The Tudor Staphylococcal Nuclease Protein of Entamoeba histolytica Participates in Transcription Regulation and Stress Response.

Entamoeba histolytica is the protozoa parasite responsible of human amoebiasis, disease that causes from 40,000 to 100,000 deaths annually worldwide. However, few are known about the expression regulation of molecules involved in its pathogenicity. Transcription of some virulence-related genes is positively controlled by the cis-regulatory element named URE1. Previously we identified the transcription factor that binds to URE1, which displayed a nuclear and cytoplasmic localization. This protein belongs to the Tudor Staphyococcal nuclease (TSN) family, which in other systems participates in virtually all pathways of gene expression, suggesting that this amoebic transcription factor (EhTSN; former EhURE1BP) could also play multiple functions in E. histolytica. The aim of this study was to identify the possible cellular events where EhTSN is involved. Here, we found that EhTSN in nucleus is located in euchromatin and close to, but not into, heterochromatin. We also showed the association of EhTSN with proteins involved in transcription and that the knockdown of EhTSN provokes a diminishing in the mRNA level of the EhRabB gene, which in its promoter region contains the URE1 motif, confirming that EhTSN participates in transcription regulation. In cytoplasm, this protein was found linked to the membrane of small vesicles and to plasma membrane. Through pull-down assays and mass spectrometry we identity thirty two candidate proteins to interact with EhTSN. These proteins participate in transcription, metabolism, signaling, and stress response, among other cellular processes. Interaction of EhTSN with some candidate proteins involved in metabolism, and signaling was validated by co-immunoprecipitation or co-localization. Finally we showed the co-localization of EhTSN and HSP70 in putative stress granules during heat shock and that the knockdown of EhTSN increases the cell death during heat shock treatment, reinforcing the hypothesis that EhTSN has a role during stress response. All data support the proposal that EhTSN is a multifunctional protein of E. histolytica.

Leptin induces partial epithelial-mesenchymal transition in a FAK-ERK dependent pathway in MCF10A mammary non-tumorigenic cells.

Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a biological process involved in different steps of tumor progression and metastasis of breast cancer cells. Epidemiological studies suggest a link between obesity and the progression of breast cancer. Leptin is an adipocyte-secreted hormone which can promote cell migration and invasion as part of EMT in breast cancer cells. We investigated the effect of leptin on expression of EMT markers in MCF10A cells, as well as, the role of FAK and ERK in this process. We found that leptin induces morphological changes from an epithelial phenotype towards a mesenchymal phenotype and promotes cell migration in MCF10A cells. Moreover, leptin induces an increase in vimentin expression, changes in the cellular localization of E-cadherin and increase in FAK and ERK phosphorylation. Furthermore, using FAK and ERK chemical inhibitors we show that leptin regulates EMT markers in a FAK and ERK dependent manner. In conclusion, leptin promotes vimentin expression and cell migration in a FAK and ERK dependent pathway in the non-tumorigenic epithelial cell line MCF10A.

Identification of calcium-transporting ATPases of Entamoeba histolytica and cellular localization of the putative SERCA.

Calcium has an important role on signaling of different cellular processes in the protozoa parasite Entamoeba histolytica, including development and pathogenesis. However, the systems that control calcium responses in this parasite are incompletely understood. Calcium-ATPases (Ca(2+)-ATPases) are proteins that play an important role in calcium homeostasis by catalyzing the active efflux of this ion from cytoplasm and are essential to the correct functioning of the cell machinery. Here, we reported the identification of five E. histolytica genes encoding putative Ca(2+)-ATPases, three related to PMCA, and two related to organellar ATPases. RT-PCR assays showed that all those genes are expressed in trophozoites and specific antibodies against the SERCA-like member located this protein in a continuous cytoplasmic network, supporting the hypothesis that it corresponds to the Ca(2+)-ATPase responsible to sequester calcium in the endoplasmic reticulum of this parasite.

The small GTPase EhRabB of Entamoeba histolytica is differentially expressed during phagocytosis.

