El sistema lewis hoy. nuevos enfoques / The lewis system today. new approaches

La expresión de antígenos (Ags) Lewis depende de alelos heredados en loci independientes, el gen Secretor (SE) que codifica la fucosiltransferasa 2 (FUT2) y el gen Lewis (LE) que codifica la fucosiltransferasa 3 (FUT3). El gen Se codifica una glicosiltransferasa que adiciona una fucosa en la cadena precursora de tipo 1 formando el Ag H en secreciones y fluidos. Como los azúcares inmunodominantes del Ag A y B pueden ser agregados a la cadena H de tipo 1, la FUT2 también controla la expresión de Ag A y B en las secreciones. El gen se es un alelo no funcional. El gen Le codifica una transferasa diferente que adiciona una fucosa en el 2do carbono en el precursor de tipo 1. El alelo le no es funcional. Las FUT2 y FUT3 interactúan para la formación de Ags Lewis en secreciones y fluídos. Los Ags Lewis en los eritrocitos no son en realidad parte integral de la membrana, están adsorbidos sobre la superficie en forma pasiva a partir del plasma. Están ampliamente distribuidos en tejidos humanos, eritrocitos, endotelio, riñón, tracto genitourinario, epitelio gastrointestinal y son receptores para algunos patógenos. Los anticuerpos (Acs) anti-Lewis en general no son clínicamente significativos, aunque se han publicado algunos casos de reacciones transfusionales hemolíticas, enfermedad hemolítica fetoneonatal y rechazo de transplante renal. Este trabajo es una revisión sobre los Ags del Sistema Lewis enfocada hacia sus diferentes funciones biológicas y su importancia en campos variados fuera del Banco de Sangre y la Inmunohematología tradicional.

The expression of Lewis blood group antigens depends on the alleles inherited at independent loci, FUT2 Secretor gene (SE) and FUT3 Lewis gene (LE). The Se and Le alleles encode separate fucosyltransferases that interact to form Lewis antigens in secretions and fluids. The Lewis antigens on red blood cells are not integral to the membrane but are passively adsorbed from the plasma. The allele Se encodes a transferase that adds fucose to type 1 precursor chains in secretions and fluids to form type 1 H antigen. Because A and B terminal sugars may be added to type 1 H chains, FUT2 also controls A and B expression in secretions. The FUT2 allele se gen is a nonfunctional allele. The FUT3 allele Le encodes a transferase that adds a fucose in other position in type 1 H precursor. The FUT3 allele le gen is a nonfunctional allele. The Le antigens are widely distributed in human tissues and fluids and are receptors for some pathogenic organisms. Lewis antibodies are rare and clinically no significant, although there are some reports of hemolytic transfusion reactions, hemolytic disease of the newborn and renal transplant rejection. This review focuses on different biological functions of Lewis antigens and their importance in some fields other than Blood Banks and traditional.

Activity, splice variants, conserved peptide motifs, and phylogeny of two new alpha1,3-fucosyltransferase families (FUT10 and FUT11).

We report the cloning of three splice variants of the FUT10 gene, encoding for active alpha-l-fucosyltransferase-isoforms of 391, 419, and 479 amino acids, and two splice variants of the FUT11 gene, encoding for two related alpha-l-fucosyltransferases of 476 and 492 amino acids. The FUT10 and FUT11 appeared 830 million years ago, whereas the other alpha1,3-fucosyltransferases emerged 450 million years ago. FUT10-391 and FUT10-419 were expressed in human embryos, whereas FUT10-479 was cloned from adult brain and was not found in embryos. Recombinant FUT10-419 and FUT10-479 have a type II trans-membrane topology and are retained in the endoplasmic reticulum (ER) by a membrane retention signal at their NH(2) termini. The FUT10-479 has, in addition, a COOH-ER membrane retention signal. The FUT10-391 is a soluble protein without a trans-membrane domain or ER retention signal that transiently localizes to the Golgi and then is routed to the lysosome. After transfection in COS7 cells, the three FUT10s and at least one FUT11, link alpha-l-fucose onto conalbumin glycopeptides and biantennary N-glycan acceptors but not onto short lactosaminyl acceptor substrates as do classical monoexonic alpha1,3-fucosyltransferases. Modifications of the innermost core GlcNAc of the N-glycan, by substitution with ManNAc or with an opened GlcNAc ring or by the addition of an alpha1,6-fucose, suggest that the FUT10 transfer is performed on the innermost GlcNAc of the core chitobiose. We can exclude alpha1,3-fucosylation of the two peripheral GlcNAcs linked to the trimannosyl core of the acceptor, because the FUT10 fucosylated biantennary N-glycan product loses both terminal GlcNAc residues after digestion with human placenta alpha-N-acetylglucosaminidase.

