A model for preservation of thymocyte-depleted thymus.

DiGeorge syndrome is a disorder caused by a microdeletion on the long arm of chromosome 22. Approximately 1% of patients diagnosed with DiGeorge syndrome may have an absence of a functional thymus, which characterizes the complete form of the syndrome. These patients require urgent treatment to reconstitute T cell immunity. Thymus transplantation is a promising investigational procedure for reconstitution of thymic function in infants with congenital athymia. Here, we demonstrate a possible optimization of the preparation of thymus slices for transplantation through prior depletion of thymocytes and leukocyte cell lineages followed by cryopreservation with cryoprotective media (5% dextran FP 40, 5% Me2SO, and 5% FBS) while preserving tissue architecture. Thymus fragments were stored in liquid nitrogen at -196°C for 30 days or one year. The tissue architecture of the fragments was preserved, including the distinction between medullary thymic epithelial cells (TECs), cortical TECs, and Hassall bodies. Moreover, depleted thymus fragments cryopreserved for one year were recolonized by intrathymic injections of 3×106 thymocytes per mL, demonstrating the capability of these fragments to support T cell development. Thus, this technique opens up the possibility of freezing and storing large volumes of thymus tissue for immediate transplantation into patients with DiGeorge syndrome or atypical (Omenn-like) phenotype.

A model for preservation of thymocyte-depleted thymus

DiGeorge syndrome is a disorder caused by a microdeletion on the long arm of chromosome 22. Approximately 1% of patients diagnosed with DiGeorge syndrome may have an absence of a functional thymus, which characterizes the complete form of the syndrome. These patients require urgent treatment to reconstitute T cell immunity. Thymus transplantation is a promising investigational procedure for reconstitution of thymic function in infants with congenital athymia. Here, we demonstrate a possible optimization of the preparation of thymus slices for transplantation through prior depletion of thymocytes and leukocyte cell lineages followed by cryopreservation with cryoprotective media (5% dextran FP 40, 5% Me2SO, and 5% FBS) while preserving tissue architecture. Thymus fragments were stored in liquid nitrogen at -196°C for 30 days or one year. The tissue architecture of the fragments was preserved, including the distinction between medullary thymic epithelial cells (TECs), cortical TECs, and Hassall bodies. Moreover, depleted thymus fragments cryopreserved for one year were recolonized by intrathymic injections of 3×106 thymocytes per mL, demonstrating the capability of these fragments to support T cell development. Thus, this technique opens up the possibility of freezing and storing large volumes of thymus tissue for immediate transplantation into patients with DiGeorge syndrome or atypical (Omenn-like) phenotype.

Self-fertilization, long-distance flash invasion and biogeography shape the population structure of Pseudosuccinea columella at the worldwide scale.

Population genetic studies are efficient for inferring the invasion history based on a comparison of native and invasive populations, especially when conducted at species scale. An expected outcome in invasive populations is variability loss, and this is especially true in self-fertilizing species. We here focus on the self-fertilizing Pseudosuccinea columella, an invasive hermaphroditic freshwater snail that has greatly expanded its geographic distribution and that acts as intermediate host of Fasciola hepatica, the causative agent of human and veterinary fasciolosis. We evaluated the distribution of genetic diversity at the largest geographic scale analysed to date in this species by surveying 80 populations collected during 16 years from 14 countries, using eight nuclear microsatellites and two mitochondrial genes. As expected, populations from North America, the putative origin area, were strongly structured by selfing and history and harboured much more genetic variability than invasive populations. We found high selfing rates (when it was possible to infer it), none-to-low genetic variability and strong population structure in most invasive populations. Strikingly, we found a unique genotype/haplotype in populations from eight invaded regions sampled all over the world. Moreover, snail populations resistant to infection by the parasite are genetically distinct from susceptible populations. Our results are compatible with repeated introductions in South America and flash worldwide invasion by this unique genotype/haplotype. Our study illustrates the population genetic consequences of biological invasion in a highly selfing species at very large geographic scale. We discuss how such a large-scale flash invasion may affect the spread of fasciolosis.

