

Diferentes tampões são utilizados nos meios de lavagem e manutenção embrionária durante os procedimentos de transferência de embriões em equinos (TEE). Os mais usados são carbonato, fosfato e zwitteriônico. Durante os procedimentos de transferência é comum que o embrião permaneça por um tempo maior que o previsto em espera no meio de manutenção utilizado. Este experimento foi realizado com o objetivo de comparar o custobenefício de dois meios contendo tampões diferentes DPBS (fosfato) e Embriocare® (zwitteriônico), na transferência de embriões em éguas da raça Mangalarga Marchador. Dividiram-se os embriões aleatoriamente em dois tratamentos zwitteriônico e fosfato , permanecendo em descanso por 0, 30, 60 ou 120 minutos em ambos os meios. Os resultados indicam que esses tampões são igualmente eficientes (P > 0,05) nos processos de rasteamento, lavagem, manutenção à temperatura ambiente por diferentes períodos de tempo (0 a 120 minutos), sendo que as taxas de prenhez obtidas em ambiente tropical foram de 65% e de 69,7%, respectivamente. Porém, obteve-se a maior taxa de prenhez encontrada com DPBS com um tempo de manutenção do embrião por sessenta minutos no meio (P 0,05). No tampão zwitteriônico, a maior taxa de prenhez foi alcançada com trinta minutos no meio (P 0,05). Como a aquisição do Embriocare® foi mais onerosa, o DPBS apresentou o melhor custobenefício.P

OMPARISON BETWEEN TWO MEDIUM FOR EMBRYO TRANSFER IN MARES FROM MANGALARGA MARCHADOR BREED / COMPARAÇÃO ENTRE DOIS MEIOS PARA TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EM ÉGUAS DA RAÇA MANGALARGA MARCHADOR

Different buffers are used in the solution for washing and embryo maintenance during the procedures of equine embryo transfer (EET). The buffers carbonate, phosphate, and zwitterionic are the most used. During the procedures of transference, it is common to keep the embryos into the maintenance solution during a time longer than previewed. This experiment was realized with the objective of comparing the costs and benefits of using two solutions with different buffers for embryo transfer in mares of the breeding Mangalarga Marchador. The solutions are DPBS (phosphate) and Embriocare® (zwitterionic). The embryos were divided randomly in two treatment , zwitterionic and phosphate, and kept in the solution for 0, 30, 60, and 120 minutes. The results indicate that both solutions are efficient (P > 0.05) in the processes of scanning, washing, maintenance at ambient temperature for different time periods (0 to 120 minutes), and inovulation of equine embryos under tropical conditions. The pregnancy rates using the solution were 65% and 69.7%. The greatest pregnancy rate using DPBS was obtained with embryos kept in the solution for 60 minutes (P 0.05). Using zwitterionic buffer, the greatest rate of pregnancy was obtained with embryos kept during 30 minutes in the solution (P 0.05). Since Embriocare® is more expensive, DPBS presented the best cost-benefit ratio.KEY WORDS: E

Diferentes tampões são utilizados nos meios de lavagem e manutenção embrionária durante os procedimentos de transferência de embriões em equinos (TEE). Os mais usados são carbonato, fosfato e zwitteriônico. Durante os procedimentos de transferência é comum que o embrião permaneça por um tempo maior que o previsto em espera no meio de manutenção utilizado. Este experimento foi realizado com o objetivo de comparar o custobenefício de dois meios contendo tampões diferentes DPBS (fosfato) e Embriocare® (zwitteriônico), na transferência de embriões em éguas da raça Mangalarga Marchador. Dividiram-se os embriões aleatoriamente em dois tratamentos zwitteriônico e fosfato , permanecendo em descanso por 0, 30, 60 ou 120 minutos em ambos os meios. Os resultados indicam que esses tampões são igualmente eficientes (P > 0,05) nos processos de rasteamento, lavagem, manutenção à temperatura ambiente por diferentes períodos de tempo (0 a 120 minutos), sendo que as taxas de prenhez obtidas em ambiente tropical foram de 65% e de 69,7%, respectivamente. Porém, obteve-se a maior taxa de prenhez encontrada com DPBS com um tempo de manutenção do embrião por sessenta minutos no meio (P 0,05). No tampão zwitteriônico, a maior taxa de prenhez foi alcançada com trinta minutos no meio (P 0,05). Como a aquisição do Embriocare® foi mais onerosa, o DPBS apresentou o melhor custobenefício.P

