GENOTOXICITY AND CYTOTOXICITY OF X-RAYS IN CHILDREN EXPOSED TO PANORAMIC RADIOGRAPHY. / GENOTOXICIDADE E CITOTOXICIDADE DOS RAIOS X EM CRIANÇAS SUBMETIDAS À RADIOGRAFIA PANORÂMICA.

OBJECTIVE: To assess the genotoxicity and cytotoxicity produced by X-rays in the epithelium of the oral mucosa of infants exposed to panoramic radiography. METHODS: The sample consisted of 30 healthy children, 19 females and 11 males, ranging in age from 4 to 10 years (average of 7 years of age). Oral mucosa cells were collected by liquid-based cytology immediately before and after seven days following the exposure to panoramic radiography. Smears were processed and stained using the modified Feulgen Rossenbeck technique. Bud and broken egg nuclear projections, changes in the form of micronuclei, and genotoxic and cytotoxic changes of pyknosis, karyorrhexis and karyolysis were analyzed and quantified. RESULTS: The frequency of pyknosis, buds and broken eggs was significantly higher after exposure to X-rays (p<0.05), but there was no statistically significant difference regarding gender, as well as in the other changes studied. CONCLUSIONS: Exposure to X-rays emitted during submission to panoramic radiography may induce cell death in the epithelium of children's oral mucosa. No evidence was found for a significant genotoxic effect.

OBJETIVO: Analisar a genotoxicidade e a citotoxicidade produzidas por raios X no epitélio da mucosa oral de crianças durante a obtenção da radiografia panorâmica. MÉTODOS: A amostra foi constituída por 30 crianças saudáveis, sendo 19 do sexo feminino e 11 do masculino, com faixa etária de 4 a 10 anos (média de 7 anos de idade). As células epiteliais da mucosa oral foram coletadas por meio de citologia esfoliativa em base líquida imediatamente antes e após sete dias da obtenção da radiografia panorâmica. Os esfregaços foram processados e corados utilizando a técnica de Feulgen Rossenbeck modificada. Foram analisadas e quantificadas projeções nucleares dos tipos bud e broken egg, alterações genotóxicas na forma de micronúcleo e alterações citotóxicas dos tipos picnose, cariólise e cariorrexe. RESULTADOS: A frequência de picnose, bud e broken egg foi significativamente maior após a exposição aos raios X (p<0,05), porém não houve diferença estatisticamente significante em relação ao sexo, bem como nas demais alterações estudadas. CONCLUSÕES: A exposição aos raios X emitidos durante a obtenção da radiografia panorâmica pode induzir à morte celular no epitélio da mucosa oral de crianças. Não foi encontrado indício significativo de efeito genotóxico.

Genotoxicidade e citotoxicidade dos raios x em crianças submetidas à radiografia panorâmica / Genotoxicity and cytotoxicity of x-rays in children exposed to panoramic radiography

RESUMO Objetivo: Analisar a genotoxicidade e a citotoxicidade produzidas por raios X no epitélio da mucosa oral de crianças durante a obtenção da radiografia panorâmica. Métodos: A amostra foi constituída por 30 crianças saudáveis, sendo 19 do sexo feminino e 11 do masculino, com faixa etária de 4 a 10 anos (média de 7 anos de idade). As células epiteliais da mucosa oral foram coletadas por meio de citologia esfoliativa em base líquida imediatamente antes e após sete dias da obtenção da radiografia panorâmica. Os esfregaços foram processados e corados utilizando a técnica de Feulgen Rossenbeck modificada. Foram analisadas e quantificadas projeções nucleares dos tipos bud e broken egg, alterações genotóxicas na forma de micronúcleo e alterações citotóxicas dos tipos picnose, cariólise e cariorrexe. Resultados: A frequência de picnose, bud e broken egg foi significativamente maior após a exposição aos raios X (p<0,05), porém não houve diferença estatisticamente significante em relação ao sexo, bem como nas demais alterações estudadas. Conclusões: A exposição aos raios X emitidos durante a obtenção da radiografia panorâmica pode induzir à morte celular no epitélio da mucosa oral de crianças. Não foi encontrado indício significativo de efeito genotóxico.

