Evaluación y experiencia local en la utilización de NAT HCV basado en amplificación por NASBA para el tamizaje de donaciones de sangre / Evaluation and local experience using HCV NAT based on NASBA amplification for screening blood donations

Objetivos: Evaluar un nuevo método de NAT HCV basado en amplificación por NASBA (nucleic acid sequence-based amplification) y presentar los datos de nuestra experiencia en aplicar esta metodología para tamizaje de rutina en banco de sangre. Método: La detección de ARN HCV por NASBA (NASBA-HCV) se realizó con un kit comercial (NucliSens Basic Kit, bioMérieux). Para determinar la sensibilidad por análisis de Probit, se probaron diluciones seriadas de un reactivo de referencia para ARN HCV. La especificidad se evaluó con 100 pooles de plasma normal. El tamizaje de rutina se realizó con pooles conteniendo hasta 48 unidades. Resultados: La sensibilidad de NASBA-HCV fue 95 UI/ml de ARN HCV. El límite de detección calculado para una donación individual en pool de 48 fue 4.560 UI/ml. La especificidad preliminar fue de 98 por ciento. Nuestro laboratorio pudo procesar adecuadamente las muestras para NAT HCV y resolver pooles positivos. No encontramos donaciones NAT HCV positivas/anti-HCV negativas en 27.679 muestras evaluadas. El porcentaje de largadas inválidas y pooles falsos positivos fue de 1,9 y 2.7, respectivamente Conclusiones: El límite de detección de NASBA-HCV para pooles de 48 unidades se encuentra dentro de los lineamientos de sensibilidad recomendados por el centro de referencia Paul Ehrlich Institute. Nuestro laboratorio tuvo la capacidad de implementar NAT HCV y obtener resultados en tiempos adecuados para banco de sangre. El tamizaje por NAT mediante NASBA-HCV es una alternativa viable para mejorar el nivel de seguridad en las transfusiones en nuestro país.

Evaluación y experiencia local en la utilización de NAT HCV basado en amplificación por NASBA para el tamizaje de donaciones de sangre / Evaluation and local experience using HCV NAT based on NASBA amplification for screening blood donations

Objetivos: Evaluar un nuevo método de NAT HCV basado en amplificación por NASBA (nucleic acid sequence-based amplification) y presentar los datos de nuestra experiencia en aplicar esta metodología para tamizaje de rutina en banco de sangre. Método: La detección de ARN HCV por NASBA (NASBA-HCV) se realizó con un kit comercial (NucliSens Basic Kit, bioMérieux). Para determinar la sensibilidad por análisis de Probit, se probaron diluciones seriadas de un reactivo de referencia para ARN HCV. La especificidad se evaluó con 100 pooles de plasma normal. El tamizaje de rutina se realizó con pooles conteniendo hasta 48 unidades. Resultados: La sensibilidad de NASBA-HCV fue 95 UI/ml de ARN HCV. El límite de detección calculado para una donación individual en pool de 48 fue 4.560 UI/ml. La especificidad preliminar fue de 98 por ciento. Nuestro laboratorio pudo procesar adecuadamente las muestras para NAT HCV y resolver pooles positivos. No encontramos donaciones NAT HCV positivas/anti-HCV negativas en 27.679 muestras evaluadas. El porcentaje de largadas inválidas y pooles falsos positivos fue de 1,9 y 2.7, respectivamente Conclusiones: El límite de detección de NASBA-HCV para pooles de 48 unidades se encuentra dentro de los lineamientos de sensibilidad recomendados por el centro de referencia Paul Ehrlich Institute. Nuestro laboratorio tuvo la capacidad de implementar NAT HCV y obtener resultados en tiempos adecuados para banco de sangre. El tamizaje por NAT mediante NASBA-HCV es una alternativa viable para mejorar el nivel de seguridad en las transfusiones en nuestro país. (AU)

Evaluation of a new NASBA assay for the qualitative detection of hepatitis C virus based on the NucliSens Basic Kit reagents.

BACKGROUND: Direct detection of HCV RNA by nucleic acid amplification methods is an essential tool in the diagnosis of HCV infections. In-house developed methods based on reverse transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR) are widely used but they are laborious and usually lack the standardization required by clinical laboratories. OBJECTIVES: To evaluate the sensitivity and the clinical performance of an HCV specific nucleic acid sequence based amplification (NASBA) assay based on the commercially available, NucliSens Basic Kit (bioMérieux) reagents. STUDY DESIGN: The analytical sensitivity of the Basic Kit-based HCV assay (BK-HCV) was determined using dilutions of the First World Health Organization International Standard for HCV RNA. The performance of the BK-HCV was evaluated at two study sites in comparison with in-house RT-nested PCR (RT-nPCR) by testing a total of 77 plasma specimens. Additional HCV laboratory tests such as Amplicor HCV v2.0 (Roche Diagnostics) and genotype were also included in the comparative analysis. RESULTS: The sensitivity of the BK-HCV was 100-150 IU/ml HCV RNA (85-100% hit rate). When evaluating the clinical performance, we found 96-100% correlation between BK-HCV and RT-nPCR, and 85-91% correlation between BK-HCV and Amplicor. The level of efficiency of the BK-HCV for detecting prevalent HCV genotypes was equal to in house RT-nPCR and Amplicor. CONCLUSIONS: The BK-HCV offers adequate sensitivity for diagnostic purposes and equivalent clinical performance to in-house RT-nPCR assays. The BK-HCV could become a suitable alternative to the in-house amplification methods, providing standardized reagents and procedures, plus rapid results to clinical laboratories.