Modulacion de la expresión de Lea y Lex en la diferenciación de células cancerosas / Modulation of Lea and Lex expression in cancer cells

La glicosilación específica de los grupos sanguíneos ABH y Lewis, constituye el primer sistema de histocompatibilidad humana, intervienen fucosilaciones y sialilaciones terminales de glicoproteínas y glicolípidos. Modula la señalización intercelular en la respuesta inmune, la migración y la adhesión celular. Las α2 y α3/4-fucosiltransferasas actúan sobre la cadena de base y forman los antígenos (Ag) ABH y Lewis en numerosos tejidos, varían durante el desarrollo embriofetal humano y algunos Ag son re-expresados en diversos tipos de cáncer, adhieren al endotelio vascular y migran para desarrollar metástasis. Las células de cáncer de colon, HT29, son capaces de diferenciarse in vitro y reproducir el "switch" de fucosiltransferasas observado en la embriogénesis humana. El objetivo del presente trabajo fue abordar la expresión de Ag Lewis durante la proliferación y diferenciación celular in vitro. Se evaluó la expresión progresiva de Ag Lewis frente a diferentes anticuerpos determinando el porcentaje de células fluorescentes en función del tiempo. La expresión Lea aumenta mientras disminuyen Lea, sial-Lea y sial-Lex. El “switch” se produce en el período de confluencia. Durante la proliferación, están expresados mayoritaria y transitoriamente las estructuras de tipo 2 fucosiladas en alfa (1, 2) o (1, 3) como las estructuras H tipo 2 o Lex. Las estructuras sial-Lea están expresadas transitoriamente durante este período. Luego de la confluencia celular, la mayoría de las estructuras son de tipo 1 fucosiladas (Lea). Las estructuras de tipo 2 están débilmente expresadas.

Specific sialylated and fucosylated ABH and Lewis blood groups are the first human histocompatibility system. Normal glycosylation modula intercellular signals, migration and cellular adhesion. The α 2 and α3/4-fucosyltransferases modify chains of membrane glycolipids and glycoproteins to form ABH and Lewis antigens in different tissues: they vary during human embryonic development. Some antigens change their expression in cancer. Aberrant cell surface glycosylation is thought to have great importance in tumor malignancy. HT29 colon cancer cells are able to differentiate in vitro and reproduce fucosyltransferases switch observed in human embryonic development. The aim of this work was to evaluate Lewis antigens expression during cells culture. Antigen expression was evaluated by the reaction with different antibodies. Percentage of fluorescent cells was established progressively. Lea expression rises while Lex, sial-Lea and sial-Lex decrease. Switch take place in the confluence time. During proliferation type 2 fucosylated either alfa (l ,2) or (1 ,3) structures are expressed (H type 2 or Lex). Sial-Le structures are also expressed. After confluence period, main of structures are type 1 fucosiladas (Lea). Structures type 2 are weakly expressed.

Frecuencia de los grupos sanguíneos A1, A2, Aint, B y O en individuos normales / Frequency of blood groups A1, A2, Aint,B and O in normal subjects

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A1 son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina de Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint, son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en individuos sanos normales de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. Se estudiaron 1 301 muestras, de las cuales resultaron 703 O (54,04 porciento); 468 A (35,97 porciento); 106 B (8,15 porciento); 18 A1B (1,38 porciento) y 6 A2B (0,46 porciento). Las muestras A se subdividieron en: 346 A1 (73,93 porciento); 82 A2 (17,52 porciento) y 40 Aint (8,55 porciento). El reconocimiento de subgrupos débiles del grupo A reviste importancia en la práctica forense y en el estudio de la dinámica de poblaciones. El estudio de la variante Aint es relevante en Inmunogenética Poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras

Frecuencia de la variante aint del antígeno A / Frecuency of aint antigen

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A, son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas evaluando el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se caracterizó la actividad aglutinante de la lectina de Amaranthus hypochondriacus (específica para N-acetil-D-galactosamina) antes y después de la incubación con saliva A y frente a eritrocitos A1, Aint y A2. Se estudiaron 458 muestras, resultando 242 O (52,8 por ciento), 170 A (37,1 por ciento), 38 B (8,3 por ciento), 5 A1B (1,1 por ciento) y 3 A2B (0,7 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 138 A1 (81,2 por ciento), 23 A2 (13,5 por ciento) y 9 Aint (5,3 por ciento). La comparación de las curvas de cinética obtenidos permite diferenciar los hematíes de grupos A1, Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Este estudio es relevante, en inmunogenética poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras.