ABSTRACT Objective: To assess the genotoxicity and cytotoxicity produced by X-rays in the epithelium of the oral mucosa of infants exposed to panoramic radiography. Methods: The sample consisted of 30 healthy children, 19 females and 11 males, ranging in age from 4 to 10 years (average of 7 years of age). Oral mucosa cells were collected by liquid-based cytology immediately before and after seven days following the exposure to panoramic radiography. Smears were processed and stained using the modified Feulgen Rossenbeck technique. Bud and broken egg nuclear projections, changes in the form of micronuclei, and genotoxic and cytotoxic changes of pyknosis, karyorrhexis and karyolysis were analyzed and quantified. Results: The frequency of pyknosis, buds and broken eggs was significantly higher after exposure to X-rays (p<0.05), but there was no statistically significant difference regarding gender, as well as in the other changes studied. Conclusions: Exposure to X-rays emitted during submission to panoramic radiography may induce cell death in the epithelium of children's oral mucosa. No evidence was found for a significant genotoxic effect.

Erythrocyte oxidative stress markers in children with sickle cell disease / Marcadores de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças com doença falciforme

Abstract Objective To determine eight parameters of oxidative stress markers in erythrocytes from children with sickle cell disease and compare with the same parameters in erythrocytes from healthy children, since oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of sickle cell disease and because this disease is a serious public health problem in many countries. Methods Blood samples were obtained from 45 children with sickle cell disease (21 males and 24 females with a mean age of 9 years; range: 3–13 years) and 280 blood samples were obtained from children without hemoglobinopathies (137 males and 143 females with a mean age of 10 years; range: 8–11 years), as a control group. All blood samples were analyzed for methemoglobin, reduced glutathione, thiobarbituric acid reactive substances, percentage of hemolysis, reactive oxygen species, and activity of the enzymes glucose 6-phosphate dehydrogenase, superoxide dismutase, and catalase. Data were analyzed using Student's t-test and were expressed as the mean ± standard deviation. A p-value of <0.05 was considered significant. Results Significant differences were observed between children with sickle cell disease and the control group for the parameters methemoglobin, thiobarbituric acid reactive substances, hemolysis, glucose 6-phosphate dehydrogenase activity, and reactive oxygen species, with higher levels in the patients than in the controls. Conclusions Oxidative stress parameters in children's erythrocytes were determined using simple laboratory methods with small volumes of blood; these biomarkers can be useful to evaluate disease progression and outcomes in patients.

Resumo Objetivo Determinar parâmetros de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças com doença falciforme e compará-los com os mesmos parâmetros em eritrócitos de crianças saudáveis, pois o estresse oxidativo desempenha um importante papel na fisiopatologia da doença falciforme, considerada um sério problema de saúde pública em muitos países. Métodos Foram obtidas amostras de sangue de 45 crianças com doença falciforme (21 meninos e 24 meninas com média de 9 anos, variação de 3 a 13) e 280 amostras de sangue de crianças sem hemoglobinopatias (137 meninos e 143 meninas com média de 10 anos, variação de 8 a 11), como grupo controle. Em todas as amostras foram determinados meta-hemoglobina, glutationa reduzida, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade das enzimas glucose6-fosfato desidrogenase, superóxido dismutase e catalase. Os dados foram analisados com o teste t de Student e foram expressos como média ± desvio padrão. Um valor de p < 0,05 foi considerado significativo. Resultados Foram observadas diferenças significativas entre as crianças com doença falciforme e o grupo controle para os parâmetros meta-hemoglobina, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade da enzima glucose6-fosfato desidrogenase, com níveis aumentados nos pacientes. Conclusões Foi possível determinar parâmetros de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças, com técnicas laboratoriais simples e pequenos volumes de sangue. Esses biomarcadores podem ser úteis na avaliação da progressão e dos resultados de tratamentos da doença.

Erythrocyte oxidative stress markers in children with sickle cell disease.

OBJECTIVE: To determine eight parameters of oxidative stress markers in erythrocytes from children with sickle cell disease and compare with the same parameters in erythrocytes from healthy children, since oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of sickle cell disease and because this disease is a serious public health problem in many countries. METHODS: Blood samples were obtained from 45 children with sickle cell disease (21 males and 24 females with a mean age of 9 years; range: 3-13 years) and 280 blood samples were obtained from children without hemoglobinopathies (137 males and 143 females with a mean age of 10 years; range: 8-11 years), as a control group. All blood samples were analyzed for methemoglobin, reduced glutathione, thiobarbituric acid reactive substances, percentage of hemolysis, reactive oxygen species, and activity of the enzymes glucose 6-phosphate dehydrogenase, superoxide dismutase, and catalase. Data were analyzed using Student's t-test and were expressed as the mean±standard deviation. A p-value of <0.05 was considered significant. RESULTS: Significant differences were observed between children with sickle cell disease and the control group for the parameters methemoglobin, thiobarbituric acid reactive substances, hemolysis, glucose 6-phosphate dehydrogenase activity, and reactive oxygen species, with higher levels in the patients than in the controls. CONCLUSIONS: Oxidative stress parameters in children's erythrocytes were determined using simple laboratory methods with small volumes of blood; these biomarkers can be useful to evaluate disease progression and outcomes in patients.