Different extenders on sperm motility and plasmatic membrane integrity after ovine semen freezing and thawing / Diferentes diluentes sobre a motilidade e integridade de membrana plasmática após o congelamento e descongelamento de sêmen ovino

The influence at the progressive motility and post-thawing plasmatic membrane integrity of different extenders (Tris-Yolk-based, Tris-Yolk/Skim Milk-based and Skim Milk-based) was studied in rams frozen semen, using a split-sample technique. The semen was obtained from four Santa Inês located in the district Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brazil. A total of 8 semen collections per ram made possible 672 observations, i.e. 32 semen collections/ 3 semen extenders / 7 observations steps. The progressive motility was determined in the cool semen (Mpi) and after dilution with fraction A of extender (Mp1), a 2-hour balance period (Mp2), dilution in fraction B (Mp3), a 14-hour balance period (Mp4), semen exposure to N2-liquid vapor (Mp5) and post-thawing (Mp6). The sperm plasmatic membrane integrity was determined by employing fluorochromes carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide at post-thawing (Mp6). Tris-Yolk-extender showed a Tris-Yolk/Skim Milk- and Skim Milk-extenders superior performance on recovering the post-thawing progressive motility. The rams presented the highest post-thawing sperm membrane integrity when the semen was frozen in Skim Milk-extender, in comparison to the Tris-Yolk and Tris-Yolk/Skim Milk-extenders. Concluding, it is necessary to elucidate the protection underlying mechanism conferred by the extenders studied over the investigated sperm

Foi estudada a influência do leite em pó desnatado, usando-se a técnica de subdivisões da amostragem, sobre a motilidade progressiva e integridade de membrana plasmática, após o congelamento/descongelamento de sêmen ovino. O sêmen foi obtido de quatro carneiros da raça Santa Inês, localizados no distrito de Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 8 coletas de sêmen por carneiro possibilitou 672 observações, i.e., 32 coletas de sêmen/ 3 diluidores de sêmen / 7 repetições. As observações da motilidade progressiva foram avaliadas no sêmen fresco (Mpi), após a diluição com a fração A do diluente (Mp1), o período de equilíbrio de 2 horas (Mp2), a diluição com a fração B (Mp3), o período de equilíbrio de 14 horas (Mp4), a exposição do sêmen ao vapor de N2-líquido (Mp5) e o descongelamento (Mp6). A integridade de membrana plasmática foi avaliada por meio dos fluorocromos, diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio no pós-descongelamento (Mp6). Os diluentes utilizados para o congelamento do sêmen foram Tris-Gema, Tris-Gema-Leite e Leite. O diluente Tris-Gema mostrou desempenho superior aos diluentes Tris-Gema-Leite e Leite no que se refere à recuperação da motilidade progressiva após o descongelamento. Os carneiros da raça Santa Inês apresentaram maior integridade de membrana espermática pós-descongelamento quando o sêmen foi congelado no diluente Leite,