It has been described that the pathogenicity of Entamoeba histolytica is influenced by environmental conditions and that transcription profile changes occur during invasion, suggesting that gene expression may be involved in the virulence of this parasite. However, the molecular mechanisms that are implicated in the control of gene expression in this microorganism are poorly understood. Here, we showed that the expression of the EhRabB protein, a small GTPase involved in phagocytosis, is modified through the interaction with red blood cells. By ELISA, Western blot, and immunofluorescence assays, we observed that the expression of EhRabB diminished after 5 min of the interaction of trophozoites with red blood cells, but protein level was recovered at subsequent times. In the EhRabB amino acid sequence, we found two lysine residues that could be target for ubiquitin modification and trigger the degradation of this GTPase at early times of phagocytosis. The analysis of the expression of the EhrabB mRNA showed that the interaction of trophozoites with red blood cells produces a drastic diminishing in its half-life. In addition, promoter assays using the chloramphenicol acetyltransferase reporter gene and electrophoretic mobility shift assays experiments showed that the URE1 motif located in the promoter region of EhrabB is involved in the expression regulation of this gene during phagocytosis. Moreover, the immunolocalization of the URE1-binding protein during phagocytosis indicated that the transcription of the EhrabB gene is determined, at least in part, by the translocation of this transcription factor to nuclei. These results suggested that the expression of particular genes of this parasite is controlled at several stages.

Identification of a polypeptide containing Tudor and staphyloccocal nuclease-like domains as the sequence-specific binding protein to the upstream regulatory element 1 of Entamoeba histolytica.

Transcription initiation is the most regulated stage for the control of gene expression. This event requires that a complex of proteins called transcription factors bind to DNA through cis-regulatory elements located in the gene promoters. However, little is known about transcription regulation in Entamoeba histolytica, the protozoan parasite responsible for human amoebiasis. Some genes encoding for proteins involved in the parasite pathogenicity contain specific upstream regulatory elements (URE1-URE5) in their promoters. Here, we identified the protein that specifically binds to the URE1 sequence (EhURE1BP). This protein contains five SNase domains and one Tudor motif, and has 21% identity and 36% similarity to the multifunctional eukaryotic protein known as the protein containing Tudor and staphyloccocal nuclease-like domains (TSN). To obtain antibodies against EhURE1BP, the recombinant protein was expressed and immunised in rabbits. Western blot and immunofluorescence assays showed that EhURE1BP is located in both nuclei and cytoplasm. Electrophoretic mobility shift assays and supershift assays demonstrated that EhURE1PB specifically binds to URE1 and that the C-terminus that includes the Tudor motif contains the DNA-binding domain of this protein. Results suggest that this TSN-like protein is the transcription factor that activates the transcription of some pathogenicity-related genes of E. histolytica.

Regulation of gene expression in protozoa parasites.

Infections with protozoa parasites are associated with high burdens of morbidity and mortality across the developing world. Despite extensive efforts to control the transmission of these parasites, the spread of populations resistant to drugs and the lack of effective vaccines against them contribute to their persistence as major public health problems. Parasites should perform a strict control on the expression of genes involved in their pathogenicity, differentiation, immune evasion, or drug resistance, and the comprehension of the mechanisms implicated in that control could help to develop novel therapeutic strategies. However, until now these mechanisms are poorly understood in protozoa. Recent investigations into gene expression in protozoa parasites suggest that they possess many of the canonical machineries employed by higher eukaryotes for the control of gene expression at transcriptional, posttranscriptional, and epigenetic levels, but they also contain exclusive mechanisms. Here, we review the current understanding about the regulation of gene expression in Plasmodium sp., Trypanosomatids, Entamoeba histolytica and Trichomonas vaginalis.

[Risk markers of follicular neoplasms in thyroid nodules]. / Marcadores de riesgo de neoplasia folicular en nódulos tiroideos.

