ABSTRACT
Las altas concentraciones séricas de Lp(a), una lipoproteína similar a la lipoproteína de baja densidad (LDL), se asocian a afecciones coronarias, cerebrovasculares y periféricas derivadas de la ateroesclerosis. A esta lipoproteína se le atribuyen propiedades trombogénicas y efectos inhibitorios sobre los mecanismos fibrinolíticos. Diferentes métodos han sido utilizados para la cuantificación sérica de la Lp(a), dentro de estos se destacan los métodos inmunoenzimáticos (ELISA). En este trabajo se describe el proceso de obtención, purificación y caracterización de uno de los reactivos biológicos necesarios para el montaje de un sistema inmunoenzimático ELISA que cuantifique Lp(a) en suero humano. Este reactivo es un suero policlonal hiperinmune como fuente de IgG policlonal de conejo anti-Lp(a) humana. Utilizando Lp(a) humana comercial, se inmunizaron dos conejos hembras según esquema de inmunización propuesto, se lograrontítulos de anticuerpos anti-Lp(a) humana en los dos animales. Con la utilización de métodos no cromatográficos (precipitación por salado) y métodos cromatográficos (Gel filtración e intercambio iónico)se purificó la IgG policlonal de conejo anti-Lp(a) humana. A esta IgG purificada se le determinó el grado depureza (SDS-PAGE) y la actividad biológica (inmunodifusión doble). La biomolécula purificada mostró el grado de pureza necesario para los fines en que será utilizada, así como reconoció el antígeno empleado en lainmunización(AU)
Subject(s)
Humans , Immunoglobulin G/isolation & purification , Lipoprotein(a) , Immunization , Immune Sera , Immunodiffusion , Electrophoresis, Polyacrylamide GelABSTRACT
Las altas concentraciones séricas de Lp(a), una lipoproteína similar a la lipoproteína de baja densidad (LDL), se asocian a afecciones coronarias, cerebrovasculares y periféricas derivadas de la ateroesclerosis. A esta lipoproteína se le atribuyen propiedades trombogénicas y efectos inhibitorios sobre los mecanismos fibrinolíticos. Diferentes métodos han sido utilizados para la cuantificación sérica de la Lp(a), dentro de estos se destacan los métodos inmunoenzimáticos (ELISA). En este trabajo se describe el proceso de obtención, purificación y caracterización de uno de los reactivos biológicos necesarios para el montaje de un sistema inmunoenzimático ELISA que cuantifique Lp(a) en suero humano. Este reactivo es un suero policlonal hiperinmune como fuente de IgG policlonal de conejo anti-Lp(a) humana. Utilizando Lp(a) humana comercial, se inmunizaron dos conejos hembras según esquema de inmunización propuesto, se lograrontítulos de anticuerpos anti-Lp(a) humana en los dos animales. Con la utilización de métodos no cromatográficos (precipitación por salado) y métodos cromatográficos (Gel filtración e intercambio iónico)se purificó la IgG policlonal de conejo anti-Lp(a) humana. A esta IgG purificada se le determinó el grado depureza (SDS-PAGE) y la actividad biológica (inmunodifusión doble). La biomolécula purificada mostró el grado de pureza necesario para los fines en que será utilizada, así como reconoció el antígeno empleado en lainmunización
Subject(s)
Humans , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Immune Sera , Immunization , Immunodiffusion , Immunoglobulin G , Lipoprotein(a)ABSTRACT
La lipoproteína (a) es considerada un factor de riesgo cardiovascular. Elevadas concentraciones en sangre de esta lipoproteína están asociadas con un incremento de la incidencia y severidad de la ateroesclerosis. La evaluación del riesgo cardiovascular relacionada con la Lp(a) se realiza sobre la base de las concentraciones plasmáticas de dicha lipoproteína. Las concentraciones séricas de esta lipoproteína se miden a través de diferentes métodos, pero los ensayos inmunoenzimáticos ELISA son los de mayor aplicación en esta finalidad. En nuestra investigación se describe el diseño y la validación de un sistema ELISA indirecto tipo sándwich que utiliza anticuerpos poligonales anti-Lp(a) humana. La validación del sistema se realizó según los parámetros propuestos por el Europeun Committee for Clinical Laboratory Standard y se aplicaron los siguientes parámetros: curva de calibración, imprecisión (within-rum y between-rum), sensibilidad, especificidad y determinación de Lp(a) en suero de pacientes
Subject(s)
Humans , Drug Design , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , LipoproteinsABSTRACT
La lipoproteína (a) es considerada un factor de riesgo cardiovascular. Elevadas concentraciones en sangre de esta lipoproteína están asociadas con un incremento de la incidencia y severidad de la ateroesclerosis. La evaluación del riesgo cardiovascular relacionada con la Lp(a) se realiza sobre la base de las concentraciones plasmáticas de dicha lipoproteína. Las concentraciones séricas de esta lipoproteína se miden a través de diferentes métodos, pero los ensayos inmunoenzimáticos ELISA son los de mayor aplicación en esta finalidad. En nuestra investigación se describe el diseño y la validación de un sistema ELISA indirecto tipo sándwich que utiliza anticuerpos poligonales anti-Lp(a) humana. La validación del sistema se realizó según los parámetros propuestos por el Europeun Committee for Clinical Laboratory Standard y se aplicaron los siguientes parámetros: curva de calibración, imprecisión (within-rum y between-rum), sensibilidad, especificidad y determinación de Lp(a) en suero de pacientes(AU)
