Uso combinado de amplificación aleatoria de polimorfis model ADN (RAPD) y reacción en cadena de la polimerasa (touchdown PCR) en el estudio epidemiológico de Aspergillus fumigatus / Combined used of RAPD and touchdown PCR for epidemiological studies of Aspergillus fumigatus

INTRODUCCIÓN. Aspergillus fumigatus es un hongo filamentoso que se comporta como patógeno oportunista y constituye una de las complicaciones infecciosas más importantes en los pacientes inmunocomprometidos. Los brotes nosocomiales de aspergilosis son cada vez más frecuentes, pero su identificación y caracterización epidemiológica es lenta y laboriosa. OBJETIVO. Describir un método rápido, sensible y específico para la identificación de A. fumigatus y su caracterización genotípica dentro de las posibilidades diagnósticas habituales en un laboratorio clínico de microbiología. MÉTODOS. Se utilizaron cepas de A. fumigatus procedentes de pacientes con aspergilosis invasivas (n = 4), medio ambiente hospitalario (n = 5) y colecciones de referencia (n = 1), así como otras especies fúngicas filogenéticamente próximas aisladas de pacientes (n = 1), del medio hospitalario (n = 6) o de colecciones de referencia (n = 1). La identificación de A. fumigatus se realizó tanto por métodos fenotípicos clásicos como mediante touchdown PCR (reacción en cadena de la polimerasa). La caracterización genotípica se llevó a cabo por RAPD (polimorfismo derivado de la amplificación aleatoria de ADN), comparando distintos protocolos de amplificación y tipos de primer (OPZ-19 y R-108) en relación con su poder resolutivo y reproducibilidad. RESULTADOS. Los resultados de la identificación fenotípica y molecular coincidieron plenamente. La caracterización molecular por RAPD presentó los mejores resultados, en cuanto a reproducibilidad y resolución se refiere, con el primer R-108 y tiempo prolongado de transición entre hibridación y elongación. CONCLUSIÓN. El análisis por RAPD es un método seguro y rápido para la caracterización genotípica de A. fumigatus cuyos patrones de bandas son fáciles de interpretar y reproducir cuando se prolonga drásticamente el tiempo de transición entre la hibridación y la extensión. El uso combinado de touchdown PCR y análisis por RAPD constituye un método sensible y exacto para la resolución de brotes nosocomiales por A. fumigatus (AU)

Combined used of RAPD and touchdown PCR for epidemiological studies of Aspergillus fumigatus.

INTRODUCTION: Aspergillus fumigatus is a filamentous fungus that acts as an opportunistic pathogen and has emerged as a major problem in immunosuppressed patients. Nosocomial outbreaks of aspergillosis are becoming more frequent, but their identification and epidemiological characterization is slow and difficult. OBJECTIVE: Description of a fast, sensitive, specific method to identify and fingerprint A. fumigatus using methodology available in clinical laboratories. METHODS: We studied several strains of A. fumigatus isolated from patients with invasive aspergillosis (n = 4), the hospital environment (n = 5) and reference cultures (n = 1), as well as other close phylogenetic fungal species from patients (n = 1), hospital environment (n = 6) and reference cultures (n = 1). A. fumigatus was identified by both touchdown PCR and conventional phenotyping methods. Genotyping was performed with random amplification of polymorphic DNA (RAPD) analysis, comparing the results from two primers (OPZ-19 and R-108) and different amplification protocols with regard to band resolution and reproducibility. RESULTS: Touchdown PCR and phenotype results were identical. Best RAPD results were obtained with the R-108 primer and considerably longer ramp times between annealing and extension. CONCLUSION: RAPD analysis is a fast, reliable tool for DNA fingerprinting. Patterns may be easier to repeat and interpret when longer ramp times are used. Touchdown PCR combined with RAPD analysis is a sensitive, accurate method for managing clinical outbreaks of Aspergillus fumigatus.

Diarrea por adenovirus y astrovirus en pacientes inmunodeficientes hospitalizados / Adenovirus and astrovirus diarrhea in immunocompromissed hospitalized patients

Fundamento. La diarrea, aguda o crónica, es una complicación común en los pacientes inmunodeprimidos tales como los infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), sometidos a trasplantes de médula ósea o de órgano sólido y aquéllos con leucemias u otras alteraciones del sistema inmunitario. Dada la importancia de reconocer las posibles etiologías de la diarrea a al ahora de administrar una terapia antimicrobiana específica o evitar un diagnóstico incorrecto de rechazo postrasplante, hemos investigado la presencia de antígeno de astrovirus y adenovirus en las heces de pacientes inmunodeprimidos. Pacientes y métodos. Se analizaron las heces de 258 pacientes inmunodeprimidos hospitalizados en el Complejo Hospitalaria Universitario de Santiago de Compostela y diagnosticados de diarrea durante 1997-99. La detección de los antígenos víricos se realizó mediante enzimoinmunoanálisis (EIA). También se analizaron para otros enteropatógenos comunes. Resultados. El antígeno de adenovirus fue positivo en 5 casos (2 por ciento) y el astrovirus en 12 (5 por ciento). Los pacientes más frecuentemente afectados fueron los prematuros y los hematológicos. Se detectó antígeno de astrovirus en tres pacientes infectados por VIH. La mayoría de los casos positivos presentaban una alteración de la flora intestinal o presencia de toxina de Clostridium difficile, ambas situaciones relacionadas con tratamiento antibiótico prolongado. Conclusiones. Los astrovirus y los adenovirus son enteropatógenos a considerar en individuos inmunocomprometidos hospitalizados. Es, pues, conveniente realizar un diagnóstico certero de la etiología de la diarrea de cara a la administración de un tratamiento antimicrobiano, en los casos en que éste sea necesario, o evitar un diagnóstico incorrecto de rechazo postrasplanteadenovirus and astrovirus antigen in faeces from different immunosupressed (AU)