Visual Inspection for Caries Detection: A Systematic Review and Meta-analysis.

We aimed to perform a systematic review including a meta-analysis to evaluate the overall accuracy of visual methods for detecting carious lesions and to identify possible sources of heterogeneity among the studies included. Two reviewers searched PubMed, Embase, Scopus, and other sources through July 2014 to identify published and nonpublished studies in English. Studies of visual inspection were included that 1) assessed accuracy of the method in detecting caries lesions; 2) were performed on occlusal, proximal, or free smooth surfaces in primary or permanent teeth; 3) had a reference standard; and 4) reported sufficient data about sample size and accuracy of methods. The data were used to calculate the pooled sensitivity, specificity, diagnostic odds ratio, and summary receiver operating characteristics curve. Heterogeneity of the studies was also assessed. A total of 102 manuscripts (from 5,808 articles initially identified) and 1 abstract (from 168) met the inclusion criteria. In general, the analysis demonstrated that the visual method had good accuracy for detecting caries lesions. Although laboratory and clinical studies have presented similar accuracy, clinically obtained specificity was higher. We also observed moderate to high heterogeneity and evidence of publication bias in most papers. Moreover, studies employing widely recognized visual scoring systems presented significantly better accuracy as compared to studies that used their own criteria. In conclusion, visual caries detection method has good overall performance. Furthermore, although the identified studies had high heterogeneity and risk of bias, the use of detailed and validated indices seems to improve the accuracy of the method.

Radiographic and laser fluorescence methods have no benefits for detecting caries in primary teeth.

Clinical guidelines advise that dentists take radiographs in children to detect caries lesions missed by visual inspection; however, due to the current low caries prevalence in most countries, we hypothesized that the adjunct methods of caries detection would not significantly improve the detection of primary molar lesions in comparison to visual inspection alone. We evaluated the performance of visual inspection, alone or in combination with radiographic and laser fluorescence pen (LFpen) methods, in detecting occlusal and approximal caries lesions in primary molars. Two examiners evaluated children who had sought dental treatment with these diagnostic strategies. The reference standard involved the temporary separation of approximal and operative interventions for occlusal surfaces. The sensitivity, specificity, accuracy and utility of diagnostic strategies were calculated. Simultaneous combined strategies increased sensitivities but decreased specificities. Furthermore, no differences were observed in accuracy and utility, parameters more influenced by caries prevalence. In conclusion, adjunct radiographic and laser fluorescence methods offer no benefits to the detection of caries in primary teeth in comparison to visual inspection alone; hence, present clinical guidelines should be re-evaluated.

Fluorometría; un método rápido y sencillo para evaluar la Actividad Antipalúdica / Fluorometers; a rapid and simple method for evaluating the Antimalarial Activity

La Malaria es una enfermedad que oscila entre 250 y 300 millones de casos y aproximadamente dos millones de muertes anualmente1. Esta enfermedades causada por cuatro especies de Plasmodium (P.falciparum, P. vivax, P.ovale y P. malariae) que son transmitidas a los humanos por picadura de las hembras del mosquito Anopheles. El aumento de la resistencia del parásito al tratamiento con agentes antimaláricos conocidos como la cloroquina se convierte en uno de los aspectos responsables del crecimiento de esta enfermedad. Además de este problema también se cuenta con la resistencia delvector a los insecticidas y la limitación de una potencial vacuna antimalárica, todo esto contribuye a la necesidad urgente de encontrar nuevos agentes para el tratamiento de la malaria, en particular agentes efectivos contra P. falciparum, que es la responsable de la forma más severa de malaria.