Thyroid nodules of follicular origin include neoplastic and non neoplastic processes. No methods of diagnosis or cytological features (obtained by fine-needle aspiration, FNA) may differentiate both types, and therefore differential diagnosis still constitutes a dilemma.We analyzed the existing association between clinical variables and methods of diagnosis in thyroid nodules of follicular type with the aim of defining risk of neoplasm. Ninety two patients with nodular goiters, of follicular origin by cytology, previously submitted to surgical treatment were analyzed. The studied variables were: sex, age, size of the nodule, ultrasound characteristics, cytological diagnosis, TSH level and results of the scintigraphy. Of 92 cases, 74 were neoplastic nodules (56 adenomas and 18 differentiated thyroid cancer) and 18 were non neoplastic nodules. Markers, that were related to high risk of follicular neoplasm corresponded to the cytological diagnosis of proliferation of high follicular degree, in iso or hypoechoic, and hypofunctioning nodules with I131. The carcinomas presented cytology of follicular proliferation of high degree, in hipoechoic nodules, of irregular edges with microcalcifications and hypofunctioning, in male patients or patients younger than 20 years. The presence of macrocalcifications and hypercaptation would be in favor of nodules of benign origin.The correlation of diagnostic methods and clinical variables in thyroid nodules of follicular type would allow us to differentiate the risk of neoplasm or carcinoma, and plan surgical selective treatments.

Marcadores de riesgo de neoplasia folicular en nódulos tiroideos / Risk markers of follicular neoplasms in thyroid nodules

Los nódulos tiroideos de origen folicular abarcan procesos no neoplásicos y neoplásicos. No existen métodos de diagnóstico ni rasgos citológicos por punción con aguja fina (PAF) que los delimiten, constituyendo un dilema su diagnóstico diferencial. Analizamos la asociación existente entre variables clínicas y métodos de diagnóstico prequirúrgicos en nódulos tiroideos de estirpe folicular, con el objetivo de definir riesgo de neoplasia.Se estudiaron 92 pacientes con bocios nodulares de estirpe folicular por citología, tratados con tiroidectomía. Las variables analizadas fueron: sexo, edad, tamaño del nódulo, características ecográficas, diagnóstico citológico, nivel de TSH y resultados del centellograma. De los 92 casos, 74 fueron neoplásicos (56 adenomas y 18 carcinomas diferenciados) y 18 nódulos no neoplásicos, hiperplásicos o adenomatosos. Los marcadores que se relacionaron con alto riesgo de neoplasia folicular correspondieron al diagnóstico citológico de proliferación folicular de alto grado, en nódulos iso o hipoecogénicos, e hipocaptantes con I131. Los carcinomas presentaron citología de proliferación folicular de alto grado en nódulos hipoecogénicos, de bordes irregulares con microcalcificaciones e hipocaptantes, en pacientes varones o menores de 20 años. La presencia de macrocalcificaciones e hipercaptación estarían a favor de nódulo de origen benigno.La correlación de los métodos de diagnóstico y variables clínicas en nódulos tiroideos de estirpe folicular nos permitirían delimitar el riesgo de neoplasia y carcinoma para planificar un tratamiento quirúrgico selectivo.

Thyroid nodules of follicular origin include neoplastic and non neoplastic processes. No methods of diagnosis or cytological features (obtained by fine-needle aspiration, FNA) may differentiate both types, and therefore differential diagnosis still constitutes a dilemma.We analyzed the existing association between clinical variables and methods of diagnosis in thyroid nodules of follicular type with the aim of defining risk of neoplasm. Ninety two patients with nodular goiters, of follicular origin by cytology, previously submitted to surgical treatment were analyzed. The studied variables were: sex, age, size of the nodule, ultrasound characteristics, cytological diagnosis, TSH level and results of the scintigraphy. Of 92 cases, 74 were neoplastic nodules (56 adenomas and 18 differentiated thyroid cancer) and 18 were non neoplastic nodules. Markers, that were related to high risk of follicular neoplasm corresponded to the cytological diagnosis of proliferation of high follicular degree, in iso or hypoechoic, and hypofunctioning nodules with I131. The carcinomas presented cytology of follicular proliferation of high degree, in hipoechoic nodules, of irregular edges with microcalcifications and hypofunctioning, in male patients or patients younger than 20 years. The presence of macrocalcifications and hypercaptation would be in favor of nodules of benign origin.The correlation of diagnostic methods and clinical variables in thyroid nodules of follicular type would allow us to differentiate the risk of neoplasm or carcinoma, and plan surgical selective treatments.