Frecuencia de la variante aint del antígeno A / Frecuency of aint antigen

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A, son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas evaluando el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se caracterizó la actividad aglutinante de la lectina de Amaranthus hypochondriacus (específica para N-acetil-D-galactosamina) antes y después de la incubación con saliva A y frente a eritrocitos A1, Aint y A2. Se estudiaron 458 muestras, resultando 242 O (52,8 por ciento), 170 A (37,1 por ciento), 38 B (8,3 por ciento), 5 A1B (1,1 por ciento) y 3 A2B (0,7 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 138 A1 (81,2 por ciento), 23 A2 (13,5 por ciento) y 9 Aint (5,3 por ciento). La comparación de las curvas de cinética obtenidos permite diferenciar los hematíes de grupos A1, Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Este estudio es relevante, en inmunogenética poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras. (AU)

Estudio de la variante aint del antígeno A / Study of a antigen aint variant

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A1 son aglutinados por la lectina de Ulex Europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son débilmente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas. Se evaluó el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se estudiaron 557 muestras, resultando 285 O (51,1 por ciento), 216 A (38,8 por ciento), 45 B (8,1 por ciento), 8 A1B (1,4 por ciento) y 3 A2B (0,6 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 173 A1, (80,2 por ciento), 31 A2 (14,3 por ciento) y 12 Aint (5,5 por ciento). Se observó, en las curvas de cinética, diferencia de reacción entre los hematíes de grupo A1 Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Importa señalar que el valor de este estudio es relevante, en Inmunogenética Poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras

Estudio de la variante aint del antígeno A / Study of a antigen aint variant

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A1 son aglutinados por la lectina de Ulex Europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son débilmente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas. Se evaluó el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se estudiaron 557 muestras, resultando 285 O (51,1 por ciento), 216 A (38,8 por ciento), 45 B (8,1 por ciento), 8 A1B (1,4 por ciento) y 3 A2B (0,6 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 173 A1, (80,2 por ciento), 31 A2 (14,3 por ciento) y 12 Aint (5,5 por ciento). Se observó, en las curvas de cinética, diferencia de reacción entre los hematíes de grupo A1 Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Importa señalar que el valor de este estudio es relevante, en Inmunogenética Poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras (AU)

Investigación de anticuerpos del sistema ABO en sangre de cordón de recién nacidos: cuantificación de anti-A / Detection of ABO system antibodies in umbilical cord blood from newborn infants: quantitation of anti-A

El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos del sistema ABO em 119 muestras de sangre de cordón de recién nacidos de grupo 0, cuyas madres presentaban el mismo grupo. Posteriormente se titularon los anticuerpos anti-A mediante un método manual de cuantificación de la aglutinación, relacionándolos con los anticuerpos presentes en la madre respectiva. Los resultados obtenidos demuestran la presencia de anticuerpos del sistema ABO en sangre de cordón umbilical en un 93,3% de las muestras (n = 111). Del total de estas muestras con reacción positiva, el 96,4% (n = 107) permaneció activo después del tratamiento con 2-mercaptoetanol, evidenciando su naturaleza de iunmunoglobulina G. La cuantificación de los anticuerpos anti-A demostró una menor concentración en los bebés que en la madre respectiva. Además, se observó que los bebés con títulos altos correspondían a las madres que presentaban títulos mayores. El análisis estadístico (r de Spearman) indicó que existe una asociación entre ambas variables

Investigación de anticuerpos del sistema ABO en sangre de cordón de recién nacidos: cuantificación de anti-A / Detection of ABO system antibodies in umbilical cord blood from newborn infants: quantitation of anti-A

El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos del sistema ABO em 119 muestras de sangre de cordón de recién nacidos de grupo 0, cuyas madres presentaban el mismo grupo. Posteriormente se titularon los anticuerpos anti-A mediante un método manual de cuantificación de la aglutinación, relacionándolos con los anticuerpos presentes en la madre respectiva. Los resultados obtenidos demuestran la presencia de anticuerpos del sistema ABO en sangre de cordón umbilical en un 93,3% de las muestras (n = 111). Del total de estas muestras con reacción positiva, el 96,4% (n = 107) permaneció activo después del tratamiento con 2-mercaptoetanol, evidenciando su naturaleza de iunmunoglobulina G. La cuantificación de los anticuerpos anti-A demostró una menor concentración en los bebés que en la madre respectiva. Además, se observó que los bebés con títulos altos correspondían a las madres que presentaban títulos mayores. El análisis estadístico (r de Spearman) indicó que existe una asociación entre ambas variables (AU)