Establecimiento de células en suspensión de Stevia rebaudiana Bertoni / Establishhment of cells in suspension of stevia rebaudiana Bertoni

Stevia rebaudiana B., es un arbusto de origen paraguayo que posee en sus hojas, glucósidos diterpenos conocidos comúnmente como steviosidos totales (Molinas, S. 1989).. Es empleada comoedulcorante natural de alta potencia, (± 300 veces más dulce que el azúcar), termoestable, hipoglisemiante, no produce caries, es hipotensiva, no calórica, inocua para la salud y con actividad antimicrobiana contraalgunos microorganismos.

Establecimiento de las condiciones para la producción de Biogas a partir de ácidos grasos volátiles obtenidos de la Hidrólisis anaeróbica de la papa (Solanum tuberosum) a nivel de laboratorio / Establishment of the conditions for the production of biogas based on obtained volatile fatty acids of the anaerobic Hydrolysis of the potato (Solanum tuberosum) at the level of laboratory

En este trabajo se ha estudiado las condicionesnecesarias para la producción de Biogas utilizando como fuente de carbono los Ácidos Grasos Volátiles, los cuales son obtenidos de la hidrólisis anaeróbica de la papa. Se han establecido Cultivos Batch metanogénicos y se ha determinado la influencia de los AGVs en la cinética de producción de Metano. De esta manera se observ que el Cultivo que tenía 11,68mg/ml de AGVs Totales tuvo una producción de 6,9% de Metano y 3,6% de Dióxido de Carbono, a los 45 días de haberse establecido el cultivo.Posteriormente, se estableci el cultivo continuo, en el cual la producción de biogás empez a los 11 días deestablecerse el cultivo, se obtuvo 1200 ml de Gas donde el 6,9% era Metano y 3,7% era Dióxido de carbono. La composición de gases fue medida con el detector portátil G3.16k – LT 1522 LMSx.

Estudio biodirigidos de Solanum argentinum sobre plasmodium falciparum / I study biodirigidos of Solanum argentinum it has more than enough plasmodium falciparum

El presente trabajo es parte del proyecto "Flora Regional como fuente de fármacos antiparasitarios, antifúngicos y anticancerígenos" financiado por la Organización de Estados Americanos (OEA) que se ejecuta en el Instituto de Investigaciones Farmaco Bioquímicas, desde el año 2001. Los principios activos de las partes aéreas de la planta Solanum argentinum, fueron extraídos medianate maceración alchohólica (70 por ciento) y parcialmente purificados por Cromatografia líquida al vació, obteniéndose 9 fracciones con valores de IC50 (concentración inhibitoria del 50 por ciento aceptables (11<10 ug/ml), en la inhibición sobre la maduración de los esquizontes (prueba in vitro). Los valores de IC50 en el Test de Inhibición de la Biomineralización de la Ferriprotoporfirina IX (FBIT), como indicadores de su posible mecanismo de acción también fueron hallados con resultados aceptables (<10mg/ml). Las fracciones activas contra esquizontes se subfraccionaron por cromatografía en columna donde se obtubieron 5 subfracciones activas F3-7, F4-10, F4-12, F5-17 y F5-18.

Actividad Leishmanicida y tripanocida de algunas plantas reportadas como medicinales en Colombia / Activity Leishmanicida and tripanocida of some plants reported as medicinal in Colombia

Ocho extractos crudos y dos fracciones de alcaloides obtenidos de siete especies vegetales provenientes de la flora colombiana, (abuta grandifolia, Piper holtonii, Acnistus arborescens, Croton leptostachys, Piper cumanense, Acacia farnesiana y Xilopia aromática) fueron evaluadas in vitro frente a tres especies de Leishmania danovanni y Leismania braziliensis y epimastigotes de Trypanosoma cruzi (tulahuen); dos de estas epecies (Acnistus arborescens y Piper cumanense) mostraron alta actividad en los ensayos realizados con valores de concentración inhibitoria 50 (CL50) menores de 12,5 ug/mL; cercanos a los obtenidos con el fármaco de referencia pentamidina 10 ug/mL.