INFLUENCE OF INSULIN IN THE FREEZING OF THE OVINE SEMEN / NFLUÊNCIA DA INSULINA NA CONGELABILIDADE DO SÊMEN DE OVINO

Insulin is present on seminal plasma and it can be involved on sperm capacitation and sperm autocrine metabolism (AQUILA et al., 2005). It was verified the effect of insulin addition on ovine frozen semen extender. The parameters analyzed were sperm motility, sperm cinematic, acrossoma integrity and membrane functionality. Insulin was added to fraction B of TRIS-yolk extender in different concentrations. Sperm motility and cinematic were evaluated 0, 3 and 6 hours after thawing while acrossoma integrity and membrane functionality were evaluated 0 and 6 hours after thawing. The addition of 3 UI/mL of insulin increased amplitude lateral of head (5.42±0.97; C:4.75±0.47) and acrossoma integrity (153.67±16.98; C:134.00±18.08). The addition of 0.3 UI/mL of insulin improved retilinearity tree hours after thawing (83.17±2.71; C:78.67±4.97). It was verified a increase on linearity values on treatments with 0.3 e 3 UI/mL (52.17±2.14; 51.67±3.14; C:46.83±3.60), respectively tree hours after thawing. Treatment with 0.3 e 3 UI/ml showed higher acrossoma integrity than control (146.17±10.91; 146.33±16.02; C:117.00±17.80). Addiction of insulin on ovine frozen semen extender improved sperm motility, sperm cinematic and acrossoma integrity.KEY WORDS: Freezing, insulin, ovine, spermetozoa.

A insulina está presente no plasma seminal e pode envolver-se em eventos da capacitação e metabolismo autócrino do espermatozóide (AQUILA et al., 2005). Assim, estudaram-se os efeitos da insulina adicionada ao diluente de congelamento para sêmen e sua conseqüência na criopreservação, integridade de acrossoma e funcionalidade de membrana de espermatozóide ovino. A insulina foi adicionada na fração B do diluente TRIS-gema em diferentes concentrações. As avaliações da motilidade e cinemática realizaram-se às 0, 3 e 6 horas, enquanto a funcionalidade e integridade de membrana foram avaliadas às 0 e 6 horas após o descongelamento. A adição de 3,0 UI/mL de insulina aumentou (P>0,05) a amplitude lateral de cabeça (5,42±0,97; C:4,75±0,47) e acrossomas íntegros (153,67±16,98; C:134,00±18,08). A concentração de 0,3 UI/mL de insulina melhorou a retilinearidade, quando verificada no período de 3 horas (83,17±2,71; C:78,67±4,97). Nesse mesmo período, observou-se uma elevação nos valores de linearidade nas concentrações de 0,3 e 3,0 UI/mL de insulina (52,17±2,14; 51,67±3,14; C:46,83±3,60, respectivamente). Seis horas após o descongelamento, os tratamentos com 0,3 e 3,0 UI/mL apresentaram valores de acrossomas íntegros mais elevados (146,17±10,91; 146,33±16,02; C:117,00±17,80, respectivamente). A adição de insulina ao diluente aumentou a motilidade, cinemática e integridade de acrossoma do

Different extenders on sperm motility and plasmatic membrane integrity after ovine semen freezing and thawing / Diferentes diluentes sobre a motilidade e integridade de membrana plasmática após o congelamento e descongelamento de sêmen ovino

The influence at the progressive motility and post-thawing plasmatic membrane integrity of different extenders (Tris-Yolk-based, Tris-Yolk/Skim Milk-based and Skim Milk-based) was studied in rams frozen semen, using a split-sample technique. The semen was obtained from four Santa Inês located in the district Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brazil. A total of 8 semen collections per ram made possible 672 observations, i.e. 32 semen collections/ 3 semen extenders / 7 observations steps. The progressive motility was determined in the cool semen (Mpi) and after dilution with fraction A of extender (Mp1), a 2-hour balance period (Mp2), dilution in fraction B (Mp3), a 14-hour balance period (Mp4), semen exposure to N2-liquid vapor (Mp5) and post-thawing (Mp6). The sperm plasmatic membrane integrity was determined by employing fluorochromes carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide at post-thawing (Mp6). Tris-Yolk-extender showed a Tris-Yolk/Skim Milk- and Skim Milk-extenders superior performance on recovering the post-thawing progressive motility. The rams presented the highest post-thawing sperm membrane integrity when the semen was frozen in Skim Milk-extender, in comparison to the Tris-Yolk and Tris-Yolk/Skim Milk-extenders. Concluding, it is necessary to elucidate the protection underlying mechanism conferred by the extenders studied over the investigated sperm

