Programa cubano de pesquisa neonatal de la hiperplasia suprarrenal congénita: una realidad. 2005-2014 / Cuban neonatal screening program for congenital adrenal hyperplasia: a reality. 2005­2014

Introducción: la hiperplasia suprarrenal congénita (HSC) es el desorden adrenal más común en la infancia y la causa más frecuente de ambigüedad sexual. La forma clásica, que representa los casos más severos de este déficit, se asocia en un 75 % con pérdida de sal. Por otra parte, en los recién nacidos (RN) del sexo femenino se pueden presentar grados severos de virilización de genitales. Objetivo: presentar los resultados (durante diez años), del Programa Cubano de Pesquisa Neonatal (PN) de la HSC, soportado en un procedimiento inmunoenzimático desarrollado en Cuba. Resultados: en el período de enero 2005 a diciembre 2014, se han estudiado 1 140 882 RN y se detectaron 56 niños con HSC, para una incidencia de 1:20 373 RN. La cobertura del programa se ha incrementado hasta llegar en el año 2013 al 99.34 % de todos los RN cubanos. Conclusiones: la existencia del Programa Cubano de PN de HSC, ha permitido estimar la incidencia e incrementar el conocimiento de esta enfermedad. La PN ha posibilitado el diagnóstico precoz en la variedad perdedora de sal, contribuyendo a la disminución de la mortalidad infantil. El Programa ha favorecido a pacientes con formas virilizantes de la enfermedad, mediante la asignación correcta del sexo

Introduction: Congenital Adrenal Hyperplasia (HSC) is the most common adrenal disorder in childhood and the most frequent cause of sexual ambiguity. The classic form, which represents the most severe causes of this deficit, is associated in 75 % with loss of salt. On the other hand, in the NB of the female sex that present severe degrees of virilization of the genitals. Objective: To present result of the application for ten years of the Cuban Neonatal Research Program of the HSC, supported by an inmmunoenzymatic procedure developed in Cuba. Result: In the period from January 2005 to December 2014, using the UMELISA 17 OH PROGESTERONA NEONATAL, 1 140882 RN were detected, for an incidence of 1:20373 RN. The coverage of the program has been increasing until2013 reaching 99.34 % of all Cuban RN. Conclusion: The existence of the Cuban HSC PN Program, has allowed estimating the incidence and increase knowledge of this disease in our country. PN has made possible the early diagnosis of patients with the salt losing variety, contributing to decrease in infant mortality nationwide. The Program has favored patients with virilizing form of the disease, through the correct assignment of sex

Generation and characterization of murine monoclonal antibodies against immunoreactive trypsinogen for newborn screening of cystic fibrosis.

Cystic fibrosis (CF) is a multisystem disorder that reduces quality of life and survival in affected individuals. In newborns, the release of pancreatic enzymes into the blood raises the levels of immunoreactive trypsinogen (IRT), the main marker for CF screening, which is detected in dried blood samples on filter paper by immunoenzymatic assays. In Cuba, CF has an estimated incidence of 1/9862 live births and should be included in the national basic newborn screening (NBS) panel given its benefits in terms of nutrition, lung function and survival. The Immunoassay Center develops and produces diagnostic kits allowing the establishment of large-scale NBS programs for inherited metabolic disorders in Cuba and other Latin American countries. IRT-specific monoclonal antibodies (MAbs) obtained at the Immunoassay Center are essential for developing an affordable immunoassay for IRT to support CF NBS in our low-income country. An immunization scheme with trypsinogen-1 originated two IgG1-producing murine hybridomas. 4C9C9 and 4C9E11 MAbs recognized different determinants on both trypsin-1 and trypsin-2 molecules. Both antibodies identified conformational epitopes on the molecule of trypsin-1 and of its zymogen. As 4C9E11 MAb cross-reacted with proteins structurally and functionally related to trypsinogen, it was used as revealing antibody in a sandwich-type UMELISA® assay for IRT determination with 4C9C9 MAb for capture. This combination, aside from detecting several commercially available trypsins, adequately quantified IRT from dried blood samples on filter paper of newborns. The evaluation of the assay's accuracy yielded percentage recoveries ranging 93.3-109.2% for commercial controls. The properties of the studied MAbs demonstrate their suitability for being used in a sandwich-type UMELISA® assay for the CF NBS in Cuba.

