ABSTRACT
Macrophages respond to endogenous and non-self stimuli acquiring the M1 or M2 phenotypes, corresponding to classical or alternative activation, respectively. The role of B-1 cells in the regulation of macrophage polarization through the secretion of interleukin (IL)-10 has been demonstrated. However, the influence of B-1 cells on macrophage phenotype induction by an immunogen that suppress their ability to secrete IL-10 has not been explored. Here, we studied the peritoneal macrophage pattern induced by liposomes comprised of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and cholesterol (Chol) carrying ovalbumin (OVA) (Lp DPPC/OVA), and the involvement of B-1 cells in macrophage polarization. Peritoneal cells from BALB/c, B-1 cells-deficient BALB/xid and C57BL/6 mice immunized with Lp DPPC/OVA and OVA in soluble form (PBS/OVA) were analyzed and stimulated or not in vitro with lipopolysaccharide (LPS). Peritoneal macrophages from BALB/c and C57BL/6 mice immunized with Lp DPPC/OVA showed an M2-like phenotype as evidenced by their high arginase activity without LPS stimulation. Upon stimulation, these macrophages were reprogrammable toward the M1 phenotype with the upregulation of nitric oxide (NO) and a decrease in IL-10 secretion. In addition, high IFN-γ levels were detected in the culture supernatant of peritoneal cells from BALB/c and C57BL/6 mice immunized with Lp DPPC/OVA. Nevertheless, still high levels of arginase activity and undetectable levels of IL-12 were found, indicating that the switch to a classical activation state was not complete. In the peritoneal cells from liposomes-immunized BALB/xid mice, levels of arginase activity, NO, and IL-6 were below those from wild type animals, but the last two products were restored upon adoptive transfer of B-1 cells, together with an increase in IFN-γ secretion. Summarizing, we have demonstrated that Lp DPPC/OVA induce an M2-like pattern in peritoneal macrophages reprogrammable to M1 phenotype after LPS stimulation, with the involvement of B-1 cells.
Subject(s)
B-Lymphocytes/immunology , Cholesterol/pharmacology , Liposomes/pharmacology , Macrophages, Peritoneal/immunology , Ovalbumin/pharmacology , 1,2-Dipalmitoylphosphatidylcholine/pharmacology , Adoptive Transfer , Animals , Arginase/biosynthesis , B-Lymphocytes/transplantation , Cell Proliferation/drug effects , Cells, Cultured , Drug Carriers/pharmacology , Interferon-gamma/biosynthesis , Interleukin-10/metabolism , Interleukin-12/biosynthesis , Interleukin-6/biosynthesis , Lipopolysaccharides/immunology , Macrophage Activation/immunology , Macrophages, Peritoneal/cytology , Male , Mice , Mice, Inbred BALB C , Mice, Inbred C57BL , Mice, Transgenic , Nitric Oxide/biosynthesis , Phenotype , Phosphatidylcholines/pharmacologyABSTRACT
Se determinó la influencia de la composición fosfolipídica sobre la eficiencia de encapsulación de las siguientes proteínas recombinantes: factor de crecimiento epidérmico(EGF), P64K y el conjugado de ambas en liposomas obtenidos mediante el procedimiento tecnológico de congelación-descongelación. Se determinó además, la estabilidad de estos preparados durante el almacenamimento a 4 grados céntigrados. Se prepararon liposomas de dipalmitoi fosfatidilcolina, diesteaoril fosfatidilcolina y fosfatidilcolina de yema de huevo en todos los casos, con colesterol en proporción molar 1:1. Estos liposomas contenían al EGP y la P64K marcadas con I 125 o el conjugado marcado en la molécula del factor de crecimento. La capacidad de las vesículas liposomales para retener su contenido dependió no sólo de la composición fosfolipídica, en términos de su temperatura de transición, sino también de la naturaleza del soluto encapsulado. El EGP fue la entidad molecular que experimentó una mayor liberación de los liposomas al medio acuoso. Las vesículas de dipalmitoil fosfatidilcolina: colesterol resultaron las más estables en cuanto a su capacidad de retención de las proteínas recombinantes mientras que el conjugado se comportó como una entidad molecular diferente, al menos en relación a la composición fosfolipídica requerida para alcanzar una mayor estabilidad de los liposomas que lo contienen. La adicción de sacarosa, trealosa, maltosa o glucosa a las vesículas de fosfatidilcolina de yema de huevo: colesterol redujo notablemente la salida de EGP, independiente del tipo de azúcar empleado, en comparación con aquellas vesículas preparadas en ausencia de azúcares(AU)