Foi estudada a influência do leite em pó desnatado, usando-se a técnica de subdivisões da amostragem, sobre a motilidade progressiva e integridade de membrana plasmática, após o congelamento/descongelamento de sêmen ovino. O sêmen foi obtido de quatro carneiros da raça Santa Inês, localizados no distrito de Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 8 coletas de sêmen por carneiro possibilitou 672 observações, i.e., 32 coletas de sêmen/ 3 diluidores de sêmen / 7 repetições. As observações da motilidade progressiva foram avaliadas no sêmen fresco (Mpi), após a diluição com a fração A do diluente (Mp1), o período de equilíbrio de 2 horas (Mp2), a diluição com a fração B (Mp3), o período de equilíbrio de 14 horas (Mp4), a exposição do sêmen ao vapor de N2-líquido (Mp5) e o descongelamento (Mp6). A integridade de membrana plasmática foi avaliada por meio dos fluorocromos, diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio no pós-descongelamento (Mp6). Os diluentes utilizados para o congelamento do sêmen foram Tris-Gema, Tris-Gema-Leite e Leite. O diluente Tris-Gema mostrou desempenho superior aos diluentes Tris-Gema-Leite e Leite no que se refere à recuperação da motilidade progressiva após o descongelamento. Os carneiros da raça Santa Inês apresentaram maior integridade de membrana espermática pós-descongelamento quando o sêmen foi congelado no diluente Leite,

Influence of insulin in the freezing of the ovine semen / Nfluência da insulina na congelabilidade do sêmen de ovino

Insulin is present on seminal plasma and it can be involved on sperm capacitation and sperm autocrine metabolism (AQUILA et al., 2005). It was verified the effect of insulin addition on ovine frozen semen extender. The parameters analyzed were sperm motility, sperm cinematic, acrossoma integrity and membrane functionality. Insulin was added to fraction B of TRIS-yolk extender in different concentrations. Sperm motility and cinematic were evaluated 0, 3 and 6 hours after thawing while acrossoma integrity and membrane functionality were evaluated 0 and 6 hours after thawing. The addition of 3 UI/mL of insulin increased amplitude lateral of head (5.42±0.97; C:4.75±0.47) and acrossoma integrity (153.67±16.98; C:134.00±18.08). The addition of 0.3 UI/mL of insulin improved retilinearity tree hours after thawing (83.17±2.71; C:78.67±4.97). It was verified a increase on linearity values on treatments with 0.3 e 3 UI/mL (52.17±2.14; 51.67±3.14; C:46.83±3.60), respectively tree hours after thawing. Treatment with 0.3 e 3 UI/ml showed higher acrossoma integrity than control (146.17±10.91; 146.33±16.02; C:117.00±17.80). Addiction of insulin on ovine frozen semen extender improved sperm motility, sperm cinematic and acrossoma integrity.KEY WORDS: Freezing, insulin, ovine, spermetozoa.