Generation of monoclonal antibodies against 17α-hydroxyprogesterone for newborn screening of congenital adrenal hyperplasia.

Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is an autosomal recessive disorder caused by the deficiency of one of the five enzymes involved in the biosynthesis of corticosteroids. The most common form of the disease is the lack of 21-hydroxylase which provokes an accumulation of high levels of 17α-hydroxyprogesterone (17-OHP), the main biochemical marker for illness detection. Given the significance of neonatal diagnosis for ensuring a timely treatment to patients suffering from CAH, newborn screening is worldwide performed for the determination of 17-OHP from dried blood spots on filter paper. The non-specificity of antisera employed in immunoassays and the cross-reaction with fetal adrenal hormones produce an overestimation in the 17-OHP quantification. Immunization of mice with 17-OHP-3-(O-carboxymethyl) oxime-bovine serum albumin led to the generation of 15 anti-17-OHP IgG1-and-IgG2b-secreting hybridomas. The 6E2G9 monoclonal antibody presents cross-reactivity values similar to those achieved by rabbit antibodies employed in the solid phase of UMELISA® 17-OH Progesterona Neonatal, assay for the newborn screening of CAH in Cuba. Additionally, the use of 6E2G9 in the evaluation of dried blood spots samples from newborns on filter paper showed a decrease in the mean 17-OHP levels, thus demonstrating it can replace the conventional rabbit antisera.

Influencia de factores perinatales en la pesquisa neonatal de hiperplasia adrenal congénita en Ciudad de La Habana y La Habana / Influence of perinatal factors on the neonatal screening of congenital adrenal hyperplasia in Ciudad de La Habana

Introducción: los costos económicos y psicosociales asociados con los resultados falsos positivos de la pesquisa neonatal de hiperplasia adrenal congénita son altos. Objetivos: identificar los factores perinatales que intervienen en la elevación y en el tiempo de normalización de los valores de 17 hidroxiprogesterona (17OHP), en pacientes no afectados por hiperplasia adrenal congénita. Métodos: se realizó un estudio descriptivo longitudinal retrospectivo en 1 114 pacientes procedentes de Ciudad de La Habana y La Habana, con resultados falsos positivos en la pesquisa, desde enero/2007 hasta junio/2010. Se identificaron las diferencias en la frecuencia de los factores perinatales reconocidos en este grupo con una muestra de población general, y otra integrada por enfermos de hiperplasia adrenal congénita. Resultados: de los pacientes falsos positivos, el 50,7 por ciento pertenecía al sexo masculino y 49,3 por ciento al femenino. El 54,7 por ciento nació por cesárea, y el 82 por ciento no presentó sufrimiento fetal agudo, aquellos con menor edad gestacional y peso al nacer más bajo presentaron niveles medios de 17OHP más elevados. El 68,1 por ciento normalizó la 17OHP al cumplir un mes de vida, independientemente del tipo de parto y de la presencia de sufrimiento fetal agudo; pero la edad gestacional y el peso al nacer tuvieron correlación inversa con la persistencia de su elevación. Predominó el parto eutócico en los neonatos enfermos y normales, y la cesárea en los falsos positivos. La media de la edad gestacional y del peso al nacer fue significativamente menor en los casos en el primer grupo, comparada con la de los grupos restantes. Conclusiones: la prematuridad y el bajo peso al nacer tuvieron una influencia significativa sobre la elevación y la persistencia de los valores de 17OHP, no así el tipo de parto y el sufrimiento fetal agudo(AU)