Diagnóstico do câncer anal na coinfecção pelo papiloma vírus humano (HPV) e pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) / Anal cancer diagnosis in patients with human papillomavirus (HPV) and human immunodeficiency virus (HIV) coinfection

O câncer anal é raro, porém certas populações apresentam risco aumentado para o seu desenvolvimento, sendo o terceiro tumor maligno mais comum entre os portadores do HIV. Diferentemente da maioria das malignidades que acometem estes indivíduos, o câncer anal pode ser prevenido. O sucesso da triagem de câncer do colo do útero para a diminuição de sua incidência tem conduzido à sua utilização como critério para efetuar o seguimento do câncer anal. Entretanto, este protocolo tem sido mais empregado na pesquisa, e em apenas algumas exceções. Neste estudo é realizada a revisão sobre o câncer anal, seus fatores de risco e diagnóstico, com o objetivo de alertar a comunidade científica e os profissionais de saúde quanto à importância de efetuar seu rastreamento e acompanhamento, bem como das suas lesões precursoras em indivíduos portadores de HIV/AIDS.

Anal cancer is rare, but certain populations are at increased risk for this type of tumor, beingthe third most commonly reported malignancy among HIV positive individuals. Unlike themajority of malignancies occurring in this population, the anal cancer can be prevented. The successof cervical cancer screening in reducing its incidence has led to point this strategy as a criterionfor performing the anal cancer screening. However, this protocol has been used mostly and widelyfor conducting the scientific researches, with a few exceptions only. This study reviews the topicson anal cancer, its risk factors and its diagnosis, in order to alert the scientific community andthe health professionals about the importance of anal cancer screening and its monitoring inHIV infected patients.

Protective effect of flavonoids against reactive oxygen species production in sickle cell anemia patients treated with hydroxyurea.

OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the protective effects of quercetin, rutin, hesperidin and myricetin against reactive oxygen species production with the oxidizing action of tert-butylhydroperoxide in erythrocytes from normal subjects and sickle cell anemia carriers treated with hydroxyurea. METHODS: Detection of intracellular reactive oxygen species was carried out using a liposoluble probe, 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA). A 10% erythrocyte suspension was incubated with flavonoids (quercetin, rutin, hesperidin or myricetin; 30, 50, and 100 µmol/L), and then incubated with tert-butylhydroperoxide (75 µmol/L). Untreated samples were used as controls. RESULTS: Red blood cell exposure to tert-butylhydroperoxide resulted in significant increases in the generation of intracellular reactive oxygen species compared to basal levels. Reactive oxygen species production was significantly inhibited when red blood cells were pre-incubated with flavonoids, both in normal individuals and in patients with sickle cell anemia. Quercetin and rutin had the highest antioxidant activity, followed by myricetin and hesperidin. CONCLUSION: Flavonoids, in particular quercetin and rutin, showed better antioxidant effects against damage caused by excess reactive oxygen species characteristic of sickle cell anemia. Results obtained with patients under treatment with hydroxyurea suggest an additional protective effect when associated with the use of flavonoids.

Protective effect of flavonoids against reactive oxygen species production in sickle cell anemia patients treated with hydroxyurea

OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the protective effects of quercetin, rutin, hesperidin and myricetin against reactive oxygen species production with the oxidizing action of tert-butylhydroperoxide in erythrocytes from normal subjects and sickle cell anemia carriers treated with hydroxyurea. METHODS: Detection of intracellular reactive oxygen species was carried out using a liposoluble probe, 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA). A 10% erythrocyte suspension was incubated with flavonoids (quercetin, rutin, hesperidin or myricetin; 30, 50, and 100 µmol/L), and then incubated withtert-butylhydroperoxide (75 µmol/L). Untreated samples were used as controls. RESULTS: Red blood cell exposure to tert-butylhydroperoxide resulted in significant increases in the generation of intracellular reactive oxygen species compared to basal levels. Reactive oxygen species production was significantly inhibited when red blood cells were pre-incubated with flavonoids, both in normal individuals and in patients with sickle cell anemia. Quercetin and rutin had the highest antioxidant activity, followed by myricetin and hesperidin. CONCLUSION: Flavonoids, in particular quercetin and rutin, showed better antioxidant effects against damage caused by excess reactive oxygen species characteristic of sickle cell anemia. Results obtained with patients under treatment with hydroxyurea suggest an additional protective effect when associated with the use of flavonoids.