Tecnología óptica moderna aplicada al desarrollo de métodos inmunohematológicos / Modern optical technology applied to the developement of inmunohematological methods

La determinación cuantitativa de tamaños y formas de partículas en suspensión por medio de la difusión lumínica, ha sido aplicada para desarrollar tres nquevos métodos para estudios inmunohematológicos. El primero de ellos es un método manual para cuantificar reacciones de hemaglutinación, rápido y fácil de ejecutar. Su precisión y repetibilidad han sido bien demostradas. En el segundo método se determina la velocidad de aglutinación, midiendo la disminución de la difusión lumínica total. Con el tercer método se mide la deformabilidad de los eritrocitos en suspensión, sometidos a un campo de corte fluido, por medio del patrón de difracción producido por un laser qque atraviesa la mquestra. Con los datos obtenidos por este método se calculan dos parámetros reológicos (un coeficiente de elasticidad de membrana y un coeficiente de viscosidad superficial de la membrana). Significativas modificaciones de los parámetros reológicos con relación a valores normales fqueron observados cuando se colocaron los eritrocitos en presencia de anticquerpos específicos. Las modificaciones observadas nos conducen a especular respecto del nivel topográfico de la membrana alterado por el anticquerpo. Se presenta un caso de enfermedad hemolítica autoinmune, que mquestra la sensibilidad de este método para el diagnóstico clínico

Tecnología óptica moderna aplicada al desarrollo de métodos inmunohematológicos / Modern optical technology applied to the developement of inmunohematological methods

La determinación cuantitativa de tamaños y formas de partículas en suspensión por medio de la difusión lumínica, ha sido aplicada para desarrollar tres nquevos métodos para estudios inmunohematológicos. El primero de ellos es un método manual para cuantificar reacciones de hemaglutinación, rápido y fácil de ejecutar. Su precisión y repetibilidad han sido bien demostradas. En el segundo método se determina la velocidad de aglutinación, midiendo la disminución de la difusión lumínica total. Con el tercer método se mide la deformabilidad de los eritrocitos en suspensión, sometidos a un campo de corte fluido, por medio del patrón de difracción producido por un laser qque atraviesa la mquestra. Con los datos obtenidos por este método se calculan dos parámetros reológicos (un coeficiente de elasticidad de membrana y un coeficiente de viscosidad superficial de la membrana). Significativas modificaciones de los parámetros reológicos con relación a valores normales fqueron observados cuando se colocaron los eritrocitos en presencia de anticquerpos específicos. Las modificaciones observadas nos conducen a especular respecto del nivel topográfico de la membrana alterado por el anticquerpo. Se presenta un caso de enfermedad hemolítica autoinmune, que mquestra la sensibilidad de este método para el diagnóstico clínico (AU)

Estudio comparativo entre filtrabilidad y difractometría en medición de deformabilidad eritrocitaria / Comparative study between filtration and diffraction in erithrocyte deformation measurement

La deformabilidad de los glóbulos rojos es una propiedad que influencia marcadamente la circulación microvascular. Entre los distintos métodos propuestos para medir este valor, el de filtrabilidade eritrocitaria es el más difundido. Otro método, más reciente, es el preconizado por Bessis y colaboradores, basados en el patrón de difracción láser. En nuestros laboratorios hemos desarrollado un nuevo instrumento denominado eritrodefórmetro, basado en el método de difracción, para determinar la deformabilidad de una población de glóbulos rojos cuando se les aplica una tensión de cizallamiento fluido controlada. Presentámos aquí algunos resultados obtenidos con este instrumento y su comparación con los suministrados por el método de filtrabilidad para las mismas muestras

Estudio comparativo entre filtrabilidad y difractometría en medición de deformabilidad eritrocitaria / Comparative study between filtration and diffraction in erithrocyte deformation measurement

La deformabilidad de los glóbulos rojos es una propiedad que influencia marcadamente la circulación microvascular. Entre los distintos métodos propuestos para medir este valor, el de filtrabilidade eritrocitaria es el más difundido. Otro método, más reciente, es el preconizado por Bessis y colaboradores, basados en el patrón de difracción láser. En nuestros laboratorios hemos desarrollado un nuevo instrumento denominado eritrodefórmetro, basado en el método de difracción, para determinar la deformabilidad de una población de glóbulos rojos cuando se les aplica una tensión de cizallamiento fluido controlada. Presentámos aquí algunos resultados obtenidos con este instrumento y su comparación con los suministrados por el método de filtrabilidad para las mismas muestras (AU)