Introduction: the psychosocial and economic costs associated with the false-positive results of the neonatal screening of congenital adrenal hyperplasia are high. Objectives: to identify the perinatal factors to get involved in the rise and in the normalization time of values of 17 hydroprogesterone (17OHP) in patients not involved by a congenital adrenal hyperplasia. Methods: a retrospective, longitudinal and descriptive study was conducted in 1 114 patients from Ciudad de La Habana and La Habana with false-positive results according to screening from January, 2007 to June, 2010. Authors identified the differences in frequency of perinatal factors recognized in this group with a sample of general population, and other including congenital adrenal hyperplasia patients. Results: from the false-positive patients, the 50,7 percent was of male sex and the 49,3 percent to the female one. The 54,7 percent was born by cesarean section and the 82 percent has not acute fetal suffering, those small for the gestational age and lower birth weight had mean levels of 17OHP higher. The 68,1 percent normalized the OHP at one month of life, independently the type of labor and of the presence of acute fetal suffering but the gestational age and the birth weight had an inverse correlation with the persistence of its rise. There was predominance of eutocia labor in the sick and normal neonates and the cesarean section in the false-positive ones. The mean of gestational age and of the birth weight was significantly minor in the cases of the first group, compared with the remaining groups. Conclusions: the prematurity and the low birth weight had a significant influence on the rise and the persistence of values of 17OHP, but not the type of labor and the acute fetal suffering(AU)

Influencia de factores perinatales en la pesquisa neonatal de hiperplasia adrenal congénita en Ciudad de La Habana y La Habana / Influence of perinatal factors on the neonatal screening of congenital adrenal hyperplasia in Ciudad de La Habana

Introducción: los costos económicos y psicosociales asociados con los resultados falsos positivos de la pesquisa neonatal de hiperplasia adrenal congénita son altos. Objetivos: identificar los factores perinatales que intervienen en la elevación y en el tiempo de normalización de los valores de 17 hidroxiprogesterona (17OHP), en pacientes no afectados por hiperplasia adrenal congénita. Métodos: se realizó un estudio descriptivo longitudinal retrospectivo en 1 114 pacientes procedentes de Ciudad de La Habana y La Habana, con resultados falsos positivos en la pesquisa, desde enero/2007 hasta junio/2010. Se identificaron las diferencias en la frecuencia de los factores perinatales reconocidos en este grupo con una muestra de población general, y otra integrada por enfermos de hiperplasia adrenal congénita. Resultados: de los pacientes falsos positivos, el 50,7 por ciento pertenecía al sexo masculino y 49,3 por ciento al femenino. El 54,7 por ciento nació por cesárea, y el 82 por ciento no presentó sufrimiento fetal agudo, aquellos con menor edad gestacional y peso al nacer más bajo presentaron niveles medios de 17OHP más elevados. El 68,1 por ciento normalizó la 17OHP al cumplir un mes de vida, independientemente del tipo de parto y de la presencia de sufrimiento fetal agudo; pero la edad gestacional y el peso al nacer tuvieron correlación inversa con la persistencia de su elevación. Predominó el parto eutócico en los neonatos enfermos y normales, y la cesárea en los falsos positivos. La media de la edad gestacional y del peso al nacer fue significativamente menor en los casos en el primer grupo, comparada con la de los grupos restantes. Conclusiones: la prematuridad y el bajo peso al nacer tuvieron una influencia significativa sobre la elevación y la persistencia de los valores de 17OHP, no así el tipo de parto y el sufrimiento fetal agudo(AU)

Introduction: the psychosocial and economic costs associated with the false-positive results of the neonatal screening of congenital adrenal hyperplasia are high. Objectives: to identify the perinatal factors to get involved in the rise and in the normalization time of values of 17 hydroprogesterone (17OHP) in patients not involved by a congenital adrenal hyperplasia. Methods: a retrospective, longitudinal and descriptive study was conducted in 1 114 patients from Ciudad de La Habana and La Habana with false-positive results according to screening from January, 2007 to June, 2010. Authors identified the differences in frequency of perinatal factors recognized in this group with a sample of general population, and other including congenital adrenal hyperplasia patients. Results: from the false-positive patients, the 50,7 percent was of male sex and the 49,3 percent to the female one. The 54,7 percent was born by cesarean section and the 82 percent has not acute fetal suffering, those small for the gestational age and lower birth weight had mean levels of 17OHP higher. The 68,1 percent normalized the OHP at one month of life, independently the type of labor and of the presence of acute fetal suffering but the gestational age and the birth weight had an inverse correlation with the persistence of its rise. There was predominance of eutocia labor in the sick and normal neonates and the cesarean section in the false-positive ones. The mean of gestational age and of the birth weight was significantly minor in the cases of the first group, compared with the remaining groups. Conclusions: the prematurity and the low birth weight had a significant influence on the rise and the persistence of values of 17OHP, but not the type of labor and the acute fetal suffering(AU)