Effect of catalase, superoxide dismutase and reduced glutathione in LDL extender on ovine cryopreserved sperm viability / Efeito da catalase, superóxido dismutase e glutationa reduzida em diluidor contendo lipoproteínas de baixa densidade na viabilidade de espermatozoides ovino criopreservados

The aim of this study was to evaluate the motility, kinetics and membrane integrity of ovine sperm cryopreserved in extenders containing 8% LDL with enzymatic antioxidants at different concentrations. Four Santa Inês rams were used to form four pools of semen (each pool containing ejaculates from four ram, totaling four ejaculates per animal). Each seminal pool was divided into eight aliquots for the following treatments: 1) Tris-glucose-glycerol (TGG) + (16%) egg yolk (control 1); 2) TGG + 8% (w/v) LDL (control 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 10 mM. The samples were packed into 0.25 mL straws, cooled (-0.25 C/ min), maintained at 5 C for 2 h and then frozen (-25 C/ min) using a TK4000®. Immediately after thawing (38 C/ 30 s), sperm motility and movement characteristics were assessed by computer sperm analysis (CASA). The structural integrity of the plasma and acrosomal membranes was analyzed using fluorescent dyes. The functional integrity of membranes was assessed using a hypoosmotic swelling test. As assessed by ANOVA, significant differences (P 0.05) among treatments were only observed for VCL, VSL and VAP. For the VCL variable, the 2, 3, 4...(AU)

Objetivou-se avaliar a motilidade, cinética e integridade das membranas de espermatozoides ovinos criopreservados em diluidores contendo 8% de LDL com antioxidantes enzimáticos em diferentes concentrações. Quatro carneiros da raça Santa Inês foram utilizados para formar quatro pools de sêmen (cada pool contendo ejaculados provenientes dos quatro carneiros, totalizando quatro ejaculados por animal). Cada pool de sêmen foi dividido em oito alíquotas para os seguintes tratamentos: 1) Tris-glicose-glicerol (TGG) + (16%) gema de ovo (controle 1); 2) TGG + 8% (g/L) LDL (controle 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 10 mM. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 mL, resfriadas (-0,25 C/min), mantidas a 5 C por duas horas e em seguida congeladas (-25 C/ min) usando uma máquina de congelar TK4000®. Imediatamente depois da descongelação (38 C/30 s), as amostras foram submetidas à análise computadorizada (CASA) para avaliação da motilidade e cinética. A integridade estrutural das membranas plasmática e acrossomal foi analisada utilizando corantes fluorescentes. A integridade funcional das membranas foi avaliada utilizando o teste hiposmótico. Como...(AU)

Low density lipoproteins added to an extender frozen or lyophilized are evenly efficient in cryoprotecting ovine sperm cells than when 16% whole egg yolk was added / Lipoproteínas de baixa densidade em meio diluidor congelado ou liofilizado exerce o mesmo efeito crioprotetor aos espermatozoides ovinos que meio contendo 16% de gema de ovo

The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40C/min from 5 to 140C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did.(AU)

O objetivo deste trabalho foi testar para criopreservação de sêmen ovino diferentes concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em substituição à gema de ovo em meios diluidores, armazenados na forma aquosa e liofilizada, utilizando-se duas curvas de congelação (-40C/min de 5 à 140C ou vapor de nitrogênio). Os ejaculados de seis carneiros da raça Santa Inês foram fracionados e distribuídos em nove tratamentos, sendo o primeiro o meio controle (Tris-gema 16%) e os demais meios Tris contendo lipoproteínas de baixa densidade nas concentrações de 2, 4, 6 e 8% (v/v), criopreservados tanto na forma aquosa quanto liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100 x 106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25 mL. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e cinética espermática (CASA), morfologia e longevidade espermáticas, além da integridade funcional (HOST) e estrutural (CFDA/IP) das membranas. O delineamento experimental foi blocos ao acaso e os resultados foram submetidos a ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Quanto aos parâmetros de motilidade progressiva e integridade funcional e estrutural da membrana, todos os tratamentos testados foram similares (P>0,05). Quanto às velocidades do movimento espermático, o meio controle obteve alguns valores similares aos meios contendo LBD, tanto na forma aquosa quanto liofilizada (P>0,05). Não houve diferenças entre curvas de congelação. Dessa forma, é possível concluir que os meios contendo todas as concentrações de LBD, aquosa ou liofilizada, foram igualmente capazes de proteger as células espermáticas de ovinos, durante o processo de criopreservação, tanto quanto o meio contendo gema de ovo total.(AU)

