A Novel Molecular Test to Diagnose Canine Visceral Leishmaniasis at the Point of Care.

Dogs are the principal reservoir hosts of zoonotic visceral leishmaniasis (VL) but current serological methods are not sensitive enough to detect all subclinically infected animals, which is crucial to VL control programs. Polymerase chain reaction (PCR) methods have greater sensitivity but require expensive equipment and trained personnel, impairing its implementation in endemic areas. We developed a diagnostic test that uses isothermal recombinase polymerase amplification (RPA) to detect Leishmania infantum. This method was coupled with lateral flow (LF) reading with the naked eye to be adapted as a point-of-care test. The L. infantum RPA-LF had an analytical sensitivity similar to real time-PCR, detecting DNA of 0.1 parasites spiked in dog blood, which was equivalent to 40 parasites/mL. There was no cross amplification with dog or human DNA or with Leishmania braziliensis, Leishmania amazonensis, or Trypanosoma cruzi. The test also amplified Leishmania donovani strains (N = 7). In a group of clinically normal dogs (N = 30), RPA-LF detected more subclinical infections than rK39 strip test, a standard serological method (50% versus 13.3% positivity, respectively; P = 0.005). Also, RPA-LF detected L. infantum in noninvasive mucosal samples of dogs with a sensitivity comparable to blood samples. This novel molecular test may have a positive impact in leishmaniasis control programs.

Leishmaniasis visceral: contribución a su control mediante el fortalecimiento del diagnóstico del reservorio canino en Posadas, Misiones, Argentina / Visceral leishmaniasis: control contribution by strengthening the diagnosis of dog reservoir in the city of Posadas, Misiones, Argentina

INTRODUCCION: La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad emergente en Argentina. En 2006 se describió el primer caso autóctono en Posadas (Misiones), ciudad que se convirtió en epicentro de la LV.OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la LV canica (LVC) y fortalecer su diagnóstico en Posadas.METODOS: Con un criterio entomológico, la ciudad de Posadas se dividió en islas de alta densidad (IAD) e islas de baja densidad (IBD) de flebótomos. Se seleccionó, de forma arbitraria y mediante imágenes satelitales, la manzana situada más al norte y más al sur de cada IAD e IBD. Se realizó un diseño observacional prospectivo, y se estudió a todos los perros de las manzanas seleccionadas. Se consideró un N inicial de 400 animales para detectar una diferencia de al menos 7% con una potencia de 0,90 y un nivel de 0,05 respecto de la prevalencia global supuesta del 20%. Se tomaron muestras de sangre, punción de ganglios linfáticos y raspado de piel. El estudio incluyó además un test serológico rápido (rK39 canino) y frotis de las muestras para búsqueda parasitológica, que se procesaron y evaluaron en el Instituto Municipal de Salud Animal de Posadas y en el Instituto Nacional de Parasitología Fatala Chabén.RESULTADOS: De los 182 animales evaluados, 33 fueron positivos para LVC, con una prevalencia global del 18,1%. En IAD la prevalencia fue 22% y en IBD, 13,4%. Los estudios parasitológicos fueron positivos en el 10% de los caninos en IAD y 1,2% en IBD. La LVC fue asintomática u oligosintomática, con una presentación más frecuente en IAD. La rK39 tuvo una sensibilidad del 90,3% y una especificidad del 98,9%.CONCLUSIONES: El análisis serológico con antígeno rK39 fue siempre más sensible que la búsqueda parasitológica para el diagnóstico. La LVC parece tener menor prevalencia en relación con estudios previos, quizás debido a diferentes medidas de control realizadas en el Municipio de Posadas.

INTRODUCCION: Visceral leishmanisis (VL) is an emerging disease in Argentina. The first autochthonous case was described in 2006 in a chld from Posadas (Misiones), the city which turned out to be the focus of VL.OBJECTIVE: To determine the prevalence of canine VL (CVL) and improve its diagnosis in Posadas.METHODS: According to entomological criteria, Posadas was divided in high density islands (HDI) and low density islands (LDI) of sandfly. Randomly and with satellite images, the northernmost and southernmost blocks of each HDI and LDI were selected. A prospective, experimental design was performed, studying all the dogs in the selected blocks. There was an initial sample of 400 animals to detect a difference of at least 7%, with a power of 0.90 and a level of 0.05, compared to the supposed prevalence of 20%. Blood samples were taken, with puncture of lymph nodes and skin scraping. The study also included a (canine rK39) rapid test for serological assessment adn sample smears for parasitological search. Samples were processed and evaluated in the Posadas institute of animal health (I.MU.S.A) and the Fatala Chabén National Institute of Parasitology.RESULTS: CVL was assessed in 33/182 animals with an overall prevalence of 18.1%. In HDI, the prevalence was 22%; in LDI, it was 13.4%. Parasitological studies were positive in 10% (HDI) and 1.2% (LDI). The CVL had a nonspecific clinical presentation; canines were asimptomatic or oligosymptomatic, with a higher trend in HDI. The rK39 had a sensitivity of 90.3% and a specificity of 98.9%.CONCLUSIONS: The antigen rK39 was always more sensitive than the search for parasites for the diagnosis of CVL. The disease appears to be less prevalent comapring to previous studies, perhaps due to different control measures performed in the Municipality of Posadas.

