ABSTRACT
Uma linhagem de Bacillus pumilus foi isolada e identificada de amostras de águas coletadas em um pequeno Igarapé do Rio Amazonas. Foi detectada atividade de restrição do tipo II nesta bactéria. A enzima foi purificada e o peso molecular da proteína nativa foi estimado por gel filtração e por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinados, o pH e temperatura ótimos e as necessidades de sais. Os ensaios do controle de qualidade mostraram uma ausência completa de "nucleases não específicas". As analises das clivagens e o seqüenciamento do DNA dos fragmentos de restrição permitiram uma demonstração inequívoca de que 5üLGAG¼CTC 3üL é a seqüência de reconhecimento da enzima. Esta enzima foi denominada de BpuAmI e aparentemente é um neoesquisômero da enzima protótipo SacI. Este é o primeiro relato de um isoesquisômero e/ou neoesquisômero da enzima protótipo SacI identificada no gênero Bacillus.
Subject(s)
Bacillus , Deoxyribonucleases, Type II Site-Specific/analysis , Amazonian Ecosystem , Cell Division , Wetlands , Water SamplesABSTRACT
Bacillus anthracis was isolated and identified from a bacterial collection of samples from the Amazon river bank. Type II restriction endonuclease activity was detected in this prokaryote, the enzyme was purified, the molecular mass of the native protein estimated by gel filtration, and optima pH, temperature and salt requirements were determined. Quality control assays showed complete absence of 'non-specific nucleases'. Restriction cleavage analysis and DNA sequencing of restriction fragments allowed unequivocal demonstration of 5'-GG downward arrow CC-3' as the recognition sequence. This enzyme was named BanAI and is therefore an isoschizomer of the prototype restriction endonuclease HaeIII. This is the first report of a type II restriction endonuclease identified, purified from a natural isolate of B. anthracis.