A insulina está presente no plasma seminal e pode envolver-se em eventos da capacitação e metabolismo autócrino do espermatozóide (AQUILA et al., 2005). Assim, estudaram-se os efeitos da insulina adicionada ao diluente de congelamento para sêmen e sua conseqüência na criopreservação, integridade de acrossoma e funcionalidade de membrana de espermatozóide ovino. A insulina foi adicionada na fração B do diluente TRIS-gema em diferentes concentrações. As avaliações da motilidade e cinemática realizaram-se às 0, 3 e 6 horas, enquanto a funcionalidade e integridade de membrana foram avaliadas às 0 e 6 horas após o descongelamento. A adição de 3,0 UI/mL de insulina aumentou (P>0,05) a amplitude lateral de cabeça (5,42±0,97; C:4,75±0,47) e acrossomas íntegros (153,67±16,98; C:134,00±18,08). A concentração de 0,3 UI/mL de insulina melhorou a retilinearidade, quando verificada no período de 3 horas (83,17±2,71; C:78,67±4,97). Nesse mesmo período, observou-se uma elevação nos valores de linearidade nas concentrações de 0,3 e 3,0 UI/mL de insulina (52,17±2,14; 51,67±3,14; C:46,83±3,60, respectivamente). Seis horas após o descongelamento, os tratamentos com 0,3 e 3,0 UI/mL apresentaram valores de acrossomas íntegros mais elevados (146,17±10,91; 146,33±16,02; C:117,00±17,80, respectivamente). A adição de insulina ao diluente aumentou a motilidade, cinemática e integridade de acrossoma do

Aplicação do flunixin meglumine antes da transferência não-cirúrgica de embriões em éguas da raça Mangalarga Marchador

Quarenta embriões de éguas da raça Mangalarga Marchador foram inovulados em igual número de receptoras da mesmaraça. O primeiro grupo foi tratado com 1,1 mg/kg de flunixin meglumine, visando observar o efeito desta droga sobre a taxa degestação na transferência não-cirúrgica de embriões e seu efeito sobre as concentrações plasmáticas de progesterona. Osegundo grupo não foi tratado. O grupo tratado apresentou 55% de taxa de prenhez (11/20), e o controle 75% (15/20) nãoexistindo diferença entre eles. Contudo, para P=20% esta diferença pode ser considerada significativa. O tempo de sincronizaçãodas receptoras e a idade dos embriões no momento das inovulações foram similares. Houve diferença na qualidadedos embriões inovulados, pois as éguas não-gestantes do grupo controle receberam um número maior de embriões regulares(2/5) que as não-gestantes do grupo tratado (1/9). As concentrações plasmáticas de progesterona foram maiores nasreceptoras gestantes do grupo tratado. Tendo em vista os resultados obtidos, não se recomenda a aplicação de flunixinmeglumine em receptoras antes da transferência não-cirúrgica de embriões, com o objetivo de melhorar a taxa de gestação.

Apoptosis in spermatozoa: a new approach in sperm viability evaluation / Apoptose em espermatozóides: uma nova abordagem na avaliação da viabilidade espermática

Animal reproduction biotechnics are developing day after day. However, almost every applied and studied technology are basicly cellular stressful procedures. Cryopreservation is the most used technic for gamette conservation, although in some species this methodology is not efficiently applied. Apoptosis has been recognized as the one of the major causes of poor post-thaw sperm viability. This review presents new concepts about spermatogenesis and research findings on sperm apoptosis.

As biotécnicas aplicadas à reprodução animal desenvolvem-se a cada dia. Entretanto, as tecnologias empregadas e estudadas atualmente envolvem processos de grande estresse celular. A criopreservação é a técnica mais utilizada na conservação de gametas, embora esta metodologia ainda não esteja totalmente dominada em algumas espécies. A apoptose vem sendo vista como uma das causas da baixa viabilidade espermática pós-descongelação. A presente revisão aborda novos conceitos da espermatogênese e resultados de pesquisas deste tipo de morte celular em células espermáticas.

