Effect of respiratory inhibitors and quinone analogues on the aerobic electron transport system of Eikenella corrodens.

The effects of respiratory inhibitors, quinone analogues and artificial substrates on the membrane-bound electron transport system of the fastidious ß-proteobacterium Eikenella corrodens grown under O2-limited conditions were studied. NADH respiration in isolated membrane particles were partially inhibited by rotenone, dicoumarol, quinacrine, flavone, and capsaicin. A similar response was obtained when succinate oxidation was performed in the presence of thenoyltrifluoroacetone and N,N'-dicyclohexylcarbodiimide. NADH respiration was resistant to site II inhibitors and cyanide, indicating that a percentage of the electrons transported can reach O2 without the bc1 complex. Succinate respiration was sensitive to myxothiazol, antimycin A and 2-heptyl-4-hydroxyquinoline-N-oxide (HQNO). Juglone, plumbagin and menadione had higher reactivity with NADH dehydrogenase. The membrane particles showed the highest oxidase activities with ascorbate-TCHQ (tetrachlorohydroquinone), TCHQ alone, and NADH-TMPD (N,N,N',N'-tetramethyl-p-phenylenediamine), and minor activity levels with ascorbate-DCPIP (2,6-dichloro-phenolindophenol) and NADH-DCPIP. The substrates NADH-DCPIP, NADH-TMPD and TCHQ were electron donors to cyanide-sensitive cbb' cytochrome c oxidase. The presence of dissimilatory nitrate reductase in the aerobic respiratory system of E. corrodens ATCC 23834 was demonstrated by first time. Our results indicate that complexes I and II have resistance to their classic inhibitors, that the oxidation of NADH is stimulated by juglone, plumbagin and menadione, and that sensitivity to KCN is stimulated by the substrates TCHQ, NADH-DCPIP and NADH-TMPD.

Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas / Polimerase chain reaction technique for detecting Salmonella sp. in powdered milk: optimization of the method in 12 hours

Los métodos tradicionales para identificar Salmonella sp. se basan en el empleo de medios de cultivo que permiten la recuperación del microorganismo, el aislamiento en medios selectivos, la identificación bioquímica y caracterización serológica. Estos métodos son dispendiosos, tienen baja especificidad, baja sensibilidad y consumen mucho tiempo. El principal objetivo de este trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR para detectar Salmonella sp. en 12 horas, a partir de ADN de cultivos puros y en muestras de leche en polvo, inoculadas intencionalmente con 200, 20 y 2 UFC/mL. Para la extracción del ADN se estudió la conveniencia de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico y Chelex® 100. La temperatura de hibridización y las concentraciones de cloruro de magnesio, empleando un diseño factorial incompleto 6x7, permitieron establecer un límite de detección de hasta 10 pg de ADN en cultivos puros de Salmonella typhi. La PCR se basó en la exclusividad de los oligonucleótidos 139-141, los cuales amplificaron una banda de 284 pb para la identificación de género. Los resultados muestran que: (I) la adición de Novobiacina (45 mg/L) o de verde brillante (10 mg/L) como inhibidores de flora acompañante, después de las primeras tres horas del pre-enriquecimiento no selectivo de 6 horas, no influye significativamente en la recuperación de las células bacterianas; (II) obtener biomasa de la primera dilución en base 10 y emplear la técnica de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico para la obtención de ADN, se pueden detectar 2 UFC/mL de Salmonella sp. en leche en polvo y que el tiempo de detección se reduce considerablemente...

The traditional methods to identify Salmonella sp. are based on the culture medium use that allows the recovery of the micro organism, isolation in selective media, biochemical and serologic characterization. These methods are tedious, have a low specificity and sensitivity and they generally consume a long time. The main objective of this study was to standardize and to optimize the PCR technique to detect Salmonella sp. in 12 hours, from DNA of pure cultures and from powdered milk samples, intentionally inoculated with 200, 20 and 2 CFU/mL. For the extraction of DNA, two methods were used: phenol:chloroform:isoamyl alcohol and chelex® 100. The optimization of the temperature of hibridización and the concentrations of Magnesium Chloride, using an incomplete factorial desing 6x7 allowed to establish a detection limit of up to 10 pg of DNA from pure cultures of Salmonella typhi. The PCR was based on the specificity of oligonucleotidos the 139-141, that amplified a band of 284 pb for the gender identification. The results show that: (I) the inhibitor addition of accompanying flora like Novobiocin (45 mg/L) or brilliant green (10 mg/L) as inhibitors of accompanying flora, after the first three hours in the nonselective pre-enrichment of 6 hours, does not significantly influence in the recovery of the bacterial cells, (II) when obtaining biomass of the first dilution in base 10 and using the phenol:chloroform:isoamyl alcohol technique for the extraction of DNA; can be detected 2 CFU/mL Salmonella s.p. from powdered milk and that the PCR technique reduces the time of test considerably...

Flúor contenido en la sal para consumo humano distribuida en la ciudad de México / Fluoride content of table salt in Mexico City

El objetivo de este estudio fue medir el contenido de flúor de una muestra de bolsas de sal a la venta en la ciudad de México, con objeto de estimar la proporción de sal comercializada que contiene la cantidad de flúor fijada por el Programa Nacional de Prevención de la Caries Dental Mediante el Consumo de Sal de Mesa Fluorada. Nunca se había evaluado la efectividad de este programa. En marzo de 1993, se adquirieron bolsas de sal en tiendas lozalizadas en 70 de las 3544 colonias que integran la ciudad de México. La selección se realizó por muestreo aleatorio simple. Asimismo, se compro sal en 20 por ciento de los 146 supermercados y tiendas de autoservicio de la ciudad, previamente seleccionados por muestreo aleatorio simple. A continuación, se midió a ciegas la cantidad de flúor presente en 221 bolsas de sal seleccionadas. El contenido real de este elemento se encontró frecuentemente por debajo de la cantidad señalada por la norma gubernamental. Además, la cantidad de flúor medida no coincidió con la anunciada en la etiqueta de las bolsas estudiadas, en contra de lo que estipula la ley

Flúor contenido en la sal para consumo humano distribuida en la ciudad de México / Fluoride content of table salt in Mexico City

El objetivo de este estudio fue medir el contenido de flúor de una muestra de bolsas de sal a la venta en la ciudad de México, con objeto de estimar la proporción de sal comercializada que contiene la cantidad de flúor fijada por el Programa Nacional de Prevención de la Caries Dental Mediante el Consumo de Sal de Mesa Fluorada. Nunca se había evaluado la efectividad de este programa. En marzo de 1993, se adquirieron bolsas de sal en tiendas lozalizadas en 70 de las 3544 colonias que integran la ciudad de México. La selección se realizó por muestreo aleatorio simple. Asimismo, se compro sal en 20 por ciento de los 146 supermercados y tiendas de autoservicio de la ciudad, previamente seleccionados por muestreo aleatorio simple. A continuación, se midió a ciegas la cantidad de flúor presente en 221 bolsas de sal seleccionadas. El contenido real de este elemento se encontró frecuentemente por debajo de la cantidad señalada por la norma gubernamental. Además, la cantidad de flúor medida no coincidió con la anunciada en la etiqueta de las bolsas estudiadas, en contra de lo que estipula la ley