Ginkgo biloba extract (EGb 761) attenuates oxidative stress induction in erythrocytes of sickle cell disease patients

Sickle cell disease promotes hemolytic anemia and occlusion of small blood vessels due to the presence of high concentrations of hemoglobin S, resulting in increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defense capacity. The aim of this study was to evaluate the protective action of a standardized extract of Ginkgo biloba (EGb 761), selected due to its high content of flavonoids and terpenoids, in erythrocytes of patients with sickle cell anemia (HbSS, SS erythrocytes) subjected to oxidative stress using tert-butylhydroperoxide or 2,2-azobis-(amidinepropane)-dihydrochloride, in vitro. Hemolysis indexes, reduced glutathione, methemoglobin concentrations, lipid peroxidation, and intracellular reactive oxygen species were determined. SS erythrocytes displayed increased rates of oxidation of hemoglobin and membrane lipid peroxidation compared to normal erythrocytes (HbAA, AA erythrocytes), and the concentration of EGb 761 necessary to achieve the same antioxidant effect in SS erythrocytes was at least two times higher than in normal ones, inhibiting the formation of intracellular reactive oxygen species (IC50 of 13.6 µg/mL), partially preventing lipid peroxidation (IC50 of 242.5 µg/mL) and preventing hemolysis (IC50 of 10.5 µg/mL). Thus, EGb 761 has a beneficial effect on the oxidative status of SS erythrocytes. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of hemoglobin and reduced glutathione at the concentrations examined.

A doença falciforme promove anemia hemolítica e oclusão dos pequenos vasos, causados pela presença de altas concentrações de hemoglobina S, cujas consequências incluem a produção aumentada de espécies reativas de oxigênio e diminuição da capacidade de defesa antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação protetora de um extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761), selecionado devido ao seu alto conteúdo de flavonóides e terpenóides, em eritrócitos de pacientes com anemia falciforme (HbSS, eritrócitos SS) submetidos ao estresse oxidativo usando terc-butil-hidroperóxido e 2,2-azobis-(amidinopropano)-diidrocloreto, in vitro. Índices de hemólise, glutationa reduzida, concentração de metemoglobina, peroxidação lipídica e espécies reativas de oxigênio foram determinados. Eritrócitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram taxas aumentadas de oxidação da hemoglobina e peroxidação lipídica e a concentração de EGb 761 necessária para atingir o mesmo efeito antioxidante foi pelo menos duas vezes maior em relação aos eritrócitos normais (HbAA, eritrócitos AA), inibindo a formação de espécies reativas de oxigênio (IC50 de 13.6 µg/mL), prevenindo parcialmente a peroxidação lipídica (IC50 de 242.5 µg/mL) e prevenindo a hemólise (IC50 de 10.5 µg/mL). Portanto, EGb 761 possui um efeito benéfico no estado oxidativo dos eritrócitos SS. Entretanto, o EGb 761 não preveniu a oxidação da hemoglobina e da glutationa reduzida, nas concentrações examinadas.

Manual and automated reticulocyte counts.

Manual reticulocyte counts were examined under light microscopy, using the property whereby supravital stain precipitates residual ribosomal RNA versus the automated flow methods, with the suggestion that in the latter there is greater precision and an ability to determine both mature and immature reticulocyte fractions. Three hundred and forty-one venous blood samples of patients were analyzed of whom 224 newborn and the rest adults; 51 males and 66 females, with ages between 0 and 89 years, as part of the laboratory routine for hematological examinations at the Clinical Laboratory of the Hospital Universitário do Oeste do Paraná. This work aimed to compare manual and automated methodologies for reticulocyte countings and evaluate random and systematic errors. The results obtained showed that the difference between the two methods was very small, with an estimated 0·4% systematic error and 3·9% random error. Thus, it has been confirmed that both methods, when well conducted, can reflect precisely the reticulocyte counts for adequate clinical use.