Aplicação do flunixin meglumine antes da transferência não-cirúrgica de embriões em éguas da raça Mangalarga Marchador

Quarenta embriões de éguas da raça Mangalarga Marchador foram inovulados em igual número de receptoras da mesmaraça. O primeiro grupo foi tratado com 1,1 mg/kg de flunixin meglumine, visando observar o efeito desta droga sobre a taxa degestação na transferência não-cirúrgica de embriões e seu efeito sobre as concentrações plasmáticas de progesterona. Osegundo grupo não foi tratado. O grupo tratado apresentou 55% de taxa de prenhez (11/20), e o controle 75% (15/20) nãoexistindo diferença entre eles. Contudo, para P=20% esta diferença pode ser considerada significativa. O tempo de sincronizaçãodas receptoras e a idade dos embriões no momento das inovulações foram similares. Houve diferença na qualidadedos embriões inovulados, pois as éguas não-gestantes do grupo controle receberam um número maior de embriões regulares(2/5) que as não-gestantes do grupo tratado (1/9). As concentrações plasmáticas de progesterona foram maiores nasreceptoras gestantes do grupo tratado. Tendo em vista os resultados obtidos, não se recomenda a aplicação de flunixinmeglumine em receptoras antes da transferência não-cirúrgica de embriões, com o objetivo de melhorar a taxa de gestação.

Punção folicular guiada por ultra-sonografia em éguas tratadas com FSH no estroma ovariano: avaliação da taxa de recuperação dos ovócitos

Um dos maiores problemas observados na eqüinotecnia se refere à otimização no número e precocidade de descendentesque uma égua pode produzir durante sua vida reprodutiva. A transferência de embriões em eqüinos associada às modernastécnicas de reprodução tais como: inseminação artificial com sêmen congelado, congelamento de embriões, punção deovócitos in vivo e fertilização in vitro, possui grande potencial e aplicação prática para redução do intervalo entre gerações deeqüinos com pedigree de alto valor genético, além de permitir a multiplicação e conservação de espécies ameaçadas deextinção. Diante desta premissa, no intuito de contribuir com os estudos nesta área, utilizou-se neste experimento a técnica depunção folicular com uso de uma guia de biópsia e monitoramento ultra-sonográfico. Foi inoculado no estroma ovariano emum grupo de éguas (n=10), 3 mg armour de hormônio folículo estimulante (FSH- 1,5 ml de Folltropin), e no grupo controle(n=10) 1,5 ml de solução salina. Após 24 horas os folículos ³ 15 mm foram puncionados in vitro, obtendo-se um incremento nataxa de recuperação ovocitária significativo para os ovários tratados com FSH (36,36%) quando comparados com os ováriostratados com solução salina (10,52%). A técnica foi reproduzida in vivo e os resultados não foram os mesmos. Acredita-se queo aprimoramento da técnica com relação à realização de lavagens e o incremento d

Punção folicular guiada por ultra-sonografia em éguas tratadas com FSH no estroma ovariano: avaliação da taxa de recuperação dos ovócitos

Um dos maiores problemas observados na eqüinotecnia se refere à otimização no número e precocidade de descendentesque uma égua pode produzir durante sua vida reprodutiva. A transferência de embriões em eqüinos associada às modernastécnicas de reprodução tais como: inseminação artificial com sêmen congelado, congelamento de embriões, punção deovócitos in vivo e fertilização in vitro, possui grande potencial e aplicação prática para redução do intervalo entre gerações deeqüinos com pedigree de alto valor genético, além de permitir a multiplicação e conservação de espécies ameaçadas deextinção. Diante desta premissa, no intuito de contribuir com os estudos nesta área, utilizou-se neste experimento a técnica depunção folicular com uso de uma guia de biópsia e monitoramento ultra-sonográfico. Foi inoculado no estroma ovariano emum grupo de éguas (n=10), 3 mg armour de hormônio folículo estimulante (FSH- 1,5 ml de Folltropin), e no grupo controle(n=10) 1,5 ml de solução salina. Após 24 horas os folículos ³ 15 mm foram puncionados in vitro, obtendo-se um incremento nataxa de recuperação ovocitária significativo para os ovários tratados com FSH (36,36%) quando comparados com os ováriostratados com solução salina (10,52%). A técnica foi reproduzida in vivo e os resultados não foram os mesmos. Acredita-se queo aprimoramento da técnica com relação à realização de lavagens e o incremento d