Leiomiosarcoma de la pelvis renal / Leiomiosarcoma of pelvis renal

Se presenta el caso de un hombre de 62 años de edad, con síntomas de malestar general y dolor lumbar difuso. En estudios subsiguientes, una tomografía axial computada y una resonancia magnética nuclear mostraron un gran tumor sólido hacia el polo superior del riñón derecho, con crecimiento exofítico de apariencia parenquimatosa, con lesiones nodulares pulmonares bilaterales. Se efectuó nefrectomía total derecha. En la macroscopía el tumor se observó firme y sólido, de 6 cm de diámetro. El diagnóstico anatomopatológico fue de leiomiosarcoma con origen en el sistema excretor. Posteriormente se efectuó un ciclo de quimioterapia, desarrollándose durante el transcurso del mismo una importante toxicidad neurológica y renal, la cual llevó al coma y fallecimiento diez días después de haber iniciado el tratamiento.

Apendicitis aguda: valor diagnóstico de la ecografía realizada por médicos residentes / Acute appendicitis: diagnostic value of ultrasound performed by advanced residents

Propósito: determinar la utilidad de la ecografía abdominal (EA), realizada por médicos residentes, en el diagnóstico de apendicitis aguda (AA) en pacientes sometidos a cirugía abdominal. Material y métodos: se estudiaron en forma prospectiva durante un año 110 pacientes (35 mujeres, 57 varones) mayores de 15 años con diagnóstico clínico de AA, referidos para evaluación con EA. Todos los pacientes fueron tratados quirúrgicamente. El diagnóstico de AA fue realizado por anatomía patológica. Los estudios ecográficos fueron realizados por médicos residentes de Diagnóstico por Imágenes. Se emplearon transductores sectoriales de 5 MHz y lineales de 7,5 MHz. Los criterios ecográficos para el diagnóstico de AA fueron apéndice no compresible y diámetro mayor o igual a 6 mm...

Apendicitis aguda: valor diagnóstico de la ecografía realizada por médicos residentes / Acute appendicitis: diagnostic value of ultrasound performed by advanced residents

Propósito: determinar la utilidad de la ecografía abdominal (EA), realizada por médicos residentes, en el diagnóstico de apendicitis aguda (AA) en pacientes sometidos a cirugía abdominal. Material y métodos: se estudiaron en forma prospectiva durante un año 110 pacientes (35 mujeres, 57 varones) mayores de 15 años con diagnóstico clínico de AA, referidos para evaluación con EA. Todos los pacientes fueron tratados quirúrgicamente. El diagnóstico de AA fue realizado por anatomía patológica. Los estudios ecográficos fueron realizados por médicos residentes de Diagnóstico por Imágenes. Se emplearon transductores sectoriales de 5 MHz y lineales de 7,5 MHz. Los criterios ecográficos para el diagnóstico de AA fueron apéndice no compresible y diámetro mayor o igual a 6 mm...(AU)

Angiomiolipoma extrarrenal retroperitoneal / Extrarenal retroperitoneal angiomyolipoma

El angiomiolipoma es un tumor benigno de origen mesenquimático que compromete más frecuentemente al riñón. Su localización retroperitoneal extrarrenal es sumamente rara. Presentamos el caso de una paciente de 25 años que consulta por distensión abdominal. La ecografía mostró una gran masa sólida, hipoecogénica, que ocupaba toda la pelvis extendiéndose hasta la región umbilical, desplazando los órganos adyacentes. Por tomografía presentaba densidad cercana al músculo, con escasas áreas de densidad grasa. La biopsia percutánea reveló un tumor benigno de origen mesenquimático. Posteriormente a su extirpación quirúrgica, la anatomía patológica confirmó el diagnóstico de angiomiolipoma. Este es un tumor de difícil diagnóstico radiológico que requiere elevado índice de sospecha para su diagnóstico prequirúrgico. La presencia de áreas de densidad negativa, aun escasas, debe hacernos pensar en él. Es importante establecer, previo a la cirugía, la benignidad de la lesión mediante biopsia percutánea para un planteo quirúrgico conservador