Low density lipoproteins added to an extender frozen or lyophilized are evenly efficient in cryoprotecting ovine sperm cells than when 16% whole egg yolk was added / Lipoproteínas de baixa densidade em meio diluidor congelado ou liofilizado exerce o mesmo efeito crioprotetor aos espermatozoides ovinos que meio contendo 16% de gema de ovo

The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40C/min from 5 to 140C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did.

O objetivo deste trabalho foi testar para criopreservação de sêmen ovino diferentes concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em substituição à gema de ovo em meios diluidores, armazenados na forma aquosa e liofilizada, utilizando-se duas curvas de congelação (-40C/min de 5 à 140C ou vapor de nitrogênio). Os ejaculados de seis carneiros da raça Santa Inês foram fracionados e distribuídos em nove tratamentos, sendo o primeiro o meio controle (Tris-gema 16%) e os demais meios Tris contendo lipoproteínas de baixa densidade nas concentrações de 2, 4, 6 e 8% (v/v), criopreservados tanto na forma aquosa quanto liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100 x 106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25 mL. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e cinética espermática (CASA), morfologia e longevidade espermáticas, além da integridade funcional (HOST) e estrutural (CFDA/IP) das membranas. O delineamento experimental foi blocos ao acaso e os resultados foram submetidos a ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Quanto aos parâmetros de motilidade progressiva e integridade funcional e estrutural da membrana, todos os tratamentos testados foram similares (P>0,05). Quanto às velocidades do movimento espermático, o meio controle obteve alguns valores similares aos meios contendo LBD, tanto na forma aquosa quanto liofilizada (P>0,05). Não houve diferenças entre curvas de congelação. Dessa forma, é possível concluir que os meios contendo todas as concentrações de LBD, aquosa ou liofilizada, foram igualmente capazes de proteger as células espermáticas de ovinos, durante o processo de criopreservação, tanto quanto o meio contendo gema de ovo total.

Effect of catalase, superoxide dismutase and reduced glutathione in LDL extender on ovine cryopreserved sperm viability / Efeito da catalase, superóxido dismutase e glutationa reduzida em diluidor contendo lipoproteínas de baixa densidade na viabilidade de espermatozoides ovino criopreservados

The aim of this study was to evaluate the motility, kinetics and membrane integrity of ovine sperm cryopreserved in extenders containing 8% LDL with enzymatic antioxidants at different concentrations. Four Santa Inês rams were used to form four pools of semen (each pool containing ejaculates from four ram, totaling four ejaculates per animal). Each seminal pool was divided into eight aliquots for the following treatments: 1) Tris-glucose-glycerol (TGG) + (16%) egg yolk (control 1); 2) TGG + 8% (w/v) LDL (control 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 10 mM. The samples were packed into 0.25 mL straws, cooled (-0.25 C/ min), maintained at 5 C for 2 h and then frozen (-25 C/ min) using a TK4000®. Immediately after thawing (38 C/ 30 s), sperm motility and movement characteristics were assessed by computer sperm analysis (CASA). The structural integrity of the plasma and acrosomal membranes was analyzed using fluorescent dyes. The functional integrity of membranes was assessed using a hypoosmotic swelling test. As assessed by ANOVA, significant differences (P 0.05) among treatments were only observed for VCL, VSL and VAP. For the VCL variable, the 2, 3, 4...

