Phenylalanine removal effect on the peptide profile of hydrolyzed protein from wheat flour / Efeito da remoção de fenilalanina sobre o perfil peptídico de hidrolisados proteicos da farinha de trigo

The effect of phenylalanine removal on the peptide profile of the protein hydrolysates from wheat flour wasinvestigated. Nine hydrolysates were prepared, using a successive association of a pancreatin and a crudeenzymatic extract obtained from pineapple peel (CE), and the effect of the order of enzymes addition, thereaction temperature, the enzyme: substrate (E:S) ratio, and the physical treatment of sample were examined.The analysis of peptide profile of hydrolysates was performed in two stages, that is before and after removingphenylalanine. The size-exclusion high performance liquid chromatography was used for performing thefractionation, followed by Correct Fraction Area technique for quantifying peptides and free amino acids.The process of phenylalanine removal improved the peptide profile of three hydrolyzed samples, but it didnot affect the five hydrolysates. The beneficial effect of this process is correlated with the increase of di- andtripeptides contents, or in reducing the amount of large peptides. The best peptide profile was obtainedafter phenylalanine removal by using pancreatin at E:S ratio of 4:100 at 50ºC for 210min, followed by CEat E:S ratio of 10:100 at 70ºC for 90 min.

Para avaliar o efeito da remoção de fenilalanina no perfil peptídico dos hidrolisados proteicos de farinhade trigo, foram preparados nove hidrolisados empregando-se a associação sucessiva de pancreatina e deextrato enzimático bruto obtido da casca de abacaxi (EB). Foram testados o efeito da ordem de adição dasenzimas, da temperatura de reação, da relação enzima: substrato (E:S) e do tratamento físico da amostra.A análise do perfil peptídico dos hidrolisados foi realizada em duas etapas: antes e após a remoção dafenilalanina. A cromatografia líquida de alta eficiência de exclusão molecular foi utilizada para efetuaro fracionamento e a quantificação dos peptídeos e aminoácidos livres pela técnica da Área Corrigida daFração. O processo de remoção de fenilalanina melhorou o perfil peptídico de três hidrolisados, mas nãoafetou no de cinco hidrolisados. O efeito benéfico desse processo está associado ao aumento no teor dedi- e tripeptídeos ou à redução na quantidade de peptídeos grandes. O melhor perfil peptídico foi obtidoapós a remoção de fenilalanina, utilizando-se pancreatina E:S de 4:100 a 50C, durante 210 min, seguidade EB E:S de 10:100 a 70C durante 90 min.

Single-laboratory validation of a quantitative methodology for determination of L-phenylalanine in wheat flour by second derivative spectrophotometry / Validação intralaboratorial de metodologia quantitativa para determinação de L-fenilalanina em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda

The aim of this paper was the validation of a methodology for determination of L-phenylalanine (Phe) in wheat fl our by second derivative spectrophotometry. For this purpose, 0.525g of wheat flour was hydrolyzed with HCl 5.7 mol/L at 110C for 24 h. This material was diluted to 50 mL with 0.1 mol/L sodium phosphate buffer, pH 7.0. The solutions prepared from this hidrolyzed were measured on UV/VIS spectrophotometer at wavelength range from 230 nm to 280 nm. The second derivative spectrophotometrys spectra were plotted and the values of the negatives peaks areas were used for estimating the Phe contents. Linearity was demonstrated in the range of 0.010 mg/mL to 0.035 mg/mL (corresponding to 251 mg/100g to877 mg/100g of Phe in flour). Matrix effects were observed. The Phe determination was not affected by similar compounds such as L-tyrosine and L-tryptofan. The recoveries ranged from 81 % to 118 % and the relative standard deviation under repetitivity and within-reproducibility conditions were 11 % and 15 %, respectively, for samples at 354 mg/100g, showing the adequate recovery and precision of the methodology. The limits of detection and quantification were 63 mg/100gand 175 mg/100g, respectively. The studied parameters indicated that this methodology is suitable for monitoring and controlling of Phe contents in wheat flour.

O objetivo deste trabalho foi validar um método quantitativo para determinação de L-fenilalanina (Fen) em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda. A amostra de farinha de trigo, na quantidade de 0,525g, foi submetida à hidrólise ácida com HCl a 5,7 mol/L, a 110 C, por 24 h. O material hidrolisado foi reconstituído para 50 mL com tampão fosfato de sódio a 0,1 mol/L, pH 7,0. As soluções preparadas a partir dessa amostra foram submetidas às leituras de absorvância, entre 230 nm e 280 nm, em espectrofotômetro UV/VIS. Os espectros de derivada segunda foram traçados e os valores das áreas dos picos negativos foram utilizados para estimar os teores de Fen. A linearidade do método foi demonstrada na faixa de 0,010 mg/mL a 0,035 mg/mL (correspondente a teores de 251 mg/100g a 877 mg/100g de Fen em farinha de trigo). Efeitos de matriz foram observados. A determinação de Fen não sofreu interferência de compostos como L-tirosinae L-triptofano. As porcentagens de recuperação variaram de 81 % a 118 % e os desvios padrão relativos de repetitividade e reprodutibilidade parcial foram respectivamente 11 % e 15 %, para amostras contendo 354 mg/100g, demonstrando adequada recuperação e precisão do método. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 63 mg/100ge 175 mg/100g. Os parâmetros de desempenho estudados indicaram adequação do método para o monitoramento