ABSTRACT
La serpiente Bothrops atrox, que habita en la Selva Amazónica del Perú, es responsable de mayor número de accidentes ofídicos y constituye un problema de salud publica. Por esta razón, se ha realizado un estudio de las variaciones en la composición y actividad del veneno en tres grupos de especímenes en cautiverio, que corresponden a juveniles de 1 y 2 años, así como ejemplares adultos mayores de 5 años. Los venenos obtenidos fueron liofilizados para su conservación y diluidos en concentraciones iniciales de 1 mg/ml en solucion salina o en el buffer apropiado. Con estas muestras se efectuaron los análisis de concentración de proteínas por D. O. 280 nm y por el método de Lowry, determinándose además el número de bandas proteicas por electroforesis en gel poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (PAGE_SDS). Con las mismas muestras se hicieron ensayos para medir las siguientes actividades enzimáticas. Caseínolítica, amidolíitca, coagulante, hialuronidasa, L- aminoácido oxidasa (LAO) y fosfolipasa A2. Adicionalmente se determinó la actividad hemorrágica y el efecto edemático con ratones albinos. Los resultados mostraron que la mayor concentración proteica (0,938 mg de proteína / mg de veneno) así como el número máximo de bandas proteicas (8 bandas) se obtuvieron con los venenos de juveniles de 2 años. Asimismo se encontró que algunas actividades enzimáticas como la amidolítica, fosfolipásica y L-aminoácido oxidasa fueron más altas en los juveniles de 2 años, además de los efectos hemorrágico y edemático. En cambio, las actividades coagulante y proteolítica sobre caseína se elevaron progresivamente con la edad de los ejemplares. Sin embargo, la enzima hialunonidasa tuvo su máximo valor en los juveniles de 1 año, decreciendo notablemente en los adultos. Es interesante señalar también que foslolipasa A2 en los adultos sólo tuvo una actividad de 6,4 por ciento con respecto al valor más alto encontrado en el veneno de juveniles de 2 años.
Subject(s)
Snake VenomsABSTRACT
A proteolytic enzyme from the venom of Bothrops atrox snake was isolated. It was designed as Atroxin, and three chromatography steps were used to purification: ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex A-50 equilibrated with 0.05 M Tris HCl buffer, 1 mM CaCl2 pH 7.4, followed by gel filtration on Sephadex G-50 and Sephadex G-100, respectively, using the same buffer. The enzyme was recovered with a 7.4 folds and 11% of yield. It had a high activity on casein being 7.4 optimus pH. A molecular weight was 19.9 Kd calculated by polyacrilamide gel electrophoresis, and head treatment showed that the enzyme preserves its activity in the range of 37-45 degrees C, while it was decrease when the temperature values were higher. On the other hand, 0.133 mumoles of Ca2+ and Mg2+, and Zn2+ ions (0.266 mumoles) were activators, while EDTA (0.20 mumoles) and sodium azide (0.053 mumoles) were inhibitors. The enzymatic activity was not affected by glicerol (1.33 mumoles) and phenyl methyl sulphonyl fluoride (PSMF) (0.16 mumoles). In addition, iodoacetic acid (0.08 mumoles) was slight inhibitor, but 0.16 mumoles of p-tosyl-1-lysine chloromethyl ketone (TLCK) was activator. Biological assays on mice showed that atroxin produced hemorrhagic and necrosis after 24 h of injection, which was increased by 5 mM calcium chloride.