Effect of vitamin C, deferoxamine, quercetin and rutin against tert-butyl hydroperoxide oxidative damage in human erythrocytes.

The mature human erythrocyte, when submitted to oxidative stress, can demonstrate depletion of reduced glutathione, oxidation of the hemoglobin molecule and aggregation of complexes of iron close to the membrane. These can produce abnormalities in the erythrocyte membrane and hemolysis. The aim of this work was to study the antioxidative action of vitamin C (vit. C), deferroxamine (DFO) and the flavonoids quercetin and rutin in normal human erythrocytes, submitted to in vitro oxidative stress induced by tert-butylhydroperoxide ((t)BHP). Venous blood was collected in citrate-phosphate-dextrose (CPD) solution, as anticoagulant, from healthy adult individuals after informed consent. The erythrocytes were resuspended in PBS to obtain 35% globular volume, and then submitted to the oxidative action of (t)BHP for up to 30 min, with or without previous incubation for 60 min with vit. C, DFO, quercetin and rutin. Decrease in the GSH concentration, G6-PD and GR activities, and increase in the methemoglobin and Heinz bodies (HB) formation, occurred with the increase in (t)BHP concentration. (t)BHP did not effect on the membrane proteins detected by SDS-PAGE. Quercetin, partially prevented the GSH decrease and the formation of HB, but did not prevent MetHb formation from oxidative damage by (t)BHP. Rutin, after (t)BHP induction, prevented the GSH decrease and the formation of HB. Vit. C, had no influence on the depletion of GSH, inhibited partially the metHb formation, and it protected GR, but not G6-PD from oxidative damage by (t)BHP. DFO partially inhibited the metHb formation and GSH decrease, but it did not protect GR and G6-PD from oxidative damage by (t)BHP. The results obtained suggest that vit. C, DFO and the flavonoids quercetin and rutin contribute to the decrease in the oxidative stress caused by (t)BHP.

Oxidative process in erythrocytes of individuals with hemoglobin S.

The understanding of the oxidative stress mechanisms helps to explain many of the processes of cellular lesion and death, especially those related to the hemolytic diseases. Sickle cell anemia, thalassemias and G6-PD deficiency are among the more frequent genetic anomalies accompanied by oxidative stress. In the sickle cells, one of the factors that predisposes to the hemolytic process is the oxidative degradation of the hemoglobin S due to its deoxigenation leading to hemichrome formation and precipitation as Heinz bodies. The oxidative stress contributes to the sickle process and shortening of the erythrocyte survival. Here we analyzed the oxidative process in erythrocytes of patients with two different genotypes for HbS (AS and SS). Units of blood from donors of the Center of Hematology and Hemotherapy of Paraná (HEMEPAR), from normal individuals (AA) and from heterozygote individuals (AS), and venous blood collected from patients with sickle cell anemia (SS) were analyzed. In order to evaluate the protective action of the vitamins C and E in oxidative stress, erythrocytes were treated with antioxidant substances, vitamin C and vitamin E, and then treated with the oxidant tert-butilhydroperoxide (TBHP). The oxidative action induced by TBHP was observed in erythrocytes AA

Citologia em meio líquido para exame de citologia cérvico-vaginal. Estudo comparativo sobre a atividade fixadora de etanol e de formaldeído / The use of formaldehyde and ethanol as fixative agents in the liquibased cytology tecnique for performing cervical cytology exames(paptest)

A citologia em meio liquído tem sido considerada importante alternativa para o ganho de sensibilidade do exame de papanicolaou. Este trabalho teve o objetivo de estudar variações no método de citologia em meio líquido. Foram coletadas...

Effect of vitamins C and E on oxidative processes in human erythrocytes.

The oxidative action of 1 mmol l(-1) phenylhydrazine hydrochloride (PH) was studied on human erythrocytes treated with the antioxidants vitamin C (vit. C) and vitamin E (vit. E). The erythrocytes were resuspended in PBS to obtain 35% cell packed volume, and then submitted to the oxidative action of PH for 20 min, with or without previous incubation for 60 min with vit. C or vit. E. Heinz bodies and methemoglobin formation by PH were inhibited in the presence of vit. C. At the concentration of 90 mmol l(-1), vit. C, not only seemed to lose its antioxidant effect, but it also promoted an increase in methemoglobin formation. Vit. C (0.5-80 mmol l(-1)) did not protect against GSH depletion by PH. Vit. C alone produced insignificant hemolysis, but, in the presence of PH, the hemolysis indices were more accentuated. Heinz body formation by PH was inhibited in the presence of vit. E. Formation of methemoglobin induced by PH was decreased by vit. E (0.1-2 mmol l(-1)), although vit. E (3-80 mmol l(-1)) did not lower the concentration of methemoglobin and did not lead to the recovery of the GSH depleted by PH. The results obtained suggest that vit. C and vit. E contribute to the decrease in oxidative stress caused by PH.

