Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Paracoccidioides brasiliensis.

Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis, an important mycosis endemic to Latin America. As the tools to study gene function in P. brasiliensis are only in the early stage of development, there is presently no system that allows for both the delivery and integration of exogenous nucleic acids into its genome. We report in this paper the transformation of the yeast phase of P. brasiliensis (ATCC-60855) with Agrobacterium tumefaciens (GV3101) carrying the vector pAD1625. The microorganisms were co-cultivated for 2 days and then incubated for 10 days at 35 degrees C on selective media. PCR and dot-blot targeted at a fragment of 222 bp from the hph (hygromycin phosphotransferase) gene which confers Hygr confirmed the transformation of P. brasiliensis.

Evaluación del serodiagnóstico en el absceso hepático amebiano / Serodiagnostic evaluation for amebic liver abscess

El presente estudio fue diseñado para evaluar la eficacia del diagnóstico serológico del absceso hepático amibiano (AHA). Se utilizó una prueba de Elisa para la detección en suero de IgG específica, utilizando una fase sólida con una alta capacidad de adherencia. Se estudiaron 147 personas; 22 pacientes con sospecha clínica y ultrasonográfica de AH, 30 individuos completamente sanos, 9 portadores asintomáticos de E. histolytica, 35 con colitis amibiana pasada, 35 con otras parasitosis intestinales, 9 con otras patologías hepáticas y 6 con colitis amebiana presente. El rendimiento global de la prueba fue analizado por medio de las curvas del receptor-operador y del área bajo la curva. Se determinó que existe una diferencia significativa en la densidad óptica (DO) de los siete grupos estudiados (Kruskal-Wallis entre todos los grupos: p=0,0001); esta diferencia no existe cuando, al comparar, se elimina el grupo 1 del análisis (Kruskal-Wallis exceptuando el grupo 1: p=0,8203). El área bajo la curva ROC fue igual a 0,9941, dato muy cercano al ideal que es 1. Se recomienda la utilización de esta fase sólida teniendo en cuenta la importancia de la fase de bloqueo con albúmina de huevo. Se determinó que, a pesar de estar en una zona donde el diagnóstico de amebiasis es frecuente, las infecciones intestinales por esta ameba no presentan niveles detectables de IgG específica contra E. histolytica por esta prueba. Sin embargo, es importante ampliar la cantidad de personas estudiadas en estos grupos, principalmente, en el grupo de pacientes con otras patologías hepáticas puesto que este grupo incluye las entidades clínicas con las que realmente se debe hacer diagnóstico diferencial de (AHA) (absceso hepático piógeno (AHP), principalmente) para poder realizar la última fase de la evaluación. El estudio de este grupo nos ayudaría a obtener valores reales de sensibilidad, especificidad y valores predictivos y nos darían una estimación real de la capacidad discriminatoria de la prueba para obtener el verdadero valor del área bajo la curva y no el casi ideal que informamos aquí