ABSTRACT
In this study, we describe resistance mechanisms in fluconazole-resistant isolates of C. albicans isolated from AIDS patients from nine Brazilian hospitals. These mechanisms include the presence of point mutations in the ERG11 gene and overexpression of ERG11, and several genes encoding efflux pumps, as measured by quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Several fluconazole-resistant strains had multiple mechanisms of resistance. Four mutations previously described, Y132F, K143R, E266D, and V437I, were identified among the strains, whereas some isolates contained more than one mutation. Fourteen novel mutations were identified. Interestingly, all Brazilian fluconazole-resistant isolates showed homozygosity at mating-type loci (MTL) associated with fluconazole resistance. This is the first comprehensive assessment at molecular level of mechanisms of fluconazole resistance in C. albicans isolates from South America.
Subject(s)
AIDS-Related Opportunistic Infections/diagnosis , Candida albicans/genetics , Candidiasis/diagnosis , Drug Resistance, Fungal/genetics , Fluconazole/pharmacology , AIDS-Related Opportunistic Infections/drug therapy , Adult , Antifungal Agents/pharmacology , Base Sequence , Brazil , Candida albicans/drug effects , Candidiasis/drug therapy , Cohort Studies , DNA, Fungal/analysis , Female , Genes, MDR , Humans , Male , Microbial Sensitivity Tests , Middle Aged , Molecular Sequence Data , Pharmacogenetics , Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction/methods , Sampling Studies , Sensitivity and SpecificityABSTRACT
Propósito: As espécies do gênero Fusarium são agentes comuns de infecções oculares em humanos, sendo a ceratite sua principal manifestação clínica. A ceratite é comumente vista em habitantes das áreas tropicais e subtropicais. Sua incidência está correlacionada com o tempo das colheitas, sazonabilidade, temperatura e umidade. Os objetivos do estudo foram; 1º avaliar a taxa de prevalência de Fusarium entre os pacientes com ceratites; 2º adaptar o método de ERIC-PCR para genotipar as cepas de Fusarium; 3º avaliar a diversidade genética de F. solani utilizando 2 métodos diferentes. Métodos: Todos os casos de ceratites por fungos diagnosticados num período de 6 anos (1996 a 2002) no Laboratório de Microbiologia do Departamento de Oftalmologia da Universidade Federal de São Paulo foram revisados. 0 diagnóstico foi estabelecido por exame direto das escamas de córnea e cultura. Os fungos isolados foram identificados de acordo com métodos clássicos. Isolados de Fusarium solani foram genotipados utilizando 2 métodos: ERIC-PCR e PCR-RFLP. Resultados: Cento e cinqüenta e dois fungos isolados de ceratites foram diagnosticados durante o período estudado. As espécies mais isoladas foram: F. solani, seguido de Candida albicans, Paecilomyces lilacinus e Aspergillus flavus. Um total de 44 isolados de F. solani, incluindo 35 epidemiológicamente não relacionados e 9 isolados obtidos de 4 pacientes, foram tipados por ERIC-PCR e PCR-RFLP. O padrão de bandas obtido com ERIC-PCR incluiu 12 a 27 bandas de amplificação. Trinta e nove genótipos foram obtidos com os 44 isolados. O padrão de bandas obtidos com PCR-RFLP incluiu 1 a 8 bandas de amplificação. Treze genótipos foram obtidos com as 44 cepas. Conclusões: F. solani foi à espécie mais isolada causando ceratites micóticas. Os padrões de bandas gerados por ERIC-PCR tiveram um maior poder discriminatório que PCR-RFLP para diferenciar as cepas de F. solani. A tipagem molecular revelou grande heterogeneidade genética das cepas de F. solani estudadas