Método de papanicolaou em material cérvico-vaginal para a triagem de infecção por Candida sp., Trichomonas vaginalis e Chlamydia trachomatis / Papanicolaou method in cervical smears to diagnosis of Candida sp., Trichomonas vaginallis and Chlamydia trachomatis infections

O método de Papanicolaou, utilizado na triagem para a detecção do câncer cervical, pode ser relevante para o diagnóstico das doenças sexualmente transmissíveis (DST). O objetivo deste estudo é verificar se o mesmo é útil para a detecção de alguns agentes etiológicos de DST. Examinou-se a secreção vaginal e o raspado cérvico vaginal de 223 mulheres atendidas na Unidade de saúde Jardim Santos Andrade, Curitiba - PR, pelo método do Papanicolaou e por cultura para Candida sp, por exame a fresco para T. vaginallis e por imunofluorescência direta para C. trachomatis. Para a detecção de Candida sp, o método de Papanicolaou apresentou sensibilidade e especificidade de 23,3% e 96,8%, respectivamente, em relação à cultura, mas apresentou concordância de 86,3% com o método de Gram. A sensibilidade e especificidade do método Papanicolaou para o diagnóstico de T. vaginallis foram, respectivamente, 60 e 99,5% em relação ao exame a fresco. A presença de inclusões eosinofílicas, usualmente em células metaplásicas, em 3,7% dos esfregaços cervicais, foi critério sugestivo de infecção por C. tracomatis, com sensibilidade e especificidade de 37,5% e 100%, respectivamente, em relação à imunofluorescência direta. O método de Papanicolau foi específico na detecção de infecção pelos agentes estudados, porém limitado quanto à sensibilidade. A análise de resultados obtidos sugere que o exame de Papanicolaou pode contribuir na detecção de casos de DST.

Programa de controle da qualidade externo em hematologia: variações interlaboratoriais para eritrograma e plaquetas em Curitiba e Região Metropolitana, PR / External quality control program in hematology: interlaboratory variability for red blood cell and platelets values in Curitiba and Metropolitan Area, PR, Brazil

A padronização e o controle de qualidade representam elementos imprescindíveis para a rotina laboratorial. Este projeto teve como objetivo analisar a variabilidade interlaboratorial, a partir da distribuição de amostras preservadas para os valores de eritrograma e contagem de plaquetas. Foram preparadas amostras estáveis para eritrograma e contagem de plaquetas a partir de unidades de sangue venoso de 3 doadores, coletadas no Banco de Sangue do Hospital de Clínicas da UFPR. Os eritrócitos e as plaquetas foram isolados e ressuspensos em meio CE após fixação parcial com glutaraldeído (leonart et al. Rev. Brasil. Anal. Clin. 21: 111, 1989; Emendorfer et al Rev. Bras. Anal. Clin. 32: 191, 2000), para amostras controle altas, médias e baixas. Distribuiu-se alíquotas a 14 Laboratórios de Análises Clínicas de Curitiba e Região Metropolitana, que determinaram que os valores do eritrograma e plaquetas, semanalmente, empregando os equipamentos T890 e STKS (Coulter), Cell Dyn 1400,1700 e 3500 (Abbott) ou Sysmex (Roche). Verificou-se o desempenho dos laboratórios por meio dos gráficos de controle de qualidade, determinando-se a frequência de resultados de fora dos limites controle. Observou-se menor ocorrência desses limites para os laboratórios que realizavam controle de qualidade externo e interno, e uma correlação aceitável entre os resultados obtidos com os equipamentos empregados. Tais resultados incentivam a utilização de sistemas de qualidade para assegurar a padronização das técnicas e garantir o controle de qualidade nos Laboratórios e Análises Clínicas.