Leishmaniasis visceral: contribución a su control mediante el fortalecimiento del diagnóstico del reservorio canino en Posadas, Misiones, Argentina / Visceral leishmaniasis: control contribution by strengthening the diagnosis of dog reservoir in the city of Posadas, Misiones, Argentina

INTRODUCCION: La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad emergente en Argentina. En 2006 se describió el primer caso autóctono en Posadas (Misiones), ciudad que se convirtió en epicentro de la LV.OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la LV canica (LVC) y fortalecer su diagnóstico en Posadas.METODOS: Con un criterio entomológico, la ciudad de Posadas se dividió en islas de alta densidad (IAD) e islas de baja densidad (IBD) de flebótomos. Se seleccionó, de forma arbitraria y mediante imágenes satelitales, la manzana situada más al norte y más al sur de cada IAD e IBD. Se realizó un diseño observacional prospectivo, y se estudió a todos los perros de las manzanas seleccionadas. Se consideró un N inicial de 400 animales para detectar una diferencia de al menos 7% con una potencia de 0,90 y un nivel de 0,05 respecto de la prevalencia global supuesta del 20%. Se tomaron muestras de sangre, punción de ganglios linfáticos y raspado de piel. El estudio incluyó además un test serológico rápido (rK39 canino) y frotis de las muestras para búsqueda parasitológica, que se procesaron y evaluaron en el Instituto Municipal de Salud Animal de Posadas y en el Instituto Nacional de Parasitología Fatala Chabén.RESULTADOS: De los 182 animales evaluados, 33 fueron positivos para LVC, con una prevalencia global del 18,1%. En IAD la prevalencia fue 22% y en IBD, 13,4%. Los estudios parasitológicos fueron positivos en el 10% de los caninos en IAD y 1,2% en IBD. La LVC fue asintomática u oligosintomática, con una presentación más frecuente en IAD. La rK39 tuvo una sensibilidad del 90,3% y una especificidad del 98,9%.CONCLUSIONES: El análisis serológico con antígeno rK39 fue siempre más sensible que la búsqueda parasitológica para el diagnóstico. La LVC parece tener menor prevalencia en relación con estudios previos, quizás debido a diferentes medidas de control realizadas en el Municipio de Posadas.

INTRODUCCION: Visceral leishmanisis (VL) is an emerging disease in Argentina. The first autochthonous case was described in 2006 in a chld from Posadas (Misiones), the city which turned out to be the focus of VL.OBJECTIVE: To determine the prevalence of canine VL (CVL) and improve its diagnosis in Posadas.METHODS: According to entomological criteria, Posadas was divided in high density islands (HDI) and low density islands (LDI) of sandfly. Randomly and with satellite images, the northernmost and southernmost blocks of each HDI and LDI were selected. A prospective, experimental design was performed, studying all the dogs in the selected blocks. There was an initial sample of 400 animals to detect a difference of at least 7%, with a power of 0.90 and a level of 0.05, compared to the supposed prevalence of 20%. Blood samples were taken, with puncture of lymph nodes and skin scraping. The study also included a (canine rK39) rapid test for serological assessment adn sample smears for parasitological search. Samples were processed and evaluated in the Posadas institute of animal health (I.MU.S.A) and the Fatala Chabén National Institute of Parasitology.RESULTS: CVL was assessed in 33/182 animals with an overall prevalence of 18.1%. In HDI, the prevalence was 22%; in LDI, it was 13.4%. Parasitological studies were positive in 10% (HDI) and 1.2% (LDI). The CVL had a nonspecific clinical presentation; canines were asimptomatic or oligosymptomatic, with a higher trend in HDI. The rK39 had a sensitivity of 90.3% and a specificity of 98.9%.CONCLUSIONS: The antigen rK39 was always more sensitive than the search for parasites for the diagnosis of CVL. The disease appears to be less prevalent comapring to previous studies, perhaps due to different control measures performed in the Municipality of Posadas.