Objetivou-se avaliar a motilidade, cinética e integridade das membranas de espermatozoides ovinos criopreservados em diluidores contendo 8% de LDL com antioxidantes enzimáticos em diferentes concentrações. Quatro carneiros da raça Santa Inês foram utilizados para formar quatro pools de sêmen (cada pool contendo ejaculados provenientes dos quatro carneiros, totalizando quatro ejaculados por animal). Cada pool de sêmen foi dividido em oito alíquotas para os seguintes tratamentos: 1) Tris-glicose-glicerol (TGG) + (16%) gema de ovo (controle 1); 2) TGG + 8% (g/L) LDL (controle 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 10 mM. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 mL, resfriadas (-0,25 C/min), mantidas a 5 C por duas horas e em seguida congeladas (-25 C/ min) usando uma máquina de congelar TK4000®. Imediatamente depois da descongelação (38 C/30 s), as amostras foram submetidas à análise computadorizada (CASA) para avaliação da motilidade e cinética. A integridade estrutural das membranas plasmática e acrossomal foi analisada utilizando corantes fluorescentes. A integridade funcional das membranas foi avaliada utilizando o teste hiposmótico. Como...

Parámetros metabólicos séricos y condición corporal durante el pre y posparto en vacas Brahman: Serum Metabolic Parameters and Body Condition During Pre and Postpartum in Brahman Cows

Con el objeto de describir los cambios en el metabolismo energético desde un mes antes del parto hasta un mes postparto y su relación con posibles cambios en la condición corporal (CC), se seleccionaron 20 vacas Brahman de la zona del Magdalena Medio, Colombia. A cada vaca se le tomaron 10 mL de sangre mediante Vacutainer® a las cuatro semanas antes del parto y cuatro semanas postparto. La concentración de glucosa, triglicéridos, colesterol total, lipoproteínas de alta densidad (HDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL), lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y CC, fueron evaluadas. Las veinte vacas fueron distribuidas en dos grupos: Grupo 1: ≤ 7 CC y Grupo 2: ≥ 8 CC. Los resultados fueron analizados mediante análisis de varianza y la prueba de Duncan. Se registró un descenso significativo (P<0,05) en los valores de glucosa y altamente significativo (P<0,005) en la fracción lipoprotéica HDL, siendo más notorio en hembras de menor CC; además de un aumento altamente significativo (P<0,005) en las concentraciones de la fracción LDL en las hembras de mayor CC. En los demás parámetros no se apreciaron cambios significativos. Se concluye que las hembras de cría Brahman objeto del estudio sufren un balance energético negativo moderado, que no compromete en mayor grado las reservas energéticas del organismo, debido a los bajos promedios de producción láctea y al adecuado aporte nutricional, notándose mayor dificultad para compensar el déficit energético en las hembras de menor CC.

To describe the changes in the energy metabolism from one month prior to calving up and one month postpartum and its relation with possible body condition changes, twenty Brahman cows were selected from Magdalena Medio, in Colombia. Venous blood samples (10 mL) using Vacutainer® system were taken four weeks prior to calving and four weeks postpartum. Glucose, triglycerides, total cholesterol concentrations, High-density lipoproteins (HDL), Low-density lipoprotein (LDL), Very Low-Density Lipoprotein (VLDL) and body condition (BC) were evaluated. Twenty cows were distributed in two groups (1: ≤ 7 BC and 2: ≥ 8 BC). The results were analyzed using analysis of the variance and Duncan test. It was observed significant reduction (P<0.05) in the glucose values and highly significant (P<0.005) in HDL Lipoprotein fraction more visible in low BC cows. In addition highly significant increase (P<0.005) in LDL fraction concentrations, more visible in High BC cows. In the others parameters no were appreciated significant changes. In conclusion, Brahman cows of this study showed a moderate negative energy balance that doesn’t affect the energy body reserves due to low milk production and adequate nutrition. Brahman cows with loss of body condition during the experimental period (≤ 7) presented more problems to obtain energy balance.