Actividad antipalúdica de plantas procedentes de la Amazonía peruana / Activity antipalúdica of plants coming from the Peruvian Amazonía

El presente trabajo fue realizado con el objetivo de plantear la búsqueda de nuevos agentes antipalúdicos de origen natural a través de pruebas biológicas. Para la realización del mismo se utilizaron extractos crudos de plantas recolectadas en la Amazonia peruana. La evaluacion fue realizada por un método directo que es el modelo in vitro, en cultivo de Plasmodium falciparum F32 sensible a la Cloroquina y por un modelo indirecto que es el ensayo de la inhibición de la Biomineralización de la Ferriprotoporfina IX (FBIT). Los resultados obtenidos nos permiten clasificar a 7 extractos como activos en la prueba de Evaluación de la Actividad Antipalúdica por el método directo in vitro, y 14 por el método indirecto (FBIT), de todos estos solo a 4 presentan actividad por ambos métodos por lo que podemos afirmar que su mecanismo de acción es similar al de la Cloroquina, y los 3 restantes son los que mas interesan pues su mecanismo de acción es diferente al de la Cloroquina, y pordría ser de gran beneficio en cepas resistentes a esta droga. Todos estos extractos se encuentran actualmente en un proceso de purificación para una nueva evaluación a través de estudios químicos y biológicos.

Estudio de especies vegetales Bolivianas con actividad Antimalarica / Study of Bolivian vegetal species with antimalarica activity

El presente trabajo forma parte del proyecto financiado por la OEA "Aprovechamiento de la Flora Regional de Bolivia como Fuente de Farmacos Contra Parasitos y Cancer" realizado en el Instituto de Investigaciones Farmaco Bioquimicas de la Facultad de Ciencias Farmaceuticas y Bioquimicas (UMSA). Se obtuvieron 36 extractos crudos de especies medicinalesde la etnia Guarani, las que fueron evaluadas a traves del test de inhibicion de la biomineralizacion de la ferro-protoporfirina-IXFBIT, metodos in vitro (no directo), utilizando para la deteccion y evaluacion de la actividad antimalarica. Los resultados dela actividad antimalarica se reportaron de acuerdo al valor de las IC50 (concentracion inhibidora del 50 porciento de la biominerilizacion de la FP-IX, el 64.8 porciento de los extractos resultaron ser activos

Aislamiento y caracterización de los principios antifúngicos y leishmanicidas del Matico-Piper elongatum Vahl / Insulation and characterization of the principles antifungicos and leishmanicidad of the matico-piper slongatiun vahl

El presente trabajo ha formado parte del proyecto IFS Grant F/265-1. El extracto de diclorometano de hojas de Piper elongatum Vahl fue evaluado in vitro por su actividad antifúngica contra Neurospora crassa yantiparasitaria contra Leishmania braziliensis, L. donovanti, L. amazonensis. Se han aislado y caracterizado seis compuestos: los inactivos identificado como B sitosterol y asarona y los biológicamente activos identificados como: el ácido 3-(3', 7' -dimetil-3', 6'-octadienil)-4-metoxi-benzoico 2', 4', 6' -trihidroxidihidrochalcona, 2', 6', 4-trihidroxi-4'-metoxi-dihidro-chalcona y un metabolito no evaluado identificado como el ácido 3-(3', 7'-dimetil-3', 6'-octadienil) -4-hidroxi-benzoico. El derivado metoxilado del ácido benzoico presentó actividad contra N. crassa y moderada actividad contra los parásitos de Leishmania, las dihidrochalconas presentaron una marcada actividad contra los parásitos de Leishmania y una marcada relación de estructura-actividad contra el moho. Las estructuras fueron establecidas sobre la base de sus datos espectroscópicos de UV, IR, RMN de 1H y 13C y espectrometría de masas

Trypanocidal withanolides and withanolide glycosides from Dunalia brachyacantha.