Angiomiolipoma extrarrenal retroperitoneal / Extrarenal retroperitoneal angiomyolipoma

El angiomiolipoma es un tumor benigno de origen mesenquimático que compromete más frecuentemente al riñón. Su localización retroperitoneal extrarrenal es sumamente rara. Presentamos el caso de una paciente de 25 años que consulta por distensión abdominal. La ecografía mostró una gran masa sólida, hipoecogénica, que ocupaba toda la pelvis extendiéndose hasta la región umbilical, desplazando los órganos adyacentes. Por tomografía presentaba densidad cercana al músculo, con escasas áreas de densidad grasa. La biopsia percutánea reveló un tumor benigno de origen mesenquimático. Posteriormente a su extirpación quirúrgica, la anatomía patológica confirmó el diagnóstico de angiomiolipoma. Este es un tumor de difícil diagnóstico radiológico que requiere elevado índice de sospecha para su diagnóstico prequirúrgico. La presencia de áreas de densidad negativa, aun escasas, debe hacernos pensar en él. Es importante establecer, previo a la cirugía, la benignidad de la lesión mediante biopsia percutánea para un planteo quirúrgico conservador (AU)

Infarto de apéndice epiploico e infarto segmentario de epiplón mayor / Epiploic appendagitis and omental infarction: diagnostic imaging findings

El infarto de apéndice epiploico y el infarto segmentario del epiplón mayor son las dos causas infrecuentes de abdomen agudo no quirúrgicos, que suelen simular otras patologías quirúrgicas, como diverticulitis, apendicitis o colecistitis. Ambos presentan similar clínica, pronóstico y tratamiento. Entre noviembre de 1998 y agosto de 2001, se diagnosticaron 10 casos de infarto de apéndice epiploico y 6 de infarto segmentario del epiplón mayor mediante US, con confirmación posterior mediante TC de 6 infartos de apéndice epiploico y los 6 infartos segmentarios del epiplón mayor. Un paciente presentó una asociación de púrpura de Schöenlein-Henoch con infarto segmentario del epiplón mayor. Todos fueron tratados en forma conservadora. El US y la TC permiten un correcto diagnóstico, evitando así cirugías innecesarias. El propósito del presente trabajo es describir las características clínicas, ecográficas y tomográficas y correlacionar éstos resultados con la bibliografía

Infarto de apéndice epiploico e infarto segmentario de epiplón mayor / Epiploic appendagitis and omental infarction: diagnostic imaging findings

El infarto de apéndice epiploico y el infarto segmentario del epiplón mayor son las dos causas infrecuentes de abdomen agudo no quirúrgicos, que suelen simular otras patologías quirúrgicas, como diverticulitis, apendicitis o colecistitis. Ambos presentan similar clínica, pronóstico y tratamiento. Entre noviembre de 1998 y agosto de 2001, se diagnosticaron 10 casos de infarto de apéndice epiploico y 6 de infarto segmentario del epiplón mayor mediante US, con confirmación posterior mediante TC de 6 infartos de apéndice epiploico y los 6 infartos segmentarios del epiplón mayor. Un paciente presentó una asociación de púrpura de Sch÷enlein-Henoch con infarto segmentario del epiplón mayor. Todos fueron tratados en forma conservadora. El US y la TC permiten un correcto diagnóstico, evitando así cirugías innecesarias. El propósito del presente trabajo es describir las características clínicas, ecográficas y tomográficas y correlacionar éstos resultados con la bibliografía (AU)

Punción de nódulos tiroideos guiada por ecografía con aguja fina (PAAF): nuestra experiencia / Sonographically guided biopsy of thyroid nodules