Efecto de la sincronización del estro con prostaglandina-f2a vs CIDR + 500 UI de eCG en ovejas bergamacia durante el inicio de la fase luteal / Effect of estrus synchronization with prostaglandins-F2a vs CIRD + 500 IU of eCG in bergamacia ewes during early luteal phase

Con el objeto de evaluar los efectos de la sincronización del estro con PGF2a vs CIDR + 500 UI de eCG, sobre el tiempo de presentación de estro, ovulación y las concentraciones plasmáticas de hormonas esteroidales durante el inicio de la fase luteal en ovejas, se seleccionaron 14 hembras Bergamacia distribuidas en dos grupos: el Grupo uno (Control), sometido a dos aplicaciones de prostaglandina-F2a (PG), con un intervalo de nueve días, y el Grupo dos, tratado con el dispositivo intravaginal impregnado con progesterona (CIDR) durante 12 días y 500 UI de eCG. La presentación del estro fue de 100%. Entretanto, el intervalo estro-ovulación fue de 36,0 ± 0,72 horas en el grupo dos. El grupo control tratado con PG presentó un intervalo estro-ovulación de 53,42 ± 3,0 horas (P<0,001). Hubo diferencia significativa (P<0,01) en las concentraciones plasmáticas de P4 entre los tratamientos. Los animales del Grupo dos presentaron aumentos significativos (P < 0,01) en las concentraciones plasmáticas de P4, desde el sexto hasta el décimo día después de la ovulación, comparados con las concentraciones de los animales control. Del mismo modo, también se constató una diferencia significativa en la interacción tratamiento y día (P< 0,05). Las concentraciones de E2 en el plasma sanguíneo fueron estadísticamente diferentes (P< 0,001) entre el grupo control y el grupo sincronizado con el CIDR + eCG. Fueron observadas diferencias significativas (P< 0,001) en las concentraciones plasmáticas de E2 entre los tratamientos después del día ovulatorio (día cero), siendo además constatada diferencia significativa entre los días (P< 0,001) y en la interacción tratamiento y día (P< 0,05). Se puede concluir que, la sincronización del estro en hembras Bergamacia, utilizando el CIDR + eCG disminuyó el intervalo estro-ovulación y provocó aumento de las hormonas esteroidales en plasma.

An experiment was conducted to investigate the effects of estrous synchronization with PGF2a vs cidr + 500 IU of eCG on interval to estrus, ovulation and steroidal hormones plasma concentrations during early luteal phase in sheep. Fourteen ewes were treated, distributed in two groups: Group 1 (Control), synchronized with two injections of prostaglandin-F2a (PG), given 9 days apart, and Group 2, was treated with CIDR for 12 days and 500 IU of eCG. Estrous presentation was 100%. The interval estrus-ovulation was 36.0 ± 0.72 h in Group two. The control group presented an interval estrus-ovulation of 53.42 ± 3.0 hours (P<0.001).There were significant difference (P < 0.01) in P4 plasma concentrations among treatments. In Group 2, the animals showed significatives increases (P < 0.01) in P4 plasma concentrations during day 6 until day 10 when compared with control animals. It was observed significative difference at interaction treatment by day (P < 0.05). E2 plasma concentrations were statistically differents (P < 0.001) among control group and synchronized group with CIDR + eCG. There were significant difference (P < 0.001) in E2 plasma concentrations among treatments after ovulation day (Day 0) with significative difference among days (P < 0.001) and interaction treatment x day (P < 0.05). These results indicated that estrous synchronization in Bergamacia females, using CIDR + eCG diminished interval estrus-ovulation and elicit higher levels of steroidal hormones in plasma.