Two new withanolide glycosides, (20R,22R)-O-(3)-alpha-L-rhamnopyranosyl(1-->4)-beta-D-glucopyranosyl-1 alpha,12 beta-diacetoxy-20-hydroxywitha-5,24-dienolide (3) and (20R,22R)-O-(3)-beta-D-xylopyranosyl(1-->3)-[beta-D-xylopyranosyl(1-->4)]-beta-D-glucopyranosyl-1 alpha-acetoxy-12 beta,20-dihydroxywitha-5,24-dienolide (4), were isolated from the leaves and root of Dunalia brachyacantha. Their aglycones, (20R,22R)-1 alpha,12 beta-diacetoxy-3 beta,20-dihydroxywitha-5,24-dienolide (or 1 alpha,12 beta-diacetyldunawithagenine) and (20R,22R)-1 alpha-acetoxy-3 beta,12 beta,20-trihydroxywitha-5,24-dienolide (or 1 alpha-acetyl-12 beta-hydroxydunawithagenine), are novel. The known 18-acetoxywithanolide D (1) and 18-acetoxy-5,6-deoxy-5-withenolide D (2) were also isolated from the leaves. These last two compounds were shown to be responsible for the trypanocidal, leishmanicidal, and bactericidal activities manifested by the crude ethanolic extract. The structures were deduced from spectroscopic data and on the basis of chemical evidence.

Perfil antimicrobiano de fermentos producidos por microorganismos aislados de tierra de distintas regiones de Bolivia / Profile ant microbial of ferments produced by microorganisms isolated of groynd of distinct regions of Bolivia

Se aislaron 24 hongos a partir de 8 muestras de tierra, mediante el método de dilución sobre agar y se determinó la viabilidad de 225 hongos del cepario del Instituto de Investigaciones Fármaco Bioquímicas (IIFB) encontrándose viable el 81,7 por ciento. De las 208 colonias de hongos evaluadas, el 28,5 por ciento presentaron actividad antimicrobiana en medio sólido. Por su actividad antimicrobiana de amplio espectro fueron seleccionados 7 hongos por duplicado en condiciones de iluminación, pH y concentración de glucosa controladas. La cepa productora de antibióticos, Aspergillus sp, fue seleccionado para estudios cinéticos en cultivo batch (100ml), detectándose actividad contra Staphylococcus aureus (50ul/ml) y Escherichia coli (200ul/ml). Posteriormente, se realizaron cultivos a 1,000 ml en fermentador con agitación controlando el pH, la producción de antibiótico y la concentración de glucosa en el medio. Una vez filtrado el sobrenadante, fue sometido a una cromatografía en columna con la resina HP21 lipofílica, deluida con mezclas de agua y metanol para su purificación, resultando activa la fracción obtenida con metanol al 80 por ciento, contra S. aureus (25ul/ml) y E. coli (2000ul/ml)

Inhibición de germinación de semillas y toxicidad en Artemia salina, como indicadores de actividad antitumoral / Inhibition of germination of seeds and toxicity in artenia salina, as indicators of activity antitumoral

Dos ensayos biológicos sencillos, baratos y rápidos: inhibición de germinación de semillas de tomate y lechuga y Toxicidad en A. salina, han sido evaluados en su eficiencia y selectividad como indicadores de posible actividad antitumoral, para lo cual se los ha confrontado con antitumorales comerciales, antibióticos de uso habitual, extractos vegetales orgánicos de plantas de uso etnobotánico y fracciones de extractos seleccionados. El bioensayo de Inhibición de germinación ha mostrado una eficiencia del 83 por ciento al detectar 5 de 6 antitumorales y 100 por ciento al asociarse a la prueba de Toxicidad en A. salina, con un criterio de indicador de actividad positiva cuando el CI50 o DL50 es inferior a 10 ppm. Con el mismo parámetro, ninguno de los antibióticos probados ha clasificado como posible antineoplásico. Del tamizaje de 147 plantas de uso medicinal por la etnia Tacana, se han seleccionado 5 por tener C150<10 ppm., se han fraccionado 2 de ellas Phyllantus acuminatus y Leretia cordata, en cuyas fracciones, en ambos casos, se evidencia la correlación de actividad inhibitoria de semillas y toxicidad en A. salina