Eletroforese de proteínas de membrana eritrocitária no diagnóstico de doença hemolítica por defeito de membrana / Electrophoresis of erythrocyte membrane and hemolytic diseases caused by membrane abnormalities

A membrana eritrocitária contém as proteínas do citoesqueleto, e proteínas integrais, imersas na bicamada lipídica , todas importantes para a manutenção da integridade e da forma celular. Neste trabalho, estudou-se 14 pacientes portadores de doença hemolítica, atendidos no Centro de Hematologia e Hemoterapia do Paraná (HEMEPAR) em relação a grupo controle de 20 voluntários saudáveis. Amostras de sangue venoso foram coletadas em citrato-fosfato-dextrose (CPD). Após o isolamento das membranas [Dodge et al.,Arch.Biochem.Biophys. 100:199, 1963] e a determinação da concentração de proteínas [Lowry et al., J.Biol.Chem. 193: 265, 1951], as proteínas foram submetidas à eletroforese vertical em SDS-Page [Laemmli, Nature 227: 680, 1970]. Os valores obtidos no grupo controle (porcentagem; n=10), foram: espectrinas = 29,67 ± 4,14; anquirinas = 3,97 ± 1,84; banda 3 = 38,70 ± 4,96; banda 4.1 = 6,79 ± 1,60; banda 4.2 = 5,00 ± 1,43; banda 4.5 = 1,89 ± 0,96; banda 4.9 = 1,83 ± 1,22; banda 5 = 6,54 ± 3,13; banda 6.0 = 2,70 ± 1,24; banda 7.0 = 2,36 ± 1,33. Os valores médios para os portadores de esferocitose foram 24,4 porcento para espectrina e 35,8 porcento para banda 3 (teste t; p<0,05). A observação de esferócitos ou eliptócitos no sangue periférico, associados a um perfil eletroforético com deficiência de espectrina e/ou proteína 3 sugere esferocitose ou eliptocitose hereditária, respectivamente. Portadores assintomáticos de defeitos moleculares de membranas eritrocitária podem ser também detectadas através de SDS-Page.

Análise de amostras preservadas para controle de qualidade em hematologia em laboratórios de análises clínicas de Curitiba e Região Metropolitana, PR / Preserved samples analysis for hematology quality control in clinical laboratories from Curitiba and Metropolitan area, PR, Brazil

Para a obtenção de valores hematológicos confiáveis, é imprescindível o emprego de amostras controle estáveis, como parte de programa de Controle de Qualidade. Esse projeto teve como objetivo analisar a estabilidade de amostras preservadas em hematimetria. Preparou-se amostras estáveis para o eritrograma e plaquetas, a partir de unidade de sangue venoso de 3 doadores, coletadas no Banco de Sangue do Hospital de Clínicas da UFPR. Isolou-se eritrócitos e plaquetas, ressuspendendo-se em meio CE, após fixação parcial com glutaraldeído (Leonart et al., RBAC 21:111, 1989; Emendorfer et al., RBAC 32:192, 2000) para amostras controle altas, médias e baixas. Distribuiu-se alíquotas aos laboratórios participantes, que determinaram os valores do eritrograma e plaquetas semanalmente, empregando os equipamentos T890 e STKS (Coulter), Cell Dyn 1400, 1700 e 3500 (Abbott) ou Sysmex (Roche). Comprovou-se a estabilidade das amostras durante a preservação pelo coeficiente de determinação (r elevado ao quadrado) próximo de zero, cujos valores foram comparados nas amostras controle altas, médias e baixas como medida de tendência central e de dispersão. A comparação dos valores médios de r elevado ao quadrado para as medidas hematimétricas em função do tempo mostrou que não há diferença estatisticamente significativa entre as amostras controle (p>0,05). As amostras controle médias mostraram menor dispersão em torno da média que as amostras-controle altas e baixas para eritrócitos, hemoglobina e VG (p<0,05). A partir dos resultados obtidos pode-se sugerir que a amostra-controle média resulta em menor variabilidade dos dados durante o armazenamento, e que as amostras analisadas apresentaram estabilidade adequada para uso em controle da qualidade em hematologia.