El objetivo de éste trabajo es comparar nuestra experiencia sobre las punciones aspirativas de nódulos tiroideos guiada con ecografía con la de otros trabajos publicados. Estudiamos retrospectivamente 183 pacientes sometidos a punciones biópsicas de nódulos tiroides (en un período de 27 meses). Las mismas se realizaron sin anestesia local, sin test de coagulación ni anatomopatológo en la sala. El 9,2 por ciento de los nódulos fueron malignos, 69 por ciento benignos, 14,7 por ciento acelular, sólo material coloide, y el 7,1 por ciento insuficiente. Nuestro trabajo coincide con el resto de la bibliografía en cuanto a que la punción tiroidea guiada por ecografía es un método simple, de bajo costo, con escasas complicaciones y con alta efectividad diagnóstica. Sugerimos punzar los nódulos mixtos ya que el 29,5 por ciento en nuestro estudio fueron malignos. Recomendamos que sea efectuada por personal capacitado, con anatomopatólogo en la sala y sin coagulación previa

Fibrosis diabética de la mama: presentación de tres casos y revisión de la literatura / Diabetic fibrous breast disease: a report of three cases and literature review

La mastopatía diabética es una entidad benigna poco conocida, que se presenta como masa palpable en pacientes con diabetes mellitus insulino dependiente. Propósito: describir los hallazgos clínicos, mamográficos, ecográficos e histopatológicos en tres casos y comparar nuestros hallazgos con la literatura. Material y métodos: entre enero de 1999 y marzo de 2001 se estudiaron 3 pacientes diabéticas insulino dependiente, con masa mamaria palpable, mediante mamografía, ecografía y exámen histopatológico (core biopsia en dos, biopsia escisional en la restante). Resultados: la mamografía mostró elevada densidad en los tres casos. El US evidenció áreas heterogéneas, con marcada atenuación posterior. Las biopsias fueron negativas para células neoplásicas, con hallazgos compatibles con fibrosis diabética de la mama. Conclusión: se debe considerar como diagnóstico diferencial, ésta enfermedad benigna en pacientes diabéticas premenopaúsicas. El diagnóstico puede realizarse con biopsia, evitando una cirugía innecesaria

Punción de nódulos tiroideos guiada por ecografía con aguja fina (PAAF): nuestra experiencia / Sonographically guided biopsy of thyroid nodules

El objetivo de éste trabajo es comparar nuestra experiencia sobre las punciones aspirativas de nódulos tiroideos guiada con ecografía con la de otros trabajos publicados. Estudiamos retrospectivamente 183 pacientes sometidos a punciones biópsicas de nódulos tiroides (en un período de 27 meses). Las mismas se realizaron sin anestesia local, sin test de coagulación ni anatomopatológo en la sala. El 9,2 por ciento de los nódulos fueron malignos, 69 por ciento benignos, 14,7 por ciento acelular, sólo material coloide, y el 7,1 por ciento insuficiente. Nuestro trabajo coincide con el resto de la bibliografía en cuanto a que la punción tiroidea guiada por ecografía es un método simple, de bajo costo, con escasas complicaciones y con alta efectividad diagnóstica. Sugerimos punzar los nódulos mixtos ya que el 29,5 por ciento en nuestro estudio fueron malignos. Recomendamos que sea efectuada por personal capacitado, con anatomopatólogo en la sala y sin coagulación previa (AU)

Fibrosis diabética de la mama: presentación de tres casos y revisión de la literatura / Diabetic fibrous breast disease: a report of three cases and literature review

La mastopatía diabética es una entidad benigna poco conocida, que se presenta como masa palpable en pacientes con diabetes mellitus insulino dependiente. Propósito: describir los hallazgos clínicos, mamográficos, ecográficos e histopatológicos en tres casos y comparar nuestros hallazgos con la literatura. Material y métodos: entre enero de 1999 y marzo de 2001 se estudiaron 3 pacientes diabéticas insulino dependiente, con masa mamaria palpable, mediante mamografía, ecografía y exámen histopatológico (core biopsia en dos, biopsia escisional en la restante). Resultados: la mamografía mostró elevada densidad en los tres casos. El US evidenció áreas heterogéneas, con marcada atenuación posterior. Las biopsias fueron negativas para células neoplásicas, con hallazgos compatibles con fibrosis diabética de la mama. Conclusión: se debe considerar como diagnóstico diferencial, ésta enfermedad benigna en pacientes diabéticas premenopaúsicas. El diagnóstico puede realizarse con biopsia, evitando una cirugía innecesaria (AU)