Aceites esenciales con propiedades antimicrobianas / Essencial oils propweties antimicrobial

El presente estudio trata sobre la extracción y evaluación del perfil biológico antimicrobiano in vitro de aceites esenciales de especies vegetales aromáticas. Los aceites fueron obtenidos mediante destilación por arrastre de vapor de agua de diferentes órganos: partes aéreas (hojas y tallos) y dermis de cítricos (cáscara). El crecimiento del hongo saprófito Neurospora crassa fue inhibido por el aceite de Citrus limetta (Lima) a concentraciones de 0,5 mg/ml. El aceite de Rosmarinus oficinalis (Romero), a una concentración de 1 mg/ml, inhibió el crecimiento de la bacteria Staphylococcus aureus. Mientras que los aceites de Petroselium sativum (Perejil), Satureja boliviana (Khoa), Schinus molle (Molle) Citrus aurantium (Naranja), Citrus paradisii (Toronja) y Citrus nobilis (Mandarina), inhibieron el crecimiento tanto de hongos a 0,5 mg/ml, como bacterias a 1 mg/ml. Entre estas últimas esencias, las del Perejil y Molle a 3.7 mg/ml y la Khoa a 7.5 mg/ml inhibieron el crecimiento de Sigella flexneri

Aceites esenciales con actividad citotóxica como indicador de propiedades insecticidas / Essential oils activity citotoxic as indicador of properties insecticides

El presente estudio trata sobre la extracción y evaluación de la toxicidad general contra Artemia salina de aceites esenciales de especies vegetales aromáticas. Los aceites fueron obtenidos mediante destilación por arrastre de vapor de agua de diferentes órganos: partes áreas (hojas y tallos) y dermis de cítricos (cáscara). Como indicador de toxicidad se ha calculado la Dosis Letal Media (DL-50) de los aceites contra el camarón salino, considerando que la evaluación biológica contra A. salina, es también utilizada como una prueba preliminar orientada al descubrimiento de nuevos insecticidas y dado que todos los aceites en estudio han presentado valores de Dl-50 menores a 100ppm, podriamos indicar que los aceites estudiados son potenciales insecticidas naturales y considerando sus índices de toxicidad presentaron el siguiente orden: Ruda graveolen (Ruda, Dl-50=2.7ppm), aceite de Wakataya saiko (Wakataya, Dl-50=3.9ppm), cariophyllus aromáticus (Clavo, Dl-50=33.9ppm), Juniperus communis (Pino, Dl-50=38.5ppm), Piper sp. (Matico, Dl-50=41.3ppm) y Eucaliptus globulus (Eucalipto, Dl-50=85.6ppm)

Pruebas biológicas destinadas a evaluar citotóxicos como indicadores de potenciales antitumorales / Biologics test destined to evaluate citotoxicos as indicators of potential antitumoral

En el presente trabajo de investigación se presentan los resultados contra Artemia salina y citostática, como inhibidores de germinacion de semillas de tomate y lechuga, de: Cisplatino, Citarabina, Fluoruracilo, Metotrexato y Vincristina, drogas comerciales utilizadas en la terapia de procesos cancerígenos. La combinación de estas evaluaciones citotóxicas/citostáticas se utilizan en el IIFB, como indicadores de potenciales antitumorales y entre las plantas utilizadas en las farmacopeas tradicionales, por su comportamiento análogo a las drogas patrón utilizadas, nos ha permitido seleccionar 5 especies vegetales, de un total de 147 evaluadas, para estudios de citotoxicidad en cultivos con lineas celulares cancerígenas