Estudos sobre a variaçäo interobservadores em citologia cérvico-vaginal / Inter-observer studies variation in cervical smear cytological examinations

O carcinoma de colo de útero tem sido extensivamente estudado em relaçäo à sua etiologia. O acesso aos métodos diagnósticos , devido a sua localizaçäo anatômica, torna este tipo de neoplasia facilmente controlável, e mesmo prevenível. Semelhanças epidemiológicas entre as displasias e os carcinomas cervicais reforçam o conceito de que se trata de estágios de um mesmo processo patológico. O exame citológico de Papanicolaou se constitui em uma arma poderosa para a diminuiçäo da morbidade e mortalidade por carcinoma cervical. Neste trabalho, foram analisadas 40 lâminas de material cérvico-vaginal, coradas pelo método de Papanicolaou, por 3 observadores, sem que cada um tivesse conhecimento prévio sobre os resultados obtidos pelos outros dois. Foram estabelecidos 18 critérios morfológicos em graus leve, moderado e acentuado, priorizando-se relaçäo núcleo/citoplasma, irregularidade da cromatina, hipercromasia do núcleo e irregularidade do contorno nuclear, para displasia ou carcinoma e, adicionalmente, presença de espaços vazios no núcleo, formas celulares aberrantes, nucléolos aberrantes e diátese tumoral, para carcinoma. A sugestäo final do diagnóstico variou entre lesäo intra-epitelial de baixo grau (LSIL) ou displasia leve; lesäo intra-epitelial de alto grau (HSIL) discriminada como displasia moderada, displasia acentuada ou carcinoma epidermóide in situ; carcinoma epidermóide invasor e, em alguns casos, adenocarcinoma. As variaçöes entre observadores obtidas mostraram concordância, para a maioria das amostras, näo só com relaçäo aos graus conferidos aos critérios morfológicos empregados, como também aos diagnósticos sugeridos. Em quase todas as situaçöes em que houve discordância, as diferenças foram apenas um patamar, ou seja, entre displasia leve e displasia moderada ou entre displasia acentuada e carcinoma in situ. Os resultados obtidos sugerem que o exame citológico de material cérvico-vaginal, se baseado em critérios morfológicos bem definidos, apresenta variaçöes e aceitáveis observadores, e que pode contribuir de forma segura para o diagnóstico.

Meio CE e glutaraldeído na preservaçäo de plaquetas para o controle de qualidade em hematimetria / CE medium and gluutaraldehyde in platelets preservation for control quality in hematology

Controles comerciais para todas as medidas hematológicas só se tornaram disponíveis no início da década de 60, sendo que ainda há falta de padronizaçäo apropriada para diversas medidas envolvendo componentes celulares. As amostras comerciais de células consistem de células de sangue humano ou de outros animais, alteradas para retardar a deterioraçäo. De um modo geral, os fabricantes utilizam para essas células os termos: fixadas, tamponadas, estabilizadas ou preservadas, para indicar o seu processo de preparo, sem contudo descrevê-lo. Em trabalhos anteriores, desenvolveu-se amostras adequadas ao controle de qualidade em hematimetria, estáveis para os valores do eritrograma durante 100 dias, pela preservaçäo de eritrócitos em meio CE, composto por glicose, NaCl, citrato de sódio, fosfato monohidrógeno de sódio, KCl, EDTANa2, albumina bovina, clormicetina, neomicina e cortisona e pela fixaçäo parcial com glutaraldeído [ Leonart, Rev. Bras. Anál. Clín. 21: 111, 1989 ]. O uso de soluçöes aditivas para o armazenamento de concentrados de plaquetas tem aumentado durante os últimos anos e se tornado frequente na prática clínica. Em testes preliminares, realizados com o meio CE para a preservaçäo de plaquetas humanas, observamos estabilidade para a sua contagem durante até 35 dias [ Emendörfer et al, Rev. Bras. Anál. Clín. 31:18, 1999]. A partir de 20 amostras de sangue venoso em EDTAK2 e da obtençäo do plasma rico em plaquetas, testou-se a fixaçäo parcial em glutaraldeído, com posterior ressuspensäo das plaquetas em meio CE, obtendo-se valores estáveis para contagem em Coulter Counster T890 durante até 50 dias. Foram estudadas modificaçöes na composiçäo do meio CE nas concentraçöes de 1 a 6 g/gL de albumina bovina, obtendo-se maior estabilidade para as amostras de plaquetas preservadoras na concentraçäo de 6 g/dL, como empregada no meio CE original. No entanto, em amostras fixadas com glutaraldeído näo se observou diferenças na contagem das plaquetas durante 50 dias, independentemente da concentraçäo de albumina bovina. Os resultados obtidos sugerem que a fixaçäo parcial com glutaraldeído pode ser adequada para a estabilizaçäo de plaquetas em amostras